糖尿病肾病机制的中西医研究进展

<正>糖尿病(DM)是一种常见的代谢紊乱性疾病。据国际DM联盟2011年统计,全球DM患病人数为3.66亿,预计2030年将达到5.52亿。25%⁴0%的DM患者最终发展为DM肾病(DN),DN为DM微血管病变引起,是DM最主要的微血管并发症,也是导致终末期肾病(ESRD)的首要原因〔1〕。目前,现代医学对本病的治疗缺乏特效的药物,仍以降糖、调脂、合理饮食     

尿道致病性大肠埃希菌感染对人膀胱上皮细胞基因表达谱的影响

目的 研究尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)菌株132与人膀胱上皮EJ细胞的相互作用,分析该菌株感染对EJ细胞基因表达谱的改变.方法 UPEC132感染EJ细胞,用倒置显微镜观察细菌与细胞的黏附,计算黏附率,并通过激光共聚焦显微镜观察UPEC132对细胞的侵袭.感染UPEC132的EJ细胞与未经细菌感染的细胞提取总RNA,用人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片分析差异表达基因,并采用RT-PCR对基因芯片数据进行验证.结果 UPEC132能够黏附于EJ细胞表面,黏附率为(73.20±5.26)%;激光共聚焦显微镜观察发现部分细菌位于细胞内部,证实该菌对EJ细胞具有侵袭性.UPEC132感染后的EJ细胞与未经感染的细胞相比,共有28个基因上调,1个基因下调,主要涉及细胞增殖、炎症反应、细胞凋亡等相关基因.结论 UPEC与尿路上皮细胞的相互作用激活宿主细胞内部多种应答反应与信号转导途径,本研究为深入探索UPEC致病机制奠定基础.     

霍乱弧菌毒力相关基因ctxA B、zot、cri特征分析研究

目的在分子水平上了解霍乱弧菌毒力基因的分布特点和变迁及其流行规律。方法采用PCR方法对1964—2008年天津市疾病预防与控制中心分离、保存的176株霍乱弧菌的CTXΦ基因元件中的ctxAB、zot基因,TLC因子中的cri基因进行检测。结果176株霍乱弧菌中,有131株携带CTXΦ遗传单元中的ctxAB、zot基因,阳性率分别为72.72%(128/176),73.30%(129/176),TLC因子中cri基因的阳性率为40.34%(71/176)。在1964—1996年间分离的O1群霍乱弧菌中,有69.00%(69/100株)携带cri基因,而1998—2008年间分离的霍乱弧菌中cri基因的阳性率仅为1.33%(1/75)。1株O139群霍乱弧菌ctxAB、zot、cri均呈阳性。结论毒力相关基因检测能反映不同年代菌株间的分子特征,对于霍乱的分子流行病学研究具有重要意义。     

家蝇蛹凝集素的纯化及其免疫调节和抑菌作用

目的　从家蝇蛹中分离纯化一种能结合半乳糖的凝集素 ,并研究其免疫和抑菌活性。方法　家蝇蛹凝集素提取纯化方法包括 :缓冲液浸提、戊二醛固定化红细胞吸附、亲和层析和凝胶过滤。以淋巴细胞转化、溶血空斑和抑菌试验研究此凝集素的性质。结果　本纯化方法使样品的血凝活力提高了 5 39倍 ,纯化后的家蝇蛹凝集素电泳测得其相对分子质量 (Mr)为 84× 10 3,由 3个亚单位组成 ,含有糖成分。纯化凝集素的浓度为 15 .6～ 10 0 0 μg ml时 ,具有刺激T、B细胞的作用 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1)。对大肠埃希菌 ,枯草芽胞杆菌和伤寒沙门菌的抑制活性分别为39 .8%、4 5 .3%和 6 6 .2 %。结论　家蝇蛹凝集素具有免疫调节功能和抑菌活性 ,为家蝇免疫机制的深入研究提供了资料。     

天津市正常人肠道中大肠杆菌的耐药性及接合性耐药性质粒

大肠杆菌是人体肠道菌丛中的常住菌之一,除有些菌株能产生肠毒素及另一些可侵入肠壁引起腹泻外,通常在肠道内对人体无害,但可引起泌尿—生殖系统、胆道系统、腹膜等部位的感染,还可引起新生儿、免疫缺陷病人的败血症,医院内感染的肺炎也可由大肠杆菌引起。此外,正常人肠道中如存在     

