基因芯片原理概述

<正> 随着人类基因组计划(Human Genome Project,HGP)即全部核苷酸测序的完成,人类基因组研究的重心逐渐进入后基因组时代(Postgenome Era),即向基因的功能及基因的多样性倾斜。为此,建立新型杂交和测序方法以对大量的遗传信息进行高效、快速的检测、分析显得格外重要。基因芯片技术以一种综合、全面、系统的观点研究生命现象,打破了以往"一种疾病一个基因"的研究模式,通过对个体在不同生长发育阶段或不同生理状态下大量基因表达的平行分析,研究相应基因在生物体内的功能,阐明不同层次多基因协同作用的机理,进而在人类重大疾病如癌症、心血管疾病的发病机理、诊断治疗、药物开发等方面研究中发挥了巨大的作用,已成为后基因组时代生命科学研究强有力的工具。1 技术背景追朔到一个多世纪前,Southen ED用标记的核酸分子与另一被固化的核酸分子配对杂交,发明了Southern印迹(Southern blot)检测法,此可被看做是最早的基因芯片雏形。稍后,人们又创立了以各种膜片为基础的克隆库扫描技术,     

交锁髓内针进展

本世纪六十年代Ｋ櫣ｎｔｓｃｈｅｒ在用其发明的Ｋ櫣ｎｔｓｃｈｅｒ髓内针治疗股骨干髓腔峡部的粉碎性、长斜形、螺旋形骨折及髓腔较宽的下1/3骨折时发现,Ｋ櫣ｎｔｓｃｈｅｒ针不能很好地防旋、防短缩及消除剪力,为了扩大Ｋ櫣ｎｔｓｃｈｅｒ针的使用范围,他于1968年在Ｋ櫣ｎｔｓｃｈｅｒ针上横向钻2～3个孔穿入螺钉以提高其抗旋转抗短缩的能力,称之为阻挡钉(ＤｅｔｅｎｔｉｏｎＮａｉｌ)[1]这就是最早的交锁髓内针,近年来随着骨折生物学固定观点的提出交锁髓内针内固定已成为四肢骨干骨折治疗的首选[2],因此交锁髓内针在设计、应用以及并发…     

血小板衍生生长因子-BB促进骨关节炎关节软骨修复

本研究将血小板衍生生长因子（PDGF）-BB施加于去卵巢大鼠，观察PDGF-BB对骨羌节炎软骨的影响。     

血小板衍生生长因子促进鼠骨早期修复中增殖细胞核抗原与c—Jun蛋白的表达

目的：将重组人血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor AB．PDGF-AB）注入大鼠桡骨骨缺损模型，同体双侧对照，运用免疫组织化学染色方法，从细胞分子水平观察和分析血小板衍生生长因子对骨折愈合期间软骨骨痂发生、生长的刺激作用及其刺激信号的传导机制。 方法：实验于2004—12／2005—08在解放军总医院三○四临床部烧伤研究所完成。①SD大鼠30只，造成双侧上肢平均约3mm的桡骨骨缺损模型。将重组因子PDGF-AB分别于术后第1，3，5，7天分4次注人大鼠右侧桡骨骨缺损区内（血小板衍生生长因子组），左侧骨缺损区内注入生理盐水作为对照组。②两组分别于术后第1，2，4周各取10只大鼠骨痂组织做成切片，分别进行增殖细胞核抗原与c-Jun免疫组织化学观察并对阳性结果作定量分析。 结果：30只大鼠全部进入结果分析。①增殖细胞核抗原蛋白与c-Jun蛋白在软骨骨痂形成与转归中的表达规律有比较一致的相似性，且增殖细胞核抗原能刺激间充质细胞、软骨细胞合成这两种蛋白。②术后1周，血小板衍生生长因子组间充质细胞内增殖细胞核抗原蛋白与c-Jun蛋白表达均高于生理盐水组[（6．07±2．09）×10^-3比（3．78±1．84）×10^-3，（8．62±2．10）×10^-3比（4．89±1．74）×10^-3，P值均小于0．01]。③术后2周，血小板衍生生长因子组非肥大软骨细胞内增殖细胞核抗原蛋白与c-jun蛋白表达均高于生理盐水组（4．33±1．26）×10^-3比（3．05±1．14）×10^-3，P〈0．05；（6．84±1．45）×10^-3比（5．00±1．18）×10^-3。P〈0．01）。 结论：血小板衍生生长因子能刺激动物体内间充质细胞和软骨细胞的增殖，加速软骨骨痂的形成，促进骨愈合。血小板衍生生长因子能诱导这两种细胞表达c-Jun，它或许能通过C—FOS／JUN蛋白来传递其生长作用信号，从而实现其刺?     

