腹主动脉灌注法分离胰腺星状细胞及其培养、鉴定

目的:通过腹主动脉插管灌注胶原酶分离胰腺星状细胞(pancreatic stellate cell,PSC),建立简单易行的PSC分离方法,并对PSC进行培养和鉴定.方法:大鼠腹主动脉插管灌注后,经胶原酶消化、Nycodenz密度梯度离心,分离得到PSC;通过观察细胞形态、胞质内脂滴和免疫细胞化学方法检测结蛋白(desmin)、神经胶质酸纤维蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、α平滑肌肌动素(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达来鉴定PSC.结果:腹主动脉灌注法分离得到PSC,产率、活力和纯度分别为:(15.3±4.6)×103/g体重、(95.0±3.5)%、＞80%;培养24 h后大多数细胞已贴壁,呈星状或多角形,48 h后表达desmin、GFAP,并在96 h后表达α-SMA.结论:通过腹主动脉灌注法较容易分离得到PSC,其产率、活力和纯度较高,经鉴定后能够满足体外实验要求.     

肩膀疼了半年 “元凶”竟不是肩周炎

正半年前,姚女士开始觉得肩膀隐隐作痛,因为年逾50,她判断自己患上了"五十肩"。听人建议后,姚女士开始常常伸胳膊、拉吊环、甩手臂锻炼,希望能缓解肩周炎的症状。可是一段时间之后,她却觉得肩痛愈发严重,背部也有种牵扯般的疼痛感。尤其是晚上,躺在床上,疼痛加倍,折磨得姚女士难以入睡。在这之后,姚女士频繁求医,换了两家医院,做了多     

肠内与肠外营养支持在胰十二指肠切除术后应用的前瞻性研究

目的:探讨肠内营养(enteral nutrition,EN)和肠外营养(parenteral nutrition,PN)支持在胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy,PD)后的临床应用价值?方法:将84例PD患者随机分为两组:EN组(42例)术中置入鼻肠管,术后24 h开始EN;PN组(42例)术后24 h给予PN?两组采用等热量?等氮量方案,比较两组患者的术后并发症?营养相关并发症?营养状况?肝功能指标?术后住院时间和费用?结果:PD后EN和PN均能改善患者的营养状态?EN组与PN组相比:总并发症发生率分别14.3%(6/42)与 33.3%(14/42),组间比较存在显著性差异(χ2 = 4.200,P = 0.040);经口进食时间分别为术后(44.5 ± 7.1)h与(76.1 ± 12.3)h?住院期间费用分别为(51 358 ± 5 114)元与(64 650 ± 11 977)元,两组间比较均存在显著性差异[(t = 14.375,P = 0.017);(t = 6.614,P = 0.003)]?术后第7天肝功能指标(γ-GT?ALT?AST及TBiL)EN组均明显好于PN组,均存在显著性差异?而两组患者病死率?术后胰瘘?胆漏?出血?胃排空障碍等并发症?术后住院时间?营养相关并发症以及术后第7天营养指标无显著性差异?结论:PD后早期肠内营养可以有效改善患者的肝功能,减低术后并发症的发生率,提早术后经口进食时间,降低住院期间费用,早期肠内营养在PD后的营养支持值得推荐?     

小鼠miR-125b慢病毒过表达载体构建与鉴定

目的 构建小鼠胰腺β细胞NIT-1中miR-125b慢病毒过表达载体.方法 从小鼠基因组DNA中用PCR扩增miR-125b的前体序列,经Nhe Ⅰ和PstⅠ酶切后连接到Lv-CMV-GFP载体中,并对重组质粒进行双酶切鉴定和测序分析.将miR-125b过表达载体、pVSV-G和delta8.91质粒共转染293T细胞,收获慢病毒感染NIT-1细胞,流式细胞术分选阳性细胞,RT-PCR鉴定稳转细胞株中miR-125b的表达.结果 成功构建了miR-125b慢病毒表达载体,感染小鼠胰腺β细胞NIT-1后能够成功过表达miR-125b.结论 成功构建miR-125b慢病毒过表达载体,为进一步研究其功能建立了实验基础.     

胰腺癌细胞系BxPC3及胰腺癌组织Ras相关区域家族1A启动子CpG岛的甲基化状态

目的 检测Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)在胰腺癌细胞株BxPC3及胰腺癌组织中的甲基化状态,探讨其启动子异常甲基化在胰腺癌发病机制中的可能作用.方法 采用结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法(combined bisulfite restriction analysis,COBRA)检测胰腺癌细胞株BxPC3、5例正常胰腺组织、13对胰腺癌及相应癌旁正常胰腺组织中RASSF1A启动子CpG岛的甲基化状态,计算其甲基化率.以甲基化酶抑制剂5-Aza-dC(5-Aza-2-deoxycitydine)处理BxPC3,观察处理前后甲基化率变化情况及RASSF1A mRNA表达变化.结果 在BxPC3细胞株中,RASSF1A启动子的CpG岛甲基化率为62.90%;正常胰腺、癌旁及癌组织中平均分别为9.14%、53.79%和55.82%.与正常胰腺组织相比,胰腺癌旁及癌组织的RASSF1A启动子甲基化率明显增高(P值<0.01),而癌旁及癌组织之间无明显差异(P>0.05).BxPC3经5-Aza-dC处理后,RASSF1A的CpG岛甲基化率显著下降至42.50%(P<0.05),同时RASSF1A mRNA表达增强.结论 RASSF1A启动子CpG岛异常甲基化是胰腺癌发生发展中的早期事件,可能参与胰腺癌的发病过程.     

