结直肠癌及淋巴结组织CEA mRNA表达的实时荧光定量检测

目的:建立检测CEA mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,并探讨结直肠癌及淋巴结组织中CEA mRNA表达的应用价值。方法:应用SYBR Green Ⅰ作为荧光染料,以GAPDH作为内对照,建立检测CEA mRNA的FQ-PCR方法,并对56例结直肠癌组织、淋巴结组织CEA mRNA的表达水平进行检测。结果:CEA mRNA在结直肠癌组织中均表达,但表达水平在不同病理分化程度(P=0.8661)及不同Duke分期(P=0.2986)中无明显变化;在检测的231个淋巴结中,共有137个淋巴结CEA mRNA表达为阳性,表达水平为18.31±36.85,其阳性表达率为59.3%(137/231),明显高于常规病理检测[29.4%(68/231)],χ2=41.7497,P=0.0001;CEA mRNA在Duke C D期淋巴结中表达水平(32.85±53.49)显著高于Duke A B期(6.54±14.57),P=0.0001。结论:FQ-PCR方法简便、特异和可靠;比常规病理检查更加敏感,可有效补充常规病理检查的不足,在预测肿瘤微转移方面具有重要的临床应用价值。     

乙型肝炎e抗原与HBV-DNA定量及肝功能的相关性分析

目的探讨乙型肝炎e抗原(HBe Ag)、乙型肝炎DNA(HBV-DNA)含量与乙型肝炎患者肝功能损害的关系。方法采用电化学发光法检测HBe Ag的光放射强度,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA含量,用速率法检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。结果 HBe Ag阳性患者HBV-DNA阳性率明显高于HBe Ag阴性患者(P<0.01);随着HBe Ag光放射强度的升高,患者HBV-DNA拷贝数也明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);且随着HBV-DNA增多,ALT、AST也明显升高(P<0.05或<0.01)。结论血清中HBV-DNA与HBe Ag及肝细胞损害程度三者之间存在密切关系,在临床工作中,应联合检测HBe Ag、HBV-DNA及肝功能,才能更准确的判断患者病情、预后及指导抗病毒药物的应用。     

雌孕激素对人卵巢癌细胞KLK5 mRNA表达和增殖的影响

目的探讨雌孕激素对其受体阳性人卵巢癌HO8910细胞中组织激肽释放酶5(KLK5)基因mRNA表达的调控。方法取对数生长期的HO8910细胞,雌激素组分别加入10-10、10-9、10-8、10-7mol/L的17-β雌二醇(17-βE2),孕激素组分别加入10-7、10-6mol/L的黄体酮(P),对照组加入无水乙醇,培养72h。用实时荧光定量逆转录PCR检测各实验组和对照组中KLK5mRNA表达变化。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖。结果作用72h后,17-βE2各实验组(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)HO8910细胞KLK5mRNA水平均高于乙醇对照组(P<0.01);P各实验组(10-7、10-6mol/L)HO8910细胞KLK5mRNA水平均低于乙醇对照组(P<0.01)。经MTT检测17-βE2各实验组HO8910细胞光吸收度A值与乙醇对照组相比明显增加(P<0.01);P各实验组细胞光吸收度A值与乙醇对照组相比明显降低(P<0.01)。结论雌激素对KLK5mRNA的表达具有上调作用,同时能促进卵巢癌HO8910细胞的增殖;而孕激素作用正相反。     

人组织型激肽释放酶6在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

Objective To approach the relationship between the expression of hK6 in ovarian neoplasm and clinicopathological variables and prognosis in ovarian cancer patients for finding a new tumor marker of the ovarian cancer. Methods The expression of hK6 was detected by immunohistochemistry in 19 cases of benign, 11 cases of borderline and 45 cases of malignant ovarian neoplasms and statistically analyzed whether its expression correlate with clinicopathological variables and prognosis in patients with ovarian cancer. Results The expression of hK6 in ovarian cancer tissues (60.0%) was significantly higher than that in the benign (15.8%) and borderline (27.3%) ovarian neoplasm tissues (P < 0.01). The expression of hK6 in higher-grade ovarian cancer tissues (68.4%) was higher than that in low-grade ones (14.3%, P<0.05). The expression of hK6 in late-stage (stage Ⅲ ,76.7%) was significantly higher than that in early-stage (stage Ⅰ or Ⅱ ,26.7%, P < 0.01). The expression of hK6 was significantly higher in patients with lymph node metastasis (77.8%) than that in patients without (33.3% ,P<0.01). The expression of hK6 in the cancer tissues in the patients died, or with reeeurence or metastasis within 3 years after surgery was higher (75.0%) than that in the patients with stable disease (42.9%, P < 0. 05). Conclusion The expression of hK6 in ovarian cancer was higher than that in benign and borderline ovarian neoplasms. The expression of hK6 is higher in the ovarian cancer of late stage, higher-grade, with lymph node metastasis and is associated with a poorer prognosis, hK6 may become a new markers in prediction of prognosis of the patients with ovarian tumors.     

