传代培养密度对人间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

背景组织工程技术的快速发展为骨缺损完全再生修复带来了新的希望,种子细胞的快速扩增是其中的关键问题之一.目的观察人间充质干细胞传代培养时,细胞种植密度对间充质干细胞增殖及成骨诱导分化影响.设计重复测量设计.单位解放军第三军医大学细胞培养室和检测分析室.对象实验于2003-01/2004-03在解放军第三军医大学的创伤、烧伤和复合伤国家重点实验室完成.从5例男性健康志愿者髂骨骨髓中分离扩增的干细胞.方法将第2代间充质干细胞以8×103/cm2,3×103/cm2,8×102/cm2密度接种,分析其生长曲线,并扩增培养18 d,记录细胞扩增数量,再分析扩增后细胞的生长曲线和成骨诱导能力.主要观察指标①不同种植密度下细胞生长曲线.②碱性磷酸酶染色和骨钙素的免疫组化染色结果.结果人骨髓间充质干细胞阴性表达碱性磷酸酶、CD34;在8×103/cm2种植密度下,细胞倍增时间40 h,18 d后细胞数量扩增(51±13)倍;在3×103/cm2种植密度下,细胞扩增(28±6)倍;在8×102/cm2种植密度下,细胞总数仅增加(5±3)倍.在低密度下获得的细胞增殖能力强于高密度组,两组细胞均具有成骨诱导能力. 结论种植密度对间充质干细胞增殖有明显影响,快速扩增间充质干细胞作为骨组织工程种子细胞,宜选择8×103/cm2种植密度.     

膝关节合并伤对前交叉韧带重建术后疗效影响研究

目的探讨前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)单纯性损伤与合并其他膝关节结构损伤关节镜下重建术后的疗效。方法2003年2月~2006年2月在我中心行骨-髌腱-骨(bone-tendon-bone B-T-B)ACL重建术77例,其中男58例,女19例,年龄15~57岁(平均28.31岁),自体重建22例,异体重建55例,20例ACL单纯损伤,57例合并其他结构损伤。固定方式采用可吸收界面螺钉。术后按照国际膝关节评分委员会(IKDC)、Lysholm、Irgang、Larson膝关节评分进行疗效评价。结果单纯损伤组患者术后获7~42个月(平均28.4个月)随访,其中20例患者(95.24%)Lachman试验阴性,KT-1000检查显示双侧膝关节前向松弛度差值<3mm,IKDC评分活动水平正常或接近正常为16例(80.00%),Lysholm评分从(52.2±5.1)分提高至(89.9±5.5)分,Irgang评分从(47.4±6.7)分提高至(80.4±8.1)分,Larson评分从(49.6±5.6)分提高至(91.6±7.1)分,和术前相比差异均有统计学意义(P<0.01)。合并损伤组患者术后获6~43个月(平均20.2个月)随访,其中54例患者(94.8%)Lach-man试验阴性,KT-1000检查显示双侧膝关节前向松弛度差值<3mm,IKDC评分活动水平正常或接近正常为42例(73.68%),Lysholm评分从(50.2±4.9)分提高至(87.4±6.1)分,Irgang评分从(42.7±8.6)分提高至(72.7±6.1)分,Larson评分从(57.2±6.7)分提高至(82.3±8.4)分,和术前相比差异均有统计学意义(P<0.01)。结论ACL单纯损伤与合并其他膝关节结构损伤在关节镜下重建后手术效果良好,两组的术后Lysholm评分差异无统计学意义,Irgang评分、Larson评分差异有统计学意义(P<0.05),提示半月板、副韧带、后交叉韧带、软骨等合并损伤对术后产生疼痛、肿胀及关节稳定性有一定影响。     

半月板桶柄样损伤的关节镜手术治疗

目的 探讨膝关节半月板桶柄样损伤的关节镜手术治疗效果和手术技巧.方法 2006年10月1日至2007年9月30日对31例34膝关节半月板损伤患者在进关节镜探查手术时,被确定为半月板桶柄样损伤,12例为内侧半月板,19例为外侧半月板,其中3例为双侧外侧半月板损伤.本组术前患者往往存在膝节疼痛、弹响或跛行等症状,MRI检查有助于术前分类诊断.其中25例行半月板部分切除成形术,5例因边缘撕裂行半月板次全切除术,1例行半月板合术.对这些患者的临床表现特点进行总结,并随访关节镜手术的近期疗效.结果 所有病例术后随访症状均明显改善或消失,无术后并发症.本组ysholm膝关节功能评分从术前35～62分,平均(41.7±4.1)分,术后6个月提高到86～100分,平均(95.6±3.3)分(t=24.52,P＜0.01).结论 膝关节半板桶柄样损伤患者症状明显,关节镜手术治疗效果良好,并发症少.     