吉西他滨耐药人胰腺癌细胞株的建立及其与肿瘤干细胞的相关性研究

Objectives To establish a gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/ GZ,and to explore the relationship between drug-resistant cell line SW1990/GZ and pancreatic cancer stem cell. Methods Gemcitabine-resistant pancreatic cancer cell line SW1990/GZ was obtained by treating parental cell line SW1990 in vitro with increasing dosage of gemcitabine in culture medium intermittently for 24 weeks. Stable cultures were obtained which were 77. 2-fold increased in resistance relative to parental cells. Gene expressions of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP were determined by real-time PCR. Tumorigenic potential was performed by nude mice xenograft transplant experiments. Side population analysis and CD24CD44 positive cells explore were determined by flow cytometry to examine cancer stem cell proportion. Results Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ underwent obvious morphological and functional changes. Compared with the parental cell line,SW1990/GZ cell was small and turned into round shape. SW1990/GZ had a higher gene expression level of ABCB1/MDR1, ABCC1/MRP and ABCG2/BCRP than SW1990(P <0. 01). Nude mice xenograft transplant experiments showed that only 1 x 105 SW1990/GZ cells were sufficient for tumor formation, whereas an injection of 1 x 105 SW1990 cells did not initiate tumors. Flow cytometry analysis showed that SP proportion in SW1990/GZ was (11.0±1.0)%, whereas in parental SW1990 it was ( 4. 6 ± 0. 9 ) % , CD44CD24 positive cells was (8. 73±0. 81) % in SW1990/GZ, whereas (1.1±0. 4)% in SW1990. Conclusions Gemcitabine-resistant cell line SW1990/GZ has a higher proportion of pancreatic cancer stem cells compared to its parental cell line SW1990. CD44 is mainly responsible for acquired drug resistance,which can be a potential target to overcome acquired drug resistance in pancreatic cancer.     

气大伤身是真的

<正>生气对很多人来说是家常便饭,经常有人说"气死我了"、"我快气炸了"、"太气人了"之类的话。不过,你可知道常常生气的后果吗?那可是大大的吓死人。比如,长期火爆脾气,经常处于发怒状态的人,大多数会造成秃顶;生气的程度轻一点的,则会在额头两侧形成双尖的M字形的微秃……这种外表上的痕迹算是轻的了。     

慢性胰腺炎诊断、分类、分级标准的回顾与思考

常见的致病因素、典型临床症状、影像学、病理组织学证据是慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)诊断的基本要素1-2.国际上,涉及到这些要素的具体诊断标准,以及用于判断疾病严重程度,进行分类分级、指导治疗、提示预后信息的分类标准则存在多种意见,极不统一.     

胰腺坏死感染的临床和实验研究现状

<正>经过两个半世纪尤其是近10年来的研究,急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)治愈率已稳步上升,但病死率仍在20％～30％左右,目前主要死因为感染性胰腺坏死(infected pancreatic necrosis,IPN)及多脏器功能不全综合征(MODF)。由此可见,IPN是ANP致命性并发症及导致死亡的直接原因。因此,研究IPN的发生机制、诊断及防治,成为当今研究ANF,进一步提高其治愈率的重要课题,本文现就IPN的研究进展作一综述。     

囊性淋巴管瘤的CT诊断

目的　探讨CT对囊性淋巴管瘤的诊断价值。方法　搜集了经手术病理证实的 14例囊性淋巴管瘤 ,男 6例 ,女 8例 ,年龄1～ 5 7岁。所有病例均行CT扫描。回顾性分析CT表现并与手术病理对照。结果　根椐囊性淋巴管瘤的发生部位分为头颈 4例、躯干 3例、内脏 7例 ,除 1例伴出血者外 ,病灶密度均匀 ,CT值均类似于水 ,在± 10HU之间。病灶大小直径 5～ 15cm ,边界清楚 ,相邻的组织受压移位。病灶呈圆形或类圆形 ,囊内可有分隔 ,囊壁薄 ,可强化。所有病例病程 1～ 10年 ,平均 ( 4 .5± 1.6)年。除伴出血1例外 ,其余病例均无疼痛 ,3例稍有躯干不适。结论　CT可以清晰地了解囊性淋巴管瘤的发生部位以及病灶累及范围 ,对指导临床治疗有十分重要的价值