脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植痴呆大鼠大脑皮质及海马tau蛋白、β-淀粉样蛋白及神经元超微结构的变化

背景:课题组前期的研究表明,重组脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞脑内移植可以改善阿尔茨海默病鼠的认知功能.目的:观察脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病鼠大脑皮质及海马tau蛋白磷酸化、β-淀粉样蛋白及海马CA1区神经元超微结构的影响.方法:采用侧脑室立体定向注射β-淀粉样肽建立阿尔茨海默病动物模型,取单纯或经脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞移植,1个月后采用Western bloting 方法检测大脑皮质及海马组织总tau蛋白及磷酸化的tau蛋白表达,以ELISA方法检测β-淀粉样蛋白40,β-淀粉样蛋白42含量,同时透射电镜观察海马CA1区神经元超微结构的变化.结果与结论:①脑源性神经营养因子修饰的骨髓间质干细胞能够降低大脑皮质及海马组织总tau蛋白及磷酸化的tau蛋白表达,降低大脑皮质及海马β-淀粉样蛋白40和β-淀粉样蛋白42表达.②模型组大鼠海马CA1区神经元出现粗面内质网扩张、膜断裂,线粒体数目减少、线粒体肿胀、核膜不清等改变,脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞对上述改变有减轻作用,较骨髓间质干细胞未修饰组明显.     

脑源性神经营养因子体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞

目的 探讨脑源性神经营养因子(BDNF)体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成神经元样细胞的作用及其对诱导后的神经元样细胞保护作用,为治疗神经系统疾病提供更优良的细胞。方法 体外培养MSCs至第5代后,分别用BDNF、β-巯基乙醇(β-ME)诱导MSCs,诱导后的第1、3和6小时计算两组神经元样细胞数,对各时间点两组神经元样细胞阳性率进行了比较;诱导后行神经细胞标记抗体的免疫细胞化学、RT-PCR及蛋白质印迹鉴定。结果 两组诱导剂诱导后的细胞均呈神经元样细胞的形态;BDNF组诱导分化后细胞的存活时间远较β-ME组长;BDNF组在诱导后6h近于诱导高峰,而β-ME在诱导2h即达高峰,但随后神经元样细胞渐死亡。免疫细胞化学结果显示在两组诱导后细胞的巢蛋白(Nestin)、神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)、神经丝蛋白(NF)表达均呈阳性,而胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达呈阴性;RT-PCR显示NSE、NFL,MAP-2的mRNA表达阳性,GFAP有较弱的表达;蛋白质印迹可见两组诱导剂诱导的细胞均表达神经元的特异性标记抗体NSE。结论 BDNF能单独诱导MSCs分化形成神经元样细胞,而且分化后细胞的存活时间长,有望用于治疗脑缺血、神经变性等疾病。     

辨证论治辅助机器复位治疗耳石症临床观察

目的 探索辨证论治辅助机器复位治疗耳石症的效果。方法 62例耳石症随机平均分为对照组和干预组。对照组予机器复位,干预组予机器复位加辨证治疗。2组分别于治疗前,及治疗后1 d、1周、2周评估躯体（P）、功能（F）、情绪（E）指数,记录眩晕残障量表（DHI）评分。随访6个月,比较2组耳石症复发、残余头晕患者出现率。结果 治疗1周后与治疗前比较,2组DHI评分均有明显下降,且干预组下降更明显（P<0.05）;2周后,2组DHI评分均显著下降（P<0.01）。干预组复发率在第2个月、第4个月、第6个月明显低于对照组（P<0.05）;对照组残余头晕出现率在第2周和第1个月高于干预组（P<0.05）。结论 辨证论治加机器复位治疗耳石症可提高效果,降低残余头晕病例,减少复发。     

绿色荧光蛋白和成肌调节因子在骨髓基质干细胞中的共表达

目的:研究重组腺病毒(Ad)对骨髓基质干细胞(MSCs)的转染,以及绿色荧光蛋白(GFP)和成肌调节因子MyoD和Myogenin在MSCs中的表达. 方法:用差速贴壁法体外培养大鼠MSCs,并用流式细胞仪(FCM)检测其表面标志;对构建有绿色荧光蛋白的重组腺病毒(Ad-GFP)进行扩增和鉴定,并转染MSCs;用RT-PCR检测MyoD和Myogenin在转染后MSCs中的表达;将MSCs与C2C12成肌细胞共培养,诱导前者的分化,并用免疫荧光检测MyoD的表达. 结果:FCM检测证实,在MSCs的表面标志中CD11b和CD45阴性,而CD29和CD44阳性;随着Ad-GFP感染复数(MOI)的增加,转染效率也相应提高,但在MOI大于100后,MSCs开始出现病变;RT-PCR结果提示MyoD和Myogenin在转染后的MSCs中有表达;免疫荧光检测证实诱导后的MSCs可以表达MyoD蛋白. 结论:MSCs可以被Ad-GFP有效转染而表达GFP;同时内源性成肌调节因子的激活,可以促进MSCs的成肌分化.     