活性骨组织体外调节和促进成骨细胞黏附特性的作用

目的：研究兔活性骨组织在共培养条件下对同种骨髓基质细胞来源成骨细胞黏附特性的影响。方法：分别应用生理盐水和三蒸水浸泡新鲜兔骨碎粒5h后与同种骨髓基质细胞来源成骨细胞共培养作为实验组；未进行共培养的成骨细胞作为对照组。应用体视学计数法观察接种后0．5，1，2，4，8h各时间点成骨细胞贴壁情况，计量贴壁细胞数，计算出细胞贴壁率。结果：实验组的成骨细胞贴壁率均显著高于对照组(P&;lt;0．01），与三蒸水浸泡的兔活性骨组织共培养的同种成骨细胞的贴壁率最高。结论：活性骨组织在体外具有调节和促进同种成骨细胞黏附特性的作用，用三蒸水浸泡的活性骨组织的作用最强。     

改良正中微创切口行LPS高屈曲度全膝关节置换术早期疗效观察

目的观察改良正中微创切口行LPS高屈曲度膝关节假体(LPS-Flex Fixed Bearing Knee,Zimmer)置换术的早期疗效,探讨二者结合后对膝关节功能的改善。方法2003年11月~2005年12月对69例(73膝)患者行LPS高屈曲度膝关节假体置换术,术中采用改良正中微创切口,长11~15cm,平均13.8cm。术中改善髌股对线、清理后关节囊、平衡软组织并植入高屈曲度假体。术后6~31个月进行随访,使用膝关节协会临床评分、HSS评分、10级疼痛评分、6min行走试验(6MWT)和30s爬梯测试对患者术后的膝关节功能进行评估。结果73膝术后屈曲度在100~150°间,平均122.7°,较术前提高41.6°。膝关节协会临床评分中疼痛评分42分;HSS评分170分;膝关节平均前移(6.7±3.1)mm;内外翻角度和(13.2±4.5)°;10级疼痛评分2.05分;6MWT为425m;30s登梯试验28.5阶,下梯试验28.6阶。65例为单侧高屈曲度假体置换,其中2例患者对侧膝关节曾行普通假体置换术,3例有对侧膝关节疾患;另有4例双侧膝关节置换,此9例患者在本组中疼痛评分可,功能评分较低,尤其6MWT和30s爬梯测试差。结论使用改良正中微创切口可减少手术创伤,早期恢复膝关节功能,本组中未出现假体植入失误和早期松动等并发症;LPS高屈曲度膝关节假体能够明显改善术后活动度,随访中未发现膝关节过度松弛与撞击症等。膝关节置换术后功能评定受对侧膝关节病变影响较大,在效果评定中值得注意。总之,结合改良正中微创切口和LPS高屈曲度假体行全膝关节置换术的近期疗效满意,远期疗效有待进一步观察。     

利用关节镜治疗膝关节结核23例疗效分析

目的探讨关节镜在膝关节滑膜结核及早期全关节结核诊断和治疗中的作用。方法对2002年6月～2004年12月我科收治的23例膝关节结核患者进行回顾性分析。结果23例患者中术前确诊8例,术中确诊18例,术后病理确诊20例,3例患者病理报告慢性滑膜炎,最后临床证实为结核。平均随访29．3个月,所有患者膝关节症状基本消失,功能良好,Lysholm评分平均得分为92．2分,疗效满意。结论关节镜是膝关节结核早期诊断和治疗的理想方法。     

