与排异反应相关基因克隆及其反义转基因载体构建

目的克隆与排异反应密切相关的iNOS基因cDNA片段,并构建反义转基因载体.方法培养人血管内皮细胞HVEC细胞株,采用反转录-pCR方法获取iNOS cDNA基因片段,并克隆入T载体并进行序列分析.用HindⅢ与BamHI双酶切带有iNOS cDNA片段的T载体质粒与pCDNA5载体,回收酶切产物,连接,转化,提取质粒并酶切鉴定.结果RT-PCR获取了669 bp的iNOS基因片段;序列分析表明克隆的iNOS片段序列正确;双酶切分析显示克隆入pCDNA3载体的iNOS基因片段与预期的大小一致.结论克隆了iNOS基因片段,并构建了iNOS的反义转基因载体.     

多重PCR扩增伤寒杆菌、痢疾杆菌和霍乱弧菌特异基因片段方法的建立

多重ＰＣＲ扩增伤寒杆菌、痢疾杆菌和霍乱弧菌特异基因片段方法的建立肖乐义，阎小君，侯瑜，张瑞骞，苏成芝，郭晏海，李陕区，刘君，陈远鑫（全军基因诊断技术应用研究所西安７１００３３河南省周口地区卫生防疫站）关键词聚合酶链反应；伤寒沙门氏菌；痢疾志贺氏菌；霍...     

大鼠淋巴器官中肥大细胞不同染色方法的比较

肥大细胞是机体组织器官中一种重要的细胞成分 ,含有丰富的酶系和多种生物活性物质。肥大细胞作用广泛 ,参与机体的免疫调节 ,与过敏反应、肿瘤发生等亦有密切关系。不同组织器官中的肥大细胞具有不同的功能 ,因此研究肥大细胞的生物学特性具有重要的理论意义和广泛的应用价值。常规HE染色不能辨别肥大细胞 ,需用特殊染色方法显示。笔者同时应用 3种特殊染色方法对大鼠胸腺、脾和淋巴结内的肥大细胞染色结果进行了比较。1.1　方法与结果1.1　方　法　　选用健康Wistar大鼠 6只 ,体重 (2 0 0± 2 )g ,由本院动物饲养中心提供。大鼠经乙醚麻…     

全自动(定量PCR)基因扩增诊断仪配套定量试剂的研制

目的 研究一种能用于仪器操作的灵敏、快速、特异的定量试剂。方法 使用一个生物素标记的上游引物,对HBV DNA及其竞争模板DNA进行不对称PCR扩增,使扩增出的单链带有生物素,并可结合在固定有链亲合素的微孔板的表面,用标有辣根过氧化物酶的待测模板探针和竞争模板探针分别与两个微孔中固定的相应单链PCR产物杂交,而后加底物显色,测定吸光度进行分级定量分析。结果 该定量方法可以检测10拷贝数的模板,而且对简单处理的标本适应性强;以分级定量的形式定量时,具有良好的重复性。结论 该试剂适用于仪器操作,可对临床血清中HBV DNA进行分级定量分析。     

巢式竞争DNA模板的制备方法

0　引言　我们建立了巢式竞争 PCR定量方法进行血清HBV DNA定量扩增 [1 ] .在该实验中我们采用了简便的长引物引导扩增方法制备了特殊的巢式竞争 DNA模板 .1　材料和方法1. 1　材料　我们对 HBV DNA C区 186 5 - 2 45 8区段进行巢式扩增定量 ,而巢式扩增片段长度为 5 5 9bp.按文献 HBVDNA序列 [2 ] ,用 oligo引物设计软件和 www.ncbi.nlm.nih.gov DNA同源性数据库分析设计巢式引物 .两外侧引物分别为 :b1:(上游 186 5 - 1883) 5′caagcctccaagctgtgcc3′,b2 (下游2 45 8- 2 44 0 ) 5′atactaacattgagattcc 3′;两内侧引物分别为…     

不对称PCR杂交显色方法的建立及其对HBV DNA的检测

目的：建立一种灵敏、快速、特异的检测ＨＢＶ ＤＮＡ ＰＣＲ产物的杂交显色方法．方法：使用一个生物素标记的上游引物对ＨＢＶ ＤＮＡ进行不对称ＰＣＲ扩增,使扩增出的单链带有生物素,并可结合在固定有链亲合素的微孔板表面．用标有辣根过氧化物酶的探针与固定的单链ＰＣＲ产物杂交,而后加底物显色测定吸光值。结果：该方法比常规的琼脂糖凝胶电泳法更特异,而且灵敏度高１０倍￣１００倍,对简便处理的标本适应性强,具有良     

抗原肽冲击树突细胞治疗尖锐湿疣的组织病理学改变

目的 观察持异抗原肽激活的树突细胞免疫治疗,对人乳头瘤病毒感染致复发性生殖器尖锐湿疣的病理学作用。方法 对79例复发3次以上尖锐湿疣患者,按知情同意原则,予抗原肽冲击的树突细胞免疫治疗。治疗前后取疣体,分别行HE及免疫组化染色,镜下观察。结果 抗原肽冲击的树突细胞免疫治疗后,病灶处组织中大量免疫组织浸润,空泡细胞减少,乳头瘤病毒阳性染色强度大大减低或转阴。结论 抗原肽冲击的树突细胞免疫对于改善人乳头瘤病毒反复感染的生死器尖锐湿疣湿疣病变局部免疫状态,清除HPV感染有显著作用。     

多层螺旋CT对胸膜结核瘤的诊断价值

目的探讨多层螺旋CT对胸膜结核瘤的诊断价值,提高对胸膜结核瘤的认识。 方法回顾性分析经临床或手术病理证实的胸膜结核瘤13例的多层螺旋CT表现及后处理图像表现。结果单发胸膜结核瘤10例,多发3例,CT表现为紧贴胸膜并突入肺内的乳头状结节5例,圆形、椭圆形结节6例,不规则形结节2例,多数病灶密度均匀,少数可见低密度坏死区或高密度小钙化灶,病灶边缘光整,增强后病灶多数无强化或轻度强化,邻近胸膜多有局限性增厚、黏连和钙化,9例并有胸腔积液,10例伴有肺内结核灶,7例伴有纵隔淋巴结肿大、钙化。多层螺旋CT后处理图像可更全面的、直观的、立体的显示病变特征。结论MSCT后处理技术弥补了轴位CT图像的不足,在诊断胸膜结核瘤中有很高的临床应用价值,可提高胸膜结核瘤的诊断准确性。     

吗啡 舒芬太尼和地佐辛用于术后自控镇痛效果比较

<正>疼痛是一种复杂的生理、心理活动,是临床上最常见的症状之一。近年来,随着人们对生活质量要求的提高,临床疼痛治疗逐步普及,经静脉自控镇痛技术(PCIA)广泛使用,且所用药物也较多。本文旨在比较吗啡、舒芬太尼和地佐辛用于静脉持续镇痛的效果及安全性。     

瑞芬太尼靶控输注用于清醒电子支气管镜检查的可行性分析

<正>电子支气管镜镜体细、可弯曲、视野范围大、可直接看清至气管的第4级分支,并可以直接吸痰、钳夹咬取组织作病理检查或用毛刷刷出细胞行细胞学检查等优点,操作方便,为目前早期诊断肺癌的重要手段之一。但电子支气管镜检查是一项侵入式检查,检查过程可引起机体短暂而强烈的血压