人微小抗肌萎缩蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞及其基因表达

目的 构建人微小抗肌萎缩蛋白基因（microdystrophin）的真核表达载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞（rMSC）,研究其体外表达情况。方法 限制性酶切PBSK-MICRO质粒的微小抗肌萎缩蛋白基因片段,插入到真核表达质粒poD-NA3．1（＋）的Notl位点内,克隆出真核表达载体pcDNA3．1（＋）／microdystrophin。通过酶切和测序对质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染人rMSCs中,经过G418筛选后。用RT—PCR及间接免疫荧光技术检测表达产物。结果 pcDNA3．1（＋）／microdystrophin经过Notl、HindⅢ酶切鉴定及测序证实插入片断正确。提取转染重组质粒rMSCs的总RNA,进行RT-PCR可见mRNA的转录：对G418筛选后rMSCs进行免疫荧光检测可见细胞内亮丽的红色荧光．说明转染后的rMSCs有微小抗肌萎缩蛋白的表达。结论 成功构建了人microdystrophin基因真核表达载体,将其转染人rMSCs内有微小抗肌萎缩蛋白的表达．为进一步研究体外修饰自体干细胞移植治疗DMD奠定了基础。     

温州市2005-2011年教师肺结核疫情分析

了解浙江省温州市教师肺结核病流行特征及教师对肺结核的了解和重视程度,为更好促进学校结核病防治工作提供科学依据.方法 利用描述流行病学方法,对温州市2005-2011年结核病管理信息系统中教师肺结核发病资料进行统计分析.结果 2005-2011年报告登记教师肺结核患者191例,报告登记发病率为39.15/10万,其中涂阳患者45例(23.56%);发病数量女性多于男性,以青年教师居多,时间分布并没有明显的季节趋势,发现方式主要是转诊和因症就诊,就诊延误率为45.55%,治疗2月末、5月末及疗程结束时未痰检率呈现下降趋势.结论 温州市教师肺结核疫情较为严重,就诊延误率较高.应进一步加强教师对肺结核相关知识的了解,提高教师对肺结核防治的重视程度.     

早期微创内固定手术联合鼠神经生长因子治疗创伤性多发性肋骨骨折的效果及对骨形态发生蛋白水平的影响

目的探讨早期微创内固定手术联合鼠神经生长因子治疗创伤性多发性肋骨骨折患者的效果,以及对血清骨形态发生蛋白(BMP)-2、BMP-7水平的影响。方法选取120例创伤性多发性肋骨骨折患者,随机分为研究组和对照组各60例。研究组患者给予早期微创内固定手术联合鼠神经生长因子治疗,对照组患者仅给予早期微创内固定手术进行治疗。比较两组患者的临床疗效、骨痂出现时间、骨痂体积、治疗4周后骨痂最大直径、总住院时间、胸管留置时间、术后2个月疼痛视觉模拟量表(VAS)评分以及治疗前后血清BMP-2、BMP-7水平。结果研究组治疗有效率高于对照组,骨痂出现时间早于对照组,骨痂体积和治疗4周后骨痂最大直径均大于对照组(均P<0.05)。与对照组比较,研究组住院时间、胸管留置时间更短,VAS评分更低(均P<0.05)。两组患者治疗后的血清BMP-2、BMP-7水平均高于术前,且研究组血清BMP-2、BMP-7水平均高于对照组(均P<0.05)。结论与单纯微创内固定术比较,早期微创内固定手术联合术后鼠神经生长因子注射能更有效地治疗创伤性多发性肋骨骨折,提高患者血清BMP-2、BMP-7水平,促进骨...     

用基因缺陷、蛋白质空间结构改变浅析Duchenne型肌营养不良症发病机制

目的：研究dystrophin基因缺陷、蛋白疏水性改变和空间结构改变与临床表型的关系，从分子水平探索Duchenne型肌营养不良症（DMD）发病机制。方法:分析59例缺失型突变的DMD/BMD患者基因检测结果，以信息生物学方法分析dystrophin蛋白疏水性和三维结构改变与临床表型的关系。结果:50例移码突变均为DMD。累及第3疏水峰的5例整码突变4例为DMD，1例BMD。3号外显子缺失后dystrophin的氨基端空间位置发生扭转，影响dystrophin与肌钙蛋白结合而致病。结论:肌营养不良的临床表型轻重与缺失是否破坏阅读框、累及第3疏水峰以及蛋白空间结构改变有关。     

颈动脉硬化与脑梗死的相关性及其诊断价值

目的:研究颈动脉粥样硬化与脑梗死的相关性,评价其在预测脑梗死中的诊断价值.方法:选取2009年1-8月本院住院的脑梗死患者140例,同期住院的非脑梗死患者140例作为对照组.记录传统脑血管病危险因素.全部病例行颈部血管超声检查,分析颈动脉硬化斑块分型积分和脑梗死的相关性.结果:Logistics回归分析提示高血压、高血糖、吸烟、高胆固醇是脑梗死的独立危险因素.颈动脉硬化斑块积分与脑梗死相关并与危险因素数目预测价值相似.两者结合的预测价值较单独使用明显提高.结论:颈动脉硬化斑块IMT积分、危险因素数目与脑梗死相关,综合两者能提高脑梗死的预测价值.     

复方妇康安泡腾片的研制

目的 :筛选复方妇康安泡腾片的最佳处方、工艺。方法 :正交设计法。结果 :优选条件为A3 B2 C1 ,根据有关要求 ,优化条件为A2 B2 C2 。结论 :本法工艺简单 ,片剂成型好、发泡量符合要求、含量均匀 ,外观好