血小板衍生生长因子促进鼠骨早期修复中增殖细胞核抗原与c-Jun蛋白的表达

目的:将重组人血小板衍生生长因子(platelet-derivedgrowthfactorAB,PDGF-AB)注入大鼠桡骨骨缺损模型,同体双侧对照,运用免疫组织化学染色方法,从细胞分子水平观察和分析血小板衍生生长因子对骨折愈合期间软骨骨痂发生、生长的刺激作用及其刺激信号的传导机制。方法:实验于2004-12/2005-08在解放军总医院三○四临床部烧伤研究所完成。①SD大鼠30只,造成双侧上肢平均约3mm的桡骨骨缺损模型。将重组因子PDGF-AB分别于术后第1,3,5,7天分4次注入大鼠右侧桡骨骨缺损区内(血小板衍生生长因子组),左侧骨缺损区内注入生理盐水作为对照组。②两组分别于术后第1,2,4周各取10只大鼠骨痂组织做成切片,分别进行增殖细胞核抗原与c-Jun免疫组织化学观察并对阳性结果作定量分析。结果:30只大鼠全部进入结果分析。①增殖细胞核抗原蛋白与c-Jun蛋白在软骨骨痂形成与转归中的表达规律有比较一致的相似性,且增殖细胞核抗原能刺激间充质细胞、软骨细胞合成这两种蛋白。②术后1周,血小板衍生生长因子组间充质细胞内增殖细胞核抗原蛋白与c-Jun蛋白表达均高于生理盐水组[(6.07±2.09)×10-3比(3.78±1.84)×10-3,(8.62±2.10)×10-3比(4.89±1.74)×10-3,P值均小于0.01]。③术后2周,血小板衍生生长因子组非肥大软骨细胞内增殖细胞核抗原蛋白与c-Jun蛋白表达均高于生理盐水组(4.33±1.26)×10-3比(3.05±1.14)×10-3,P<0.05;(6.84±1.45)×10-3比(5.00±1.18)×10-3,P<0.01)。结论:血小板衍生生长因子能刺激动物体内间充质细胞和软骨细胞的增殖,加速软骨骨痂的形成,促进骨愈合。血小板衍生生长因子能诱导这两种细胞表达c-Jun,它或许能通过C-FOS/JUN蛋白来传递其生长作用信号,从而实现其刺激间充质细胞和软骨细胞增殖的目的。     

纳米珍珠层人工骨的制备

目的 探讨纳米珍珠层人工骨在原有珍珠层人工骨基础上的改进,所带来的性能变化及其应用的合理性.方法 采用机械研磨法制得纳米级珍珠层粉,与消旋聚乳酸复合,制成中空圆柱体人工骨,与同法制作的微米级珍珠层粉/消旋聚乳酸复合实心圆柱体人工骨进行对比分析,观察在原材料粒径、人工骨孔径、孔隙率、生物力学特性等方面的差异.结果 通过电镜观察,发现纳米级珍珠层粉的平均粒径为(50.4±12.4)nm,所制得的复合人工骨孔径平均为(215.7±77.5)μm,普通微米级珍珠层粉的平均粒径为(5.0±3.0)μm,所制得的复合人工骨孔径平均为(205.1±72.0)μm;采用比重法测得纳米级和微米级人工骨的孔隙率分别是(65.4±2.9)%和(53.4±2.2)%.生物力学测试结果 为纳米级人工骨与微米级人工骨在抗压强度和弹性模量方无显著差异.而前者的抗折弯强度低于后者.结论 纳米珍珠层人工骨原材料粒径小.有利于吸收降解,而且设计更合理,具有良好的孔径、孔隙率和力学特性,是一种有发展前景的骨组织工程材料.     

