干扰素治疗丙型肝炎效果随访研究

目的：探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因型与干扰素治疗后ＨＣＶＲＮＡ阴转远期效果的相关性。方法;采用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）方法。结果：干扰素治疗后,经过１８ｍｏ－２６ｍｏ的随访,Ⅱ－１ｂ型ＨＣＶＲＮＡ持续阴转率为２０．０％;Ⅲ／２ａ型为７０．０％,两型疗效相差非常显。结论;干扰素治疗丙型肝炎的疗效与丙型肝炎病毒基因型有关,对Ⅲ／２ａ型的疗效优于Ⅱ／１ｂ。     

用PCR检测HIV研究进展

PCR 作为一种新技术,通过对大量HIV阳性,HIV 阴性的高危人群及HIV 阴性的健康人检测,已证实其在诊断HIV 感染中有较其它方法难以比拟的优点。主要表现在它有很高的灵敏度及特异性较其它方法能更早期、迅速、准确地作出诊断。在应用其它方     

外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺细胞修复的相关基因克隆

目的 克隆外源核酸促电脑辐射损伤的小鼠肠腺细胞修复的相关基因。方法,建立BALB／c小鼠电脑辐射后给予外源RNA与生理盐水治疗的6,12,及24h,4和8d的模型,采集空肠组织标本后采用消减杂交基础上的LD－PCR技术,获取与受照小鼠肠腺损伤修复相关的基因克隆,对其进行全自动测序与GeneBank检索,新基因递交给基因库,结果获取了90个与肠腺修复相关的基因,杂交证实在核酸治疗组与生理盐水治疗组之间呈差异表达,其中18个是新基因,GeneBank接受员为AF240164－240181。结论克隆了18个外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺修复相关基因。     

幽门螺杆菌毒素相关基因的克隆、测序及表达

目的　分段扩增、克隆幽门螺杆菌毒素相关基因cag A中间区 cag1,cag2 ,并利用大肠杆菌系统表达 .方法　PCR法扩增 cag A基因 ,双脱氧中止法测序正确后 ,克隆入大肠杆菌表达载体 p BV2 2 0 ,受控于 PRPL 启动子 ,转化大肠杆菌 DH5α,4 2℃进行温度诱导 .结果　 PCR分段扩增出 cag A中间区基因 cag1,cag2 ,分别为 975 ,75 5 bp,克隆入 p UC19质粒 ,测序正确 ;在 p BV中构建 cag1,cag2的重组表达载体p BVcag A1,p BVcag A2 ,工程菌诱导后 SDS- PAGE显示新生表达蛋白带 ,Mr:Cag136× 10 3,Cag2 2 7.9× 10 3,均与预期的 cag A蛋白 Mr一致 ,约占菌体总蛋白的 36 %和 2 4 % .结论　成功克隆分段扩增的 cag A中间区基因 ,并可在大肠杆菌DH5α中高效表达 .     

高通量测定技术检测结核分枝杆菌耐利福平的研究

目的：基于焦磷酸测序(pyrosequencing)技术，建立耐利福平结核分枝杆菌快速检测方法，并探讨其临床应用价值．方法：设计一对聚合酶链反应(PCR)引物，其中一引物经生物素化修饰，PCR扩增含耐药决定区-297bp长的rpoB基因片段，借用链亲和素包被磁珠纯化单链PCR产物．设计2个正向测序引物，运用pyrosequencing技术对耐药决定区进行序列测定．通过对一系列10倍稀释的结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA进行分析，评价所建立方法的检测特异性．     

乳腺癌中P16基因改变及其生物学意义

采用聚合酶链反应——单链构象多态性分析(PCR—SSCP)法对30例乳腺癌及其癌旁组织和10例转移淋巴结标本中P16基因改变进行分析,并对P16基因改变与乳腺癌发生的年龄、病理类型及乳腺癌的分级与预后作了探讨。结果发现:①30例乳腺癌中有2例缺失,8例突变;②10例转移淋巴结标本中有6例突变;③癌旁组织中有2例突变。三者之间突变率相差显著(P<0.01);④P16基因改变与乳腺癌发生年龄、病理类型无关,与乳腺癌分级及5年生存率相关。结论:P16基因以突变、缺失方式参与乳腺癌发生发展,检测P16基因有无异常可辅助诊断病程及预后。     

