杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因真核表达重组质粒构建

目的 构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白（amastin）编码基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin。方法 提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增,将扩增出的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒载体pcDNA3.1（＋）,构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin。结果 扩增出大小约550bp的无鞭毛体蛋白基因;重组质粒pcDNA3.1-amastin经鉴定正确。结论 成功构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因真核表达重组质粒pcDNA3.1-amastin。     

杜氏利什曼原虫四川分离株无鞭毛体蛋白基因的克隆及真核表达

目的克隆、真核表达杜氏利什曼原虫四川株的无鞭毛体蛋白(amastin)编码基因。方法PCR扩增杜氏利什曼原虫四川汶川人株L．d．SC10H2与四川南坪犬株L．d．SC7的无鞭毛体蛋白基因,将该基因导入pcDNA3．1( ),构建真核表达重组质牲,转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法鉴定重组质粒的瞬时表达;RT-PCR和Western blotting鉴定稳定表达,结果2株杜氏利什曼原虫均扩增出552 bp的无鞭毛体蛋白基因。同源性为86％。转染后在NIH3T3细胞膜和细胞内观察到较强的绿色荧光,表明无鞭毛体蛋白基因在NIH3T3细胞中获得短暂表达。细胞裂解产物经Western blotting,在相对分子质量(Mr)约20000处检测到阳性杂交信号,表明无鞭毛体蛋白基因在NIH3T3细胞内获得了稳定表达。结论获得了我国杜氏利什曼原虫四川分离株L．d．SC10H2和L．d．SC7的无鞭毛体蛋白基因序列,并在NIH3T3细胞中稳定表达。     

结核分枝杆菌重组蛋白CFP-10-ESAT-6-PPE68的表达、纯化与多克隆抗体的制备

目的构建重组质粒pET32a（＋）-cfp-10-esat-6-ppe68,得到重组结核分枝杆菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白及兔抗结核分枝杆菌CFP-10-ESAT-6-PPE68蛋白的多克隆抗体,为下-步应用于临床结核病的检测奠定基础。方法将结核分枝杆菌cfp-10-esat-6-ppe68基因转入质粒pET32a,将经PCR、酶切、序列测定鉴定为阳性的质粒转人大肠杆菌DE3,IPTG诱导表达重组蛋白,经亲和层析法纯化重组蛋白后用凝血酶切除载体蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体并进行纯化。结果成功构建重组质粒表达体系pET32a（＋）-cfp-10-esat-6-ppe68,制得去除载体蛋白的高纯度重组蛋白CFP-10．ESAT-6-PPE68,并成功得到高纯度抗结核分枝杆菌CFP-10-ESAT-6。PPE68蛋白的抗体。结论成功表达结核重组蛋白并制得高纯度多克隆抗体。     

免疫比浊法检测血清游离轻链的方法学评价

目的对Beckman Immage 800全自动特种蛋白分析仪检测血清游离κ、λ轻链(sFLC)进行方法学评价。方法通过Beckman Immage 800定量测定sFLC,探讨其精密度、正确度、分析测量范围、干扰和携带污染率,同时对其参考区间进行验证。结果κFLC低、高值批内精密度的变异系数(CV)分别为7.84%、2.95%,批间精密度的CV分别为7.38%、5.57%;λFLC低、高值批内精密度(CV)分别为4.59%、3.94%,批间精密度CV分别为3.97%、2.01%;测定κFLC、λFLC定值质控血清与靶值的偏倚小于5%;κFLC、λFLC分析测量范围分别为10.8~128.0 mg/L、10.1~121.0 mg/L时,a值在0.95~1.05,r2≥0.98;κFLC、λFLC携带污染率分别为0.411%、0.216%;干扰试验结果显示游离胆红素≤342.0μmol/L、结合胆红素≤342.0μmol/L、血红蛋白≤5g/L和乳糜≤2 400浊度时,对sFLC结果无明显影响;40例健康体检者中有1例κFLC测定结果超出厂家推荐的参考区间,40例λFLC检测值均在厂家推荐的参考区间内。结论 Beckman Immage 800全自动特种蛋白分析仪检测sFLC的主要分析性能符合质量目标的要求,能够为临床提供科学、准确的诊疗依据。     

结核分枝杆菌RD1区PPE68/GST融合蛋白表达质粒的构建及表达

目的:构建结核分枝杆菌PPE68/GST融合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌JM109中诱导表达. 方法: 利用PCR技术从结核杆菌H37Rv中扩增Rv3873基因,并将其定向克隆pGEX-4T-1中,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并转化E.coli JM109,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.采用GST蛋白纯化试剂盒进行重组融合蛋白纯化,SDS-PAGE和Western Blot鉴定重组表达产物. 结果:成功构建原核表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873并表达出约Mr 63 000大小的PPE68/GST融合蛋白,占总菌体的40%. Western Blot检测该融合蛋白能和结核患者多价抗血清发生反应. 结论:成功地构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-Rv3873,并在大肠杆菌得到表达.     