腰椎间盘突出术后脊柱侧弯原因分析(附26例报告)

目的探讨腰椎间盘突出术后脊柱侧弯发生的原因,为临床治疗提供指导依据。方法收集近十余年来行半椎板开窗腰椎间盘髓核摘除术后发生脊柱侧弯的患者共26例,对其术后脊柱侧弯的表现、检查及随访结果等资料进行分析。结果有2例患者术前并发腰椎弓根裂,但术前阅片不仔细,并未对此作出诊断,术后复查X线发现发生了椎体I°滑脱,且伴发了侧弯的发生;有3例患者术中定位错误,术后症状体征无缓解,同时并发了脊柱侧弯;2例患者术后症状加重同时并发侧弯,经MRI证实为突出髓核于术中游离于椎管内未取出;5例患者术前相邻节段轻微突出的椎间盘于术后发生了明显的突出;其余14例患者术后除了脊柱侧弯的表现外,前12周同时有不同于术前的腰背肌痉挛及疼痛的表现,伴大部血沉、外周血嗜酸性粒细胞轻度升高,MRI显示椎间隙有炎性反应的表现,但临床并无感染性椎间盘炎的特异性表现;术后12~24周上述症状体征逐步缓解至消失。其症状体征的发生可能与术后残留髓核引发的自身免疫反应及肌痉挛缺血性变化有关。结论腰椎间盘突出术后发生的脊柱侧弯原因多样,应针对不同原因采取相应的治疗措施。     

珍珠层聚乳酸人工骨的细胞毒性实验

目的研究珍珠层聚乳酸人工骨的细胞毒性。方法将人成骨细胞与珍珠层聚乳酸人工骨浸提液复合培养作为实验组,对照组单纯加细胞培养液。通过MTT法检测成骨细胞代谢活性;考马斯亮蓝测定细胞蛋白含量;金氏比色法检测细胞碱性磷酸酶活性。结果与人工骨材料浸提液复合培养的成骨细胞在细胞增殖状况、蛋白质含量、碱性磷酸酶活性等指标与正常组相比较差异无显著性。结论珍珠层聚乳酸人工骨材料对成骨细胞未产生毒性反应。     

人血小板衍生生长因子B在大肠杆菌中的表达及对骨组织修复的影响

目的：为研究人血小板衍生生长因子BB(PDGF—BB)在大肠杆菌中的表达及其在治疗骨折愈合、骨质疏松等疾病中的作用，克隆了PDGF—B的成熟肽基因并进行了序列分析。方法：从脐静脉内皮细胞提取总RNA，经反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)扩增出包含全长编码人PDGF—B基因cDNA，再以此为模板，用特异引物进行PCR扩增出PDGF—B成熟肽基因；将目的基因连接到载体pGEM—T上，进行序列测定。之后将此片段克隆到表达载体pQE30，构建成表达质粒pQE30—PDGFB。结果：重组质粒经酶切及PCR鉴定，证实PDGF—B成熟肽基因克隆成功，序列正确。结论：PDGFB基因的成功克隆和原核表达载体的构建，为促进骨修复功能研究及基因工程生产奠定了基础。     

计算机辅助导航下腰椎椎弓根内固定1例

导航系统是目前最新的一种手术辅助技术,导航仪器所显示的影像可以为术者提供强有力的术中参考,使手术达到极大的精确性,可大大降低手术风险并减少C臂X线曝光次数.目前国内开展较少,现介绍我单位在导航影像引导下进行的腰椎内固定手术1例.