早期SARS患者血清中SARS病毒核酸检测

目的 建立特异、快速、准确的SARS冠状病毒检测方法,并探讨其临床应用价值。方法 根据WHO公布的SARS冠状病毒的基因序列,采用套式RT-PCR方法对127份SARS患者不同病程的血清标本中SARS病毒核酸进行扩增,用敏感度,特异度,阳性预测值(PPV),阴性预测值(NPV),准确度等对该方法诊断SARS的效果进行评价。结果 病程在10d以内的32份血清标本中,13份阳性,敏感度40．6％,特异度100．0％,阳性预测值100．0％,阴性预测值66．1％,准确度72．5％。结论 本研究建立的套式RT-PCR方法可作为发病早期SARS病人的辅助诊断。     

人型支原体对药物敏感性的研究

目的 研究泌尿生殖道人型支原体（Mh）对中西药物的敏感性。方法 在Mh培养法的基础上,建立液体微量稀释法测定32株Mh对11种抗菌药物的最小抑菌浓度（M1C）,并测定30株Mh对19种中药的MIC。结果 Mh对11种抗菌药物的敏感性由高到低依次为：林可霉素、四环素、米诺环素、左旋氧氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、利福平、螺旋霉素、阿奇霉素、琥乙红霉素和红霉素。在19种中药中,Mh对板兰根、黄柏和白芷有较高敏感性,对大黄、鱼腥草和地肤子有中度敏感性,对其余13种中药不敏感。结论 了解了本地区Mh对临床上常用抗菌药物的敏感性和耐药情况,首次筛选出6种Mh较敏感的中药,为中西医结合治疗Mh感染提供了依据。     

汉坦病毒S基因毕赤酵母表达系统的构建

目的构建汉坦病毒HTN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统。方法应用RT-PCR法扩增汉坦病毒Z10株和L99株编码核蛋白的S基因,将扩增产物分别与pGEM-T-Easy载体连接,经序列分析后双酶切,分别定向克隆入载体pPICZαΑ和pPICZαC,继而将重组质粒以SacⅠ线性化并电转化入毕赤酵母X33感受态细胞,用Zeocin筛选高拷贝转化子进行鉴定。结果PCR扩增产物约为1290bp,与T载体相连测序结果与Genbank相应序列比较,核苷酸序列同源性分别为99.84%和99.92%,其编码蛋白质二级结构均无改变。定向克隆获得pPICZα-ΑZ10S和pPICZ-αL99S,分别电转化得到巴氏毕赤酵母重组菌株PpX33-Z10S和PpX33-L99S,提取其基因组DNA经PCR鉴定与预期相符。结论成功构建汉坦病毒HIN型和SEO型S基因毕赤酵母表达系统,为进一步研究奠定基础。     

天津地区汉坦病毒分离株TJJ16 M基因片段克隆和序列分析

目的分析天津地区汉坦病毒分离株TJJ16 M基因的分子特征。方法采用细胞培养法从鼠肺标本中分离汉坦病毒TJJ16,提取TJJ16感染Vero-E6细胞的总RN A,经逆转录扩增病毒cDNA,继而进行PCR分别扩增M1和M2基因片段,克隆于T载体并测序拼接,对其进行序列分析和生物信息学分析。结果汉坦病毒TJJ16株的M基因片段全序列长为3616nt,仅有1个开放读码框架(ORF),编码1 136个氨基酸,序列分析表明其为汉滩型(HTN型)汉坦病毒,与HTN型Q32株同属1个亚型。结论TJJ16病毒株M基因片段的克隆和序列分析证实其为HTN型,系天津地区的首次报道。     

天津地区人偏肺病毒G蛋白特性分析

目的了解天津地区人偏肺病毒(hMPV)G蛋白特性,为深入研究(hMPV)奠定基础。方法采用RT-PCR方法扩增hMPV的G基因片段,测序后通过生物信息学软件分析核苷酸同源性,绘制种系发生树,并对推导的G蛋白氨基酸序列的糖基化位点、跨膜序列及二级结构进行预测。结果天津地区hMPV G蛋白由217~238个氨基酸组成。种系发生树分析显示,hMPV可分为A2a、A2b和B2 3个亚型,A2b为优势流行型。A2亚型内的核苷酸同源性在90.1%~99.5%,推导的氨基酸同源性在80.4%~99.1%;A、B亚型之间核苷酸同源性为57.4%~60.3%,推导的氨基酸同源性为30.3%~37.1%。hMPV G蛋白的S和T总含量在30.9%~34.0%之间,A和B型间差异无统计学意义(P0.05)。N-糖基化位点在2~6之间。10株A2亚型hMPV G蛋白的跨膜区为N-端33~55位氨基酸,1株B2亚型hMPV G蛋白为N-端27~49位氨基酸。G蛋白氨基酸变异多发生在膜外区。二级结构预测显示,柔性结构占G蛋白氨基酸总数的62.7%~84.1%,其中以无规则卷曲为主,占60.8%~84.1%。该区域也多集中在膜外区,成为抗原表位的可能性较大。结论天津地区hMPV的优势流行型为A2b,其G蛋白特性有地区流行特点。