IL-6以及骨代谢生化指标对骨吸收和骨形成的影响

目的 :探讨IL - 6与骨代谢生化指标在老年男性骨质疏松症发病机制中的重要作用。方法 :采用放射免疫分析和生化速率法检测 90例老年男性骨量减少和骨质疏松患者血清白细胞介素 6 (IL - 6 )、骨钙素(BGP)、睾酮 (T)、血清碱性磷酸酶 (SALP)、血清钙 (Ca)的水平 ,同时与青中年和老年健康人比较。结果 :发现老年男性患者骨吸收指标IL - 6水平随病情加重而增高 ,与不同年龄对照组比较有显著性差异 (p <0 .0 1)。骨形成指标BGP、BALP、T表达则不同程度降低 ,均与青中年对照组有明显差异 (p <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :IL - 6及其它骨代谢生化指标代谢异常 ,是导致老年男性骨质疏松症患者骨吸收增加而骨形成减少的重要因素     

结直肠癌与人组织激肽释放酶关系的研究进展

全球每年死于结直肠癌的患者约为50万,新诊断病例约100万[1]。如何降低结直肠癌的病死率成为当前亟待解决的问题。在过去的几年里,结直肠癌的总发病率和病死率有所降低,这主要归功于新增血清肿瘤标志物的检查[如癌胚抗原(CEA)和糖类抗原199(CA199)]、内镜检查技术和疾病医疗技术的提高等[2]。如何借助最新分子生物学技术,寻找有关结直肠癌早期诊断、预后监测的新指标是当前结直肠癌研究中至关重要的问题。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性作用的研究

目的观察血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,AngⅡ)受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)活性的影响,来探讨氯沙坦(Losartan)对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制.方法大鼠随机分为正常对照组(C组)、糖尿病对照组(D组)和糖尿病氯沙坦治疗组(DL组).于24周后,筛洗肾小球,提取肾小球胞浆和胞膜蛋白,利用[γ-32P]ATP底物磷酸化的方法检测胞浆及胞膜PKC活性;同时测量血、尿肌酐和计算内生肌酐清除率(Ccr).结果D组胞膜PKC的活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、Ccr、24h尿蛋白定量分别与C组相比明显升高,氯沙坦治疗后,DL组胞膜PKC的活性、胞膜PKC活性占总活性的百分比、Ccr、24h尿蛋白定量均明显低于D组(P＜0.05).结论AngⅡ受体拮抗剂氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏病变有部分保护作用,其机制可能是部分通过下调肾脏PKC活性.     

提高定量PCR技术结果准确性的理论性研究

目的目前的定量PCR技术的误差较大,本研究旨在探讨提高定量PCR技术准确性的方法。方法PCR动力学数学模型的研究提示,提高测定荧光信号的精度,结合CT值参数,可以进一步提高定量PCR技术定量结果的准确性。以前的方法在技术上存在的问题忽略了具有相同CT值时不同模板数荧光强度的变化规律。使用动力学模型可以方便的研究不同模板数在达到CT值时的荧光强度及它的变化规律。结果研究提示使用精确到4位数的荧光强度数据,在100模板以下可以精确到一个模板,模板数自100～1000000区间定量结果的准确性可达95%以上。根据模拟实验数据进行的定量PCR资料分析提示,定量PCR仪器提高测定荧光信号精度达到1%,CT值结合荧光强度可以使定量测定误差降低到10%的范围,大幅度提高定量结果的准确性。目前仪器10%左右或更大的荧光信号测定误差以及数据的处理方法只能是现在的定量误差水平,80%的模板测定误差。结论提高定量PCR定量结果准确性的首要技术是改进仪器,提高仪器对微弱荧光信号测定精度,同时改进数据的处理方法。     

血清IL-10测定对肺鳞癌和腺癌患者的临床应用评价

目的检测肺鳞癌和腺癌患者手术前后血清IL-10水平变化,评价其临床应用价值。方法采用放射免疫分析法检测肺癌患者手术前、手术后3、7d血清IL-10水平,并做比较分析;应用ROC曲线确定血清IL-10正常与异常的临界值。结果肺癌患者手术前血清IL-10水平和阳性率明显高于手术后3、7d和正常对照组(P<0.01);术后3、7d与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05);血清IL-10的临界值为40μg/L,灵敏度为61.7%、特异性为90.0%。结论血清IL-10测定对于肺鳞癌和腺癌患者手术前后病情观察、预后判断具有重要辅助诊断价值。