利用适配子筛选结核杆菌H37Rv毒力基因方法探讨

目的 建立结核杆菌H37Rv的基因组文库,利用特异性结合H37Rv的适配子,筛选出H37Rv的毒力基因.方法 H37Rv经溶菌酶、蛋白酶K破菌后,提取结核杆菌基因组,用Sau3AI酶切后,连入pET28a,转入大肠杆菌BL21表达,提取蛋白,非变性蛋白电泳后,转入PVDF膜,用生物素标记的适配子与蛋白杂交,SABC试剂显色,将能与适配子反应的克隆子测序,与结核杆菌基因组序列比对,找出可疑的毒力基因.结果 建立了含有711个克隆子的H37Rv基因组表达文库,通过比较分析,找出两个可疑基因：aroF与PPK.结论 本研究利用适配子筛选出了2个结核杆菌H37Rv的毒力基因,建立了一种从结核杆菌基因组文库中筛选H37Rv毒力基因的方法.     

视网膜变性对RCS-P+大鼠γ-氨基丁酸及其合成酶谷氨酸脱羧酶65表达的影响

目的 观察视网膜变性过程中γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)及合成酶谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)的表达变化.方法 选择出生后15、30、60、90 d的RCS-P+和同年龄的RCS-rdy+-P+大鼠,采用免疫荧光(IF)和免疫印迹法(Western blot)观察两种大鼠出生后15、30、60、90 d GABA和GAD65的表达差异.结果 视网膜中GABA和GAD65主要表达于内核层、内从状层和节细胞层.随着天龄的增加,RCS-rdy+-P+大鼠中GABA阳性细胞逐渐减少.RCS-P+变性鼠在出生后15 ～60 d GABA阳性细胞随天龄增加逐渐减少,在出生后60 ～ 90 d(即视网膜变性中晚期)GABA阳性细胞大量增加,GABA表达明显高于RCS-rdy+-P+大鼠(P＜0.05).不同年龄RCS-rdy+-P+大鼠其GAD65表达恒定,发育对GAD65表达无明显影响;与同年龄RCS-rdy+-P+大鼠相比,30 d RCS-P+大鼠GAD65表达略有增加(P＜0.05),90d时大量增加(P＜0.01),其表达随病变发展明显升高.结论 在视网膜色素变性过程中,GABA、GAD65在视网膜内层的表达均有显著的升高,提示输入剥夺后GABA能无长突细胞未见损伤,其活性甚至略有增高.     

细胞核基因组与线粒体基因组的相互调控

细胞核基因组(nuclear DNA,nDNA)与线粒体基因组(mitochondria DNA,mtDNA)之间存在着非常密切的关系。mtDNA转录、复制和翻译需要各种不同的核基因产物[1];而核基因产物表达的紊乱与mtDNA突变、线粒体蛋白质的生物合成等受到抑制均有关系。两者不但在其生物发生、生物合成方面需要相互协调,更重要的是通过相互协调作用,来调节呼吸链亚基的表达,从而介导线粒体呼吸链功能的改变。研究核与线粒体两基因组之间的调控机制、核对线粒体呼吸链功能的调节,一直是近年来学者追踪的热点。在细胞内,线粒体遗传系统与细胞核遗传系统相互协作进…     

老年性白内障术后血脂和血沉方程K值测定及临床意义

目的:观察老年性白内障术后血脂、血沉方程K值测定结果并分析其临床意义。方法:测定151例老年白内障患者术后6个月的血脂和血沉方程K值,并同时测定其视力,根据不同视力分成三组(视力>0.8组,视力在0.3~0.8组,视力<0.3组)。进行统计分析。结果:三组对应的血脂和血沉方程K值水平存在显著差异(P<0.01)。结论:血脂、血沉方程K值水平与老年性白内障术后视力存在一定的关联.控制血脂水平,改善红细胞聚集性,对老年白内障术后视力的维持有积极意义。     

视觉电生理检查中心性浆液性脉络膜视网膜病变的价值

目的 观察中心性浆液性脉络膜视网膜病变(central serous chorioretinopathy,CSC)的视觉电生理表现并做定量分析.方法 8例男性患者经过眼底荧光造影和光学相干成像确诊为单眼CSC后行全视野模式翻转视觉诱发电位(PVEP)、全视野闪光视网膜电图(FERG)、视杆细胞多焦视网膜电图(Rod-mfERG)和视锥细胞多焦视网膜电图(Cone-mfERG)检查.患眼为研究组,健眼为对照组.结果 患眼和健眼的PVEP和Cone-mfERG表现出明显差异(P<0.05),FERG和Rod-mfERG未出现明显差异.对于空间频率为1°和0.25°的PVEP,患眼较健眼的P100波的幅值分别降低42 43%和37.60%,峰时延迟13.84 ms和8.50 ms,而在Cone-mfERG检查中患眼较健眼P1波幅值密度在1、2环分别降低40.93%和26.02%.结论 视觉电生理检查尤其是PVEP和Cone-mfERG可以对CSC进行诊断及定量分析.     

