甘露聚糖修饰的重组小鼠甲胎蛋白的抗肿瘤免疫作用研究

目的研究用甘露聚糖修饰后的甲胎蛋白（AFP）对肿瘤免疫的促进作用。方法用小鼠建立原发性肝癌模型,以AFP作为模型抗原,将重组小鼠AFP（mAFP）与氧化型的甘露聚糖相连接制成疫苗（Ox-M-mAFP）,同时用未与甘露聚糖连接的mAFP作为对照,研究该疫苗在小鼠体内的肿瘤免疫治疗效果。结果Ox-M-mAFP可在小鼠体内诱导出有效的抗肿瘤免疫反应,免疫后小鼠脾内得到的CD8^＋T淋巴细胞显示出对特异性分泌AFP的肿瘤细胞的杀伤活性。结论本实验提供了一种有效激活机体针对自身分子免疫应答的肿瘤疫苗策略,也对原发性肝癌的非手术治疗提供了一个可能的研究方向。     

用McAb-AST及骨髓涂片法对四川省汶川县犬感染利什曼原虫的调查研究

作者等用单克隆抗体-抗原斑点试验(McAb-AST)及骨髓穿刺涂片法对汶川县125只犬进行感染利什曼原虫调查,骨髓涂片法查出原虫的阳性犬46只,感染率为36.8％,较之历年来陇南、川北报道的犬感染率为高,不但查明了当地犬感染利什曼原虫的严重性,且为本年在白蛉繁殖季节前消除这些传染源提供了确切依据。为了研究对犬利什曼病的简易、准确的调查方法,我们同时用McAb-AST对该125只犬的血清,检测其循环抗原,结果与骨髓涂片阳性符合率为97.8％,总符合率95.2％,可望取代骨髓涂片法。     

异种血管内皮细胞生长因子重组蛋白质疫苗联合阿霉素治疗淋巴瘤的研究

目的探讨重组非洲爪蟾血管内皮细胞生长因子(Xenopuslaevisvascularendothelialgrowthfactor,xVEGF)肿瘤疫苗免疫治疗,联合阿霉素抗小鼠淋巴瘤的作用。方法采用C57BL/6小鼠建立EL4淋巴瘤模型。实验小鼠随机分成4组xVEGF联合阿霉素组(简称联合用药组)、阿霉素组、xVEGF组、生理盐水对照组。观察肿瘤生长、小鼠生存率和毒副反应,并检测分泌抗自身VEGF抗体的B细胞、肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)和肿瘤细胞凋亡等。结果联合用药组肿瘤明显小于其他3组(P<0.05),其中有3只小鼠肿瘤完全消退;接种肿瘤后48d,联合用药组小鼠生存率为100%,明显高于生理盐水对照组(0%)(P<0.01)。ELISPOT检测发现,异种蛋白质疫苗免疫的小鼠(联合或单用)产生了分泌抗自身VEGF抗体的B细胞,其数量与阿霉素组或生理盐水对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。联合用药组肿瘤MVD明显低于其他3组(P<0.05),肿瘤细胞凋亡指数明显高于其他3组(P<0.05)。结论采用异种同源蛋白质疫苗xVEGF免疫治疗,与阿霉素化疗联合有协同增强的抗小鼠淋巴瘤的作用。     

289例中晚期肿瘤病人外周血T淋巴细胞表型分析

目的 :分析中晚期肿瘤病人外周血T淋巴细胞亚群测定值的特点 ,探讨其影响因素及临床意义。方法 :采用流式细胞术检测 2 89例中晚期肿瘤病人外周血T淋巴细胞亚群水平。结果 :2 89例中晚期肿瘤病人外周血T淋巴细胞亚群测得值分别为CD3+ 细胞 5 9 0 7± 14 2 8,CD4 + 2 4 70± 10 70 ,CD8+ 33 4 5± 12 72 ,CD4 /CD80 89± 0 5 6。除性别对CD3表达的影响具有统计学意义外 (P =0 0 0 3) ,其余指标不受患者性别及年龄的影响 (P >0 0 5 )。结论 :中晚期肿瘤患者普遍存在T淋巴细胞介导的细胞免疫功能下降。     

不同保存条件下单克隆抗体活性变化的研究

目前,单克隆抗体在基础研究和临床诊断中应用愈来愈广泛。众所周知,单克隆抗体如保存不当,将会很快失活,找出对单克隆抗体的最适宜保存条件显得十分重要。本文采用10种保存条件对同一株单克隆抗体2H6-E3的活性变化进行了长达75周的动态观察。结果发现,在-30℃、-70℃的7种保存条件下抗体滴度下降不明显,而在较高保存温度(-18℃,4℃和25℃)下抗体效价降     