西南地区2071例变应性疾病患儿变应原临床分析

目的探讨变应性疾病常见变应原的致病状况,为变应性疾病流行病学研究及临床诊断、治疗和预防提供重要依据。方法采用国际标准方法的皮肤点刺试验(SPT),对2 071例变应性疾病患儿做14种变应原测定,并设阳性(组胺)及阴性(生理盐水)对照;以阳性为对照判断标准。结果被检查的2 071例患儿中SPT阳性者1 101例,占53.2%(1 101/2 071)。其中,阳性率在30%以上的变应原有:粉尘螨814例,占39.3%(814/2 071);屋尘螨684例,占335%(684/2 071);其他变应原阳性率均在15%以下。吸入变应原总阳性率51.3%(1 062/2 071),吸入变应原中以粉尘螨和屋尘螨阳性率居高,分别为39.3%(814/2 071)和33%(684/2 071);食入变应原总阳性率24.0%(498/2 071),食入变应原在前2位的为鸡蛋清11.9%和海蟹14.5%。皮肤点刺结果为强阳性(++++)的以粉尘螨和屋尘螨为主,分别为20.9%和16.9%。1～14岁变应性疾病儿童吸入变应原与食入变应原阳性率随年龄增加均有升高趋势,在各年龄分组中吸入变应原与食入变应原,除了1岁～组与3岁～组比较差异无统计学意义(χ2=0.124,2.481,P>0.05),其余各年龄组两两比较均有显著性差异(P<0.01)。哮喘的吸入性、摄入性变应原皮试阳性率明显高于其他变应性疾病(χ2=71.629,142.773,P<0.01)。结论变应性疾病通常由变应原致病,吸入性变应原为常见变应原,尘螨为首要变应原。皮肤点刺实验对变应性疾病的流行病学调查及特异性免疫治疗均有一定的指导意义。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基基因重组腺病毒镇痛疫苗的构建

目的 构建携带N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)基因的重组腺病毒镇痛疫苗.方法 以携带NR2B基因的腺病毒穿梭质粒pDC515-NR2B和腺病毒骨架质粒pBHGfrt(del)E1,3FLP共转染腺病毒包装细胞293细胞,连续观察细胞的形态学.取形成病毒空斑的293细胞,分别采用PCR、RT-PCR及Western blotting的方法从基因水平、转录水平和蛋白水平对病毒空斑筛选和鉴定,对鉴定正确的病毒空斑进行扩增和纯化.结果 转染后12 d可观察到细胞病变效应,15 d后形成病毒空斑.NR2B基因不仅正确插入重组腺病毒载体,而且可在293细胞正确表达NR2B蛋白.鉴定正确的病毒空斑命名为NR2B基因重组腺病毒5型镇痛疫苗,滴度为5×1011 VP/ml,纯度100%.结论 成功地构建了NR2B基因重组腺病毒镇痛疫苗,可用于疫苗镇痛的研究.     

斑蝥酸钠对中国仓鼠肺细胞生长影响初探

目的:观察不同剂量的斑蝥酸钠在体外作用24h对中国仓鼠肺细胞(CHL细胞)生长的影响。方法:以体外培养的中国仓鼠肺细胞为研究对象,分别设立正常对照组以及低、中、高3个剂量的斑蝥酸钠给药组,采用MTT法、倒置显微镜下形态学观察以及PI流式细胞分析法分析斑蝥酸钠对CHL细胞的生长抑制情况。结果:低、中、高剂量斑蝥酸钠作用24h,对CHL细胞抑制率分别为11.27%、17.77%、27.32%,大剂量有明显抑制作用(P<0.01);倒置显微镜下可观察到细胞表面有"出芽"现象。结论:斑蝥酸钠能抑制CHL细胞生长,并且可诱导其凋亡。     

精神科戒酒病房住院患者医院感染危险因素Logistic回归分析

目的 探讨精神科戒酒病房住院患者院内感染现状、特点及其相关危险因素,为采取有效的预防控制措施提供依据.方法 回顾性对2014年1月—2015年12月住该院戒酒病房的571例患者院内感染状况进行调查,筛选危险因素,采用SPSS 18.0统计学软件对戒酒病房患者医院感染的相关因素进行单因素及多因素logistic回归分析.结果 571例患者中发生院内感染56例,院内感染率为9.81%;感染部位以胃肠道感染居首(71.43%);单因素分析显示,住院天数、日饮酒量、入院时有戒断症状、震颤谵妄、惊厥发作、肝功异常、血色素降低、心电图异常、抗菌药物应用、合并基础疾病是戒酒患者院内感染的危险因素;而logistic回归分析得出,住院天数、饮酒时间、日饮酒量、入院时有戒断症状、震颤谵妄、惊厥发作、肝功异常、血色素降低、心电图异常、合并基础疾病是影响戒酒患者院内感染的独立危险因素.结论 该院戒酒病房住院患者院内感染部位以胃肠道居多;住院天数、饮酒时间、日饮酒量、入院时有戒断症状、震颤谵妄、惊厥发作、肝功异常、血色素降低、心电图异常、合并基础疾病是影响戒酒患者院内感染的独立危险因素.     

不同手术方法治疗股骨粗隆间骨折126例疗效分析

目的探讨股骨粗隆间骨折的手术适应证及疗效。方法手术治疗的126例股骨粗隆间骨折患者,应用动力髋螺钉治疗46例,近端解剖钢板治疗48例,近端髓内针治疗12例,近端锁定钢板治疗6例,空心钉治疗4例,加长柄半髋置换10例。平均随访14.6个月,对随访结果进行分析。结果所有患者骨折全部愈合,临床平均愈合时间6.2个月。术后早期并发症：旋转畸形5例,其中动力髋螺钉组3例,髓内针组2例;髋内翻畸形6例,其中动力髋螺钉组1例,近端解剖钢板组5例。晚期并发症：螺钉松动3例,均为近端解剖钢板组。结论不同内固定方法治疗股骨粗隆间骨折各有其优缺点,应根据患者的不同情况选择合适的内固定方式,以促进患者早日康复。