GeneXpert MTB/RIF试验在检测利福平耐药及耐多药结核中的应用评价

目的探讨GeneXpert MTB/RIF试验(简称Xpert)在检测利福平耐药及耐多药结核(MDR-TB)中的应用价值,并对Xpert与比例法利福平药敏结果不一致的原因进行分析。方法选取2014年1月至2016年6月在该院就诊患者所送检的临床标本进行Xpert检测、分枝杆菌培养,培养阳性菌株进行比例法药敏试验。Xpert与分枝杆菌培养均阳性共1 300例。以比例法药敏试验为"金标准",对Xpert检测利福平药敏结果进行分析。对Xpert与比例法检测利福平药敏结果不一致的菌株进行rpoB基因的利福平耐药决定区(RRDR)测序和最小抑菌浓度(MIC)的测定。结果 Xpert检出利福平耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为99.31%、97.82%、92.88和99.80%。在Xpert检出利福平耐药的309例(初治125例,复治184例)患者中,以E、D和B探针突变检出为主,分别占65.70%、14.56%和10.68%;MDR-TB患者占比为77.35%(239/309),在初复治患者中分别占75.20%(94/125)和78.80%(145/184)。在22株比例法敏感而Xpert检出耐药的菌株中,6株在RRDR区未检测到突变;16株在RRDR区检测到突变,以有争议的L511P突变(8例)和L533P突变(4例)为主。在2株比例法耐药而Xpert为敏感的菌株中,1株在RRDR区未检测到突变;1株在RRDR区外存在E546G突变。结论 Xpert试验适用于利福平耐药结核分枝杆菌的快速检测,可用于MDRTB的快速筛查。Xpert与比例法利福平药敏结果不一致主要与低度耐药相关的511、533位点突变有关。     

缺氧复合氯霉素处理对大鼠脑皮质线粒体氧化呼吸功能及COX活性的影响

目的观察大鼠经不同时间低压缺氧并复合线粒体蛋白翻译特异抑制剂氯霉素(CAP)处理后,脑组织线粒体呼吸功能和COX活性的变化以及CAP处理对缺氧过程中线粒体氧化呼吸功能的影响.方法成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、单纯药物处理组和缺氧复合药物处理组,后者为模拟海拔5 000 m高原连续低压缺氧暴露1、5、15 d和30d,分别于动物处死前7 d按100 mg/kg体质量,腹腔注射0.5?P.高速离心密度梯度法分离大鼠脑皮质线粒体,Clark氧电极法测定线粒体呼吸活性,极谱法测量COX活性.结果与对照组相比,单纯CAP处理大鼠脑线粒体ST3、RCR、OPR及COX活性显著降低;复合缺氧后则线粒体呼吸功能及COX活性明显改善,且随缺氧时间的延长而基本恢复到平原对照组水平.结论缺氧可以改善氯霉素处理大鼠脑皮质COX活性及线粒体的氧化呼吸功能,提高氧化磷酸化效率,其改善程度具有时间依赖性,随缺氧时间的延长而逐渐恢复.     

视觉正常人简单图形视觉刺激的视皮层功能定位及定量研究

目的 利用功能磁共振成像的方法定位、定量研究视觉正常人简单图形视觉刺激时的视皮层反应模式,为视皮层假体的刺激位置和强度提供参考.方法 对3名视觉正常成年志愿者进行圆环形棋盘格视觉任务的功能磁共振成像实验,同一任务对每位志愿者重复3次,以SPM2脑功能专业分析软件包作后期处理,显示视皮层反应模式.结果 3名受试者均较好完成视觉任务,平均体素反应总数为5217.3±1110.6.反应最强点坐标 x值为(-4.3±8.7)mm,y值为(-83.3±3.7)mm,z值为(-4.0±4.7)mm.平均最大反应强度为15.99±1.58,最大反应脑区为双侧的Brodmann 18区即初级视皮层V2区.解剖上的舌回附近.结论 利用功能磁共振成像的方法可以定位、定量的研究视皮层反应模式,这些反应模式信息可以为视皮层假体的刺激位置、强度等参数提供参考.     

小儿喘息性肺部感染心肌酶测定及临床意义

小儿喘息性肺部感染在婴幼儿期较常见 ,多为病毒性肺炎。为了解不同病情的患儿是否存在心肌损害 ,作者对 6 0例小儿喘息性肺部感染者进行了心肌酶测定 ,现报道如下。临床资料一、资料患者组 :为我院 1998年 10月～ 2 0 0 0年 12月住院及门诊诊断为小儿喘息性肺部感染者 (参照卫生部“小儿肺炎防治方案”[1] 中小儿肺炎的诊断标准 ) ,共 6 0例 ,既往无心肌炎 ,无肝肾疾病、肌肉疾病及先天性心脏病。其中男 4 1例 ,女 19例 ;年龄 3个月～ 2岁。6 0例中 ,单纯小儿喘息性肺部感染 4 8例 ,合并呼吸衰竭 12例 ,合并呼吸衰竭及心力衰竭 5例。对照组…     

绝经期妇女雌激素与脂蛋白(a)的测定及意义

目的 :探讨绝经期雌性激素与脂蛋白〔 L P(a)〕水平变化的相关性及意义。方法 :用磁性分离酶联免疫分析法(IEMA)测定 30例绝经期妇女雌二醇的水平 ;用胶乳增强比浊法测定 L P(a)。并与随机抽样的非绝经妇女的雌二醇、L P(a)的水平比较分析。结果 :绝经期组雌二醇水平明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,而 L P(a)水平明显高于对照 (P<0 .0 1)。结论 :绝经期妇女雌二醇水平降低 ,而 L P(a)水平升高。这两者水平的变化为临床对绝经期妇女心脑血管疾病的预防和治疗起到了很大的指导意义