人体肿瘤组织内血管内皮细胞的定量分析

为建立一种检测瘤内血管生成准确定量的新方法,采用抗CD34单克隆抗体标记实体肿瘤组织中的血管内皮细胞,运用流式细胞术进行定量分析;并采用免疫组化法定量瘤内微血管密度,比较两种方法检测值的相关性.结果显示流式细胞术实验组与对照组平均检测值(%)具有显著性差异(P＜0.001);其相关性分析提示流式细胞术内皮细胞百分比与免疫组化法微血管计数值紧密相关(CD34,r=0.913, P＜0.001;Ⅷ因子相关抗原,r=0.868,P＜0.001).以上可见,流式细胞术可用于准确、快速、定量地检测实体肿瘤组织中的血管内皮细胞.     

用流式细胞术检测人肿瘤组织细胞多药耐药基因表达产物P170

为研究检测人肿瘤组织细胞多药耐药基因表达产物，采用间接标记法，用鼠抗人Ｐ１７０单克隆抗体，二抗为ＦＩＴＣ标记兔抗鼠Ｉｇ，应用流式细胞仪检测了２９例新鲜实体肿瘤组织和一株多药耐药的Ｋ５６２细胞株。结果显示：１８例肿瘤细胞表达Ｐ１７０，其阳性率为６２．１％，１１例未检出表达，其阴性率为３７．９％；９９．９％Ｋ５６２细胞表达Ｐ１７０。在１８例Ｐ１７０阳性表达的样本中，有１６例阳性表达百分比低于３０％；只有２例高于３０％。提示大多数肿瘤组织细胞表达Ｐ１７０阳性率高，但表达Ｐ１７０肿瘤细胞表达百分比低。检测肿瘤组织的Ｐ１７０表达能为临床治疗提供一个可靠的参考指标。     

表达sFlt-1的小鼠骨髓间充质干细胞介导的抗肿瘤作用研究

目的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是存在于骨髓中的一种具有多向分化潜能和很强增殖能力的细胞.经静脉输注的MSCs能特异性地聚集于新生组织,如伤口和肿瘤等,本实验将MSCs作为基因治疗靶向载体,研究其在肿瘤组织内的抗血管作用.方法从雄性小鼠股骨骨髓中分离和培养MSCs,用流式细胞仪检测CD34、CD29、CD44的表达.再用sFlt-1(VEGF-R1)重组腺病毒感染后,给荷瘤小鼠静脉注射.结果间充质干细胞聚集在肿瘤内表达sFlt-1,使得肿瘤血管生成受抑制、肿瘤细胞凋亡增加、肺转移灶减小、生存时间延长.结论本研究表明,MSCs作为基因的运载工具在抗肿瘤领域可能有一定的应用价值.     

RNA干涉鼻咽癌细胞Raf-1基因表达的实验研究

目的 研究应用载体介导的RNA干涉技术特异性干扰Raf-1基因在鼻咽癌细胞株HNE1中的表达以及对其生物学行为的影响。方法 构建利用U6启动子转录功能的shRNA的载体，在U6启动子下游分别插入含针对Raf-1基因不同位点的特异性RNA干扰序列-67bp寡核苷酸片段，并编号命名为：pshuttle-Raf-1-a（225），pshattle-Raf-1-b（358）和pshuttle—Raf-1-c（474）。将构建的质粒通过脂质体转染人鼻咽癌细胞株HNE1，用RT—PCR分析Raf-1基因的mRNA的表达，流式细胞仪检测转染后HNE1细胞的凋亡率。结果 3种含有针对Raf-1基因不同特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在HNE1细胞中的表达，其中以pSIREN shuttle-Raf-1-b（358）作用最为明显。RT-PCR检测Raf-1基因mRNA表达量下降，流式细胞仪检测细胞凋亡率增加，达到65％。结论 应用载体介导的RNAi技术可特异性干扰Raf-1基因在鼻咽癌细胞HNE1中的表达，使该细胞凋亡率增加，Raf-1基因相对应的mRNA表达下降。     

抗人PCIA1单克隆抗体的制备及其生物特征的研究

目的:筛选制备抗人PCIA1的单克隆抗体,鉴定其生物学特征。方法:采用原核表达并纯化的PCIA1蛋白作为抗原,采用杂交瘤技术制备抗人PCIA1单克隆抗体的杂交瘤,用ELISA进行筛选和鉴定其亚类,并用细胞扒片免疫化学方法检测其反应性。结果:获得了32株分泌抗人PCIA1的McAb杂交瘤细胞,McAb-1A4的染色体呈双亲特点,该McAb与多种人肿瘤细胞株和正常肝细胞株有反应。结论:McAb-1A4可用于PCIA1的细胞内定位研究。