膝关节半月板损伤MRI表现与关节镜下表现的临床对比研究

目的比较分析半月板损伤的MRI表现和关节镜所见,进一步明确半月板损伤关节镜治疗的适应证。方法对我院76例行关节镜检查或治疗患者的79个膝关节的MRI表现与关节镜所见进行对照分析,MRI内异常高信号影的判断采用Mink、Crues和Fischer等提出的分级标准。结果本组76例患者的79膝、158个半月板中,MRI检查明确诊断Ⅲ级信号提示半月板撕裂43个,其中内侧半月板18个,外侧半月板25个,经关节镜证实半月板撕裂39个,其余4个半月板关节镜下肉眼未见明显撕裂;经MRI检查未证实撕裂而关节镜下见撕裂8个,其中有4个MRI检查信号介于Ⅱ～Ⅲ级之间,提示可能撕裂;经MRI检查与关节镜证实无撕裂107个,其中9个MRI检查信号介于Ⅱ～Ⅲ级之间。MRI对半月板损伤诊断的敏感度为83．0％,特异度为96．4％,准确度为92．4％,阳性预测值（positive predictive value,PPV）90．7％,阴性预测值（negative predictive value,NPV）93．0％。半月板MRI影像上连续层面上出现Ⅲ级信号是诊断半月板撕裂较可靠的指征（P＜0．01）;半月板内Ⅱ级信号时关节镜下肉眼可见半月板撕裂较少见;而当半月板内线形信号可能接触关节面,即介于Ⅱ级和Ⅲ级之间时,其对半月板撕裂的诊断价值与Ⅱ级信号差异无统计学意义（x^2=2．23,P＞0．05）。结论MRI是诊断半月板撕裂无创性的极有价值的诊断方法．是膝关节镜术前的重要检查,半月板内MRIⅢ级高信号影是半月板撕裂的可靠指征,多有手术治疗需要。     

胶原凝胶包埋软骨细胞接种骨胶原基质支架体外构建组织工程软骨

目的探讨复合应用胶原凝胶和骨胶原基质（BCM）支架作为软骨细胞载体体外构建组织工程软骨的有效性和可行性.方法将胶原凝胶包埋的软骨细胞接种BCM支架并在体外培养,应用倒置相差显微镜和扫描电镜观察软骨细胞的粘附、生长和增殖情况,培养14d,行HE、TB（甲苯胺蓝）染色观察软骨组织形成情况.结果软骨细胞在支架上粘附、生长和增殖良好,体外培养14d能形成较成熟的软骨组织.结论胶原凝胶复合BCM支架可作为软骨细胞的载体体外构建组织工程软骨.     

156例膝关节结核临床流行病学特征及关节镜手术疗效分析

目的分析膝关节结核临床流行病学特征,探讨膝关节镜手术结合抗痨治疗膝关节结核的疗效。方法回顾性分析2001年1月至2010年12月本院关节中心收治的156例膝关节结核病例资料,对患者性别、侧别、并发其他部位结核、年龄分布、时间段分布、病变程度、关节镜手术疗效等情况进行分析。结果在156例157侧膝关节结核中,男性占59.6%,女性占40.4%,男女性别比1.47∶1(P<0.05);左膝占45.86%,右膝占54.14%,双侧比较差异无统计学意义(P>0.05);单发膝结核占90.38%,多发结核占9.62%;有全身症状的膝关节结核占27.6%;实验室检查中血沉异常患者占92.18%,PPD阳性率为86.67%,结核抗体阳性率为59.70%,PCR阳性率为33.96%;病理报告为结核的占56.41%;高发年龄段为30～39岁;滑膜结核(无软骨损伤)占21.15%,滑膜结核(有软骨损伤)占29.49%,全膝关节结核占49.36%,三者术前Lysholm平均评分分别为(73.32±22.45)、(48.56±24.67)、(24.78±23.43)分,术后6个月的99位患者Lysholm平均评分分别为(91.72±30.56)、(88.62±29.43)、(85.03±28.65)分。结论膝关节结核男性多于女性,以单发结核最常见,各年龄段均有发病,30～39岁为高发年龄段;结核对膝关节的破坏巨大;膝关节结核的诊断需要多种诊断方法进行综合考虑;膝关节镜手术配合正规抗痨药物治疗疗效显著。     

327例神经阻滞麻醉下膝关节镜手术麻醉效果分析

目的 介绍坐骨神经阻滞联合腰丛神经阻滞麻醉下行膝关节镜手术的体会.分析神经阻滞麻醉联合关节腔内麻醉对术后镇痛的效果.方法 统计327例膝关节镜手术患者临床资料,所有患者均使用坐骨神经联合腰丛神经阻滞麻醉,术中用止血带.麻醉完成后30min内进行手术,手术时间30～90min.记录患者术中切口疼痛、止血带反应,麻醉持续时间.术后关节腔内注射0.1%吗啡注射液20ml保留12h.结果 97.9%患者对术中麻醉效果满意,7例(2.1%)患者因止血带反应需加用静脉麻醉或笑气(N2O)吸入麻醉.所有患者不需术后持续镇痛,在麻醉后5～14h开始感觉到切口疼痛,平均8.3 h.所有患者对麻醉效果满意.结论 神经阻滞麻醉对下肢关节镜手术有良好麻醉效果,术中及术后处理简单,是一种优良的关节镜手术麻醉方式.