采用改进的差示PCR技术分离胃癌差异表达基因的研究

目的建立优化的mRNA差示PCR条件;运用建立的条件及GQS-9600分离胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株之间的差异表达基因片段;根据获取的序列,设计引物并运用于胃癌组织、血、活检胃粘膜标本检测,拟从中筛选出检出率与符合率高的数对引物,建立胃癌基因诊断方法.方法以胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株为研究对象,探索mRNA差示PCR的最佳反应条件,运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因片段;以回收的片段作探针,打点杂交证实为真正的差异片段后,对纯化产物进行直接序列分析及GenBank同源性检索,同源性低的序列递交给GenBank;设计引物,采用RT-PCR方法对胃癌组织、血、活检胃粘膜进行检测,筛选出检出率与符合率高的5对引物建立多重PCR诊断胃癌方法.结果①优化的差示PCR条件为:前5轮PCR循环采用94℃ 35s,40℃ 2min,72℃ 30s,后35轮PCR循环采用94℃ 45s,55℃ 2min,72℃ 1min,最后在72℃延伸7min;②确认并分离出差异条带154条,胃癌细胞株泳道中存在而胃粘膜细胞株泳道中缺失的有82条,胃粘膜细胞株泳道中存在而胃癌细胞株泳道中缺失的有35条,胃癌细胞株泳道中表达高于胃粘膜细胞株泳道中的有23条,胃粘膜细胞株泳道中表达高于胃癌细胞株泳道中的有14条,分别来自于H-T11G,H-T11A,H-T11C锚定引物的差异条带为61条,47条及46条;③从胃癌细胞株泳道中存在而胃粘膜细胞株泳道中缺失的82条带中随机挑选出17个差异片段作探针,进行打点杂交,证实在两细胞株之间呈差异表达;④对17个片段进行直接测序及同源性检索分析,其中7个新序列被GenBank接受,接受号为AF071052至AF071058;⑤GCYS-1,GCYS-4,GCYS-8,GCYS-10,GCYS-11号序列引物在26例胃癌标本中检出覆盖率为100%,在9例病理确诊的胃癌患者活检胃粘膜中检出率为100%,在17例病理确诊为胃癌患者血标本中检出率为53%,在其他组织中检出率较低.结论①建立了优化的mRNA差示PCR技术的条件;②分离出了154个差异表达的基因片段;③对17个差异片段进行了测序及分析,其中7个新序列被GenBank接受;④建立多重PCR诊断胃癌方法.     

差异表达基因克隆技术的新进展

分离并克隆差异表达基因是目前功能性研究的热点ｍＲＮＡ差异展示是筛选差异表达基因最有效的技术之一，它的主要不足是有一定假阳性，ＲＤＡ，ＳＳＨ，ＤＳＤ，ＬＳＨ技术能够克服假阳性，但也具有一定的不足，应根据需要选择运用，随着能扩增长片段及具自动校正功能的Ｔａｑ酶出现及应用，这些技术将会不断完善与发展，具有广阔的应用前景。     

中国人肠上皮细胞gamma射线损伤的差异表达基因

小肠是电离辐射的敏感组织．γ射线照射后小肠上皮干细胞的损伤，肠道组织形态和生理功能改变的文献报道较多［１］，但肠道辐射损伤分子机制的研究尚未见报道．我们采用ｍＲＮＡ差异展示技术，分离正常的和经６０Ｃｏγ射线照射的人肠上皮细胞株ＨＩＥＣ细胞的差异表达基因，拟从分子水平探讨电离辐射对人肠上皮细胞损伤的分子机制，为建立辐射损伤的分子诊断标准打下基础．１　材料和方法１．１　材料　①正常人肠上皮细胞株ＨＩＥＣ由Ｐａｔｅｒｓｏｎ肿瘤研究所Ｐｏｔｔｅｎ教授馈送．②ｍＲＮＡ提取试剂盒、ＰＣＲ产物纯化试剂盒皆购自…     

食管癌患者血清胃液脑肠肽变化意义

目的研究食管癌患者血清胃液脑肠肽变化意义.方法用放射免疫法测定25例中晚期食管癌患者血清胃液中物质P(SP),β-内啡肽(β-EP),血管活性肠肽(VIP),胃动素(MTL),促胃液素(GT)和亮脑啡肽(LEK)含量,并以27例相当的正常人作对照.结果食管癌患者血清,胃液SP(pmol/L, 88.0±54.7 vs 38.7±20.9,P＜0.01;23.0±8.0 vs 18.2±7.3,P＜0.05) β-EP(ng/L, 61.7±26.4 vs 36.6±20.8,P＜0.01;51.7±16.1 vs 30.3±12.0,P＜0.01),胃液VIP(ng/L, 88.1±14.3 vs 65.9±19.8,P＜0.01), MTL(ng/L, 204.9±42.7 vs 153.5±27.2,P＜0.01), LEK(ng/L, 55.5±15 vs 31.8±11.6,P＜0.01)含量显著高于正常人,而血清胃液GT(ng/L, 36.5±23.1 vs 61.0±22.5,P＜0.01;1.9±1.0 vs 3.4±2.0,P＜0.01)含量则显著低于正常人,且血清胃液SP,β-EP升高和GT降低呈正相关(P＜0.05).结论晚期食管癌患者血清胃液上述肽类物质可发生变化,且存在一定相关性,联合测定血清胃液这些物质对研究食管癌时脑肠肽类变化有一定意义.