组织工程活性皮肤在供皮区创面的应用效果

目的:组织工程活性皮肤应用于供皮区创面的有效性及安全性检测。方法:选取西安铁路中心医院烧伤整形科2003/2004需植皮患者16例,供皮区部分创面采用组织工程全层皮肤覆盖,选取邻近创面作为对照,对照区采用凡士林油纱布覆盖。治疗期间观察创面有无炎症反应、有无渗出及疼痛的轻重情况;随访1个月,对患者创面进行有效性及安全性评估:观察创面的愈合情况及不良反应,以能否揭出纱布为愈合指标,计算应用部位与对照的愈合时间。结果:按实际处理分析,纳入患者20例,进入结果分析16例。①创面愈合情况:患者术后病情平稳,创面无明显炎性反应及渗出,可见组织工程皮肤在创面存活,创面愈合时间与对照相比明显缩短2～4d。愈后未发现任何副作用。②平均愈合时间:应用区域短于对照区域[(7.51±1.68),(9.24±2.84)d,P<0.05]。结论:应用组织工程皮肤可促进供皮区的愈合,更快的治愈供皮区创面,明显缩短平均愈合时间,降低患者的疼痛、水疱形成等不良反应的发生率;为组织工程皮肤的临床应用提供了切实可行的方法。     

超声心动图对三尖瓣闭锁诊断及手术预后的评价

三尖瓣闭锁约占婴儿期先心病的2．3％，居发绀型先心病的第3位，在10岁以前自然死亡率为90％。本研究分析了78例三尖瓣闭锁患者的临床资料，以评价超声心动图在三尖瓣闭锁诊断及判断手术预后中的作用。     

犬脂肪间充质干细胞体外分离培养及其多向分化潜能

目的:为进一步分析脂肪间充质干细胞的生物学特性,建立犬脂肪间充质干细胞的体外分离培养方法,并对其表面标志和多向分化潜能进行鉴定。方法:实验于2006-09/2007-04在解放军第四军医大学组织工程中心完成。①实验方法:1岁龄家犬麻醉后,无菌条件下取犬腹股沟皮下脂肪组织,用Ⅰ型胶原酶消化,离心弃上层脂肪及上清,沉淀用含体积分数为0.1胎牛血清的D/F12培养基制成单细胞悬液,按2×108L-1接种于培养瓶中,细胞长满80%时用胰酶消化传代。②实验评估:分别取第3,5,10代脂肪间充质干细胞,倒置显微镜下连续观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖活性;采用免疫细胞化学和体外诱导分化方法对脂肪间充质干细胞表面分子标志和多向分化潜能进行鉴定。结果:①细胞形态观察:原代培养1d多数贴壁细胞呈圆形;3d时贴壁细胞数量明显增加,大部分呈梭形、三角形;6d后细胞呈团簇状生长,形成集落;9～10d后细胞融合超过80%。传代后2～4h开始贴壁,经过较短的潜伏期后开始增殖,3d即可长满培养瓶底壁。②细胞增殖活性:培养的细胞分裂增殖能力强,无明显的生长滞缓期,第3天进入对数生长期,第7天达到生长峰值,第8天后进入平台期。第3,5,10代细胞传代接种后的潜伏期、对数生长期、平台期无明显差异,传10代后细胞无明显的衰老征象。③细胞表面分子标志的鉴定:第3代脂肪间充质干细胞CD29,CD44均呈阳性表达。④脂肪间充质干细胞的多向分化潜能:向脂肪细胞诱导第6天胞质中出现透亮的小脂滴,油红染色呈阳性;向神经细胞预诱导24h后,细胞由梭形变为栅栏样,正式诱导0.5h后细胞呈双极或多极,3h后细胞形态不再发生变化,神经元特异性烯醇化酶、胶质原纤维酸性蛋白均呈阳性;向成骨细胞诱导第21天可见钙化结节。结论:体外分离培养的犬脂肪间充质干细胞生长稳定、增殖较快,存在脂肪组织来源干细胞的相关标志分子CD29及CD44,诱导后能向脂肪细胞、神经细胞和成骨细胞分化。     

组织工程皮肤修复皮肤缺损成功率与手术方法的相关性

背景：皮肤缺损的常规修复方法多采用自体皮肤移植，需要健康供皮区且会遗留不同程度的瘢痕畸形。组织工程皮肤的成功构建并应用于临床，标志着皮肤缺损治疗的重大突破。目的：通过组织工程皮肤修复皮肤缺损，分析手术方法与愈合率的关系，为组织工程皮肤的临床应用提供实验依据。设计：随机对照观察。单位：解放军第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科，组织病理学教研室，组织工程实验中心。材料：实验于2003-10／2004-03在解放军第四军医大学口腔医学院口腔组织工程实验中心完成。选用2．5-3月龄健康清洁级约克猪6只，随机分为3组：组织工程全层组、组织工程真皮＋自体表皮组、自体移植组，2只／组。每只猪制作8个直径50mm的圆形皮肤缺损创面，16个创面／组，共48个创面。方法：①制备组织工程全层皮肤和组织工程真皮。②组织工程全层组：沿画线自脂肪层切除全厚皮肤，彻底止血，以湿生理盐水纱布覆盖创面备用，此时取出组织工程全层皮肤并于组织工程皮肤上均匀打引流孔以利引流，用生理盐水冲去组织工程皮肤表面的培养液，使表皮层向上平铺于创面上，注意与创面间不能产生气泡。其上分别覆盖单层油纱布，生理盐水纱布、无菌干纱布、弹性海绵垫，每层厚度约为3～5mm，常规打包包扎，最后再以弹性绷带加压包扎。③组织工程真皮＋自体表皮组：以同样方法切除全厚皮肤，将取下的皮肤用取皮鼓反取厚约0．1～0．2mm的刃厚表皮泡于生理盐水中备用。以同样方法取出处理组织工程真皮后覆盖于创面上，即刻覆盖自体刃厚表皮。其余处理同组织工程全层组。④自体移植组：切除全厚皮肤并去除脂肪组织后，回植于自体创面，覆盖各层敷料，加压包扎。⑤每次换药打开创面时，移植皮肤无感染、坏死、脱落且直径不小于3mm即为成活，否则即为失败。于术后4周统计各组创面成活率。主要观察指标：术后4周各组移植皮肤成活情况。结果：术后4周时，组织工程全层组移植皮肤成活率75％，组织工程真皮＋自体表皮组移植皮肤成活率87％，自体移植组移植皮肤成活率94％，3组比较基本相似（χ^2=2．34，P〉0．05）。结论：组织工程皮肤移植修复皮肤缺损的效果与自体表皮移植接近，证明组织工程皮肤修复皮肤缺损是可行的。     

从人外毛根鞘细胞分离获取黑素母细胞

目的：毛囊黑素细胞是皮肤黑素细胞的储库，含有黑素母细胞甚至黑素干细胞，具有更强的增殖潜力。观察人毛囊外毛根鞘细胞中黑素细胞的分布特征，尝试分离获取黑素母细胞。方法：实验于2003—0412006—04在解放军第四军医大学组织工程实验中心和武警医学院附属医院皮肤科完成。消化游离流产胎儿头皮（产妇同意由医院处理流产胎儿）毛囊，用黑素细胞培养基接种，原代培养人外毛根鞘细胞，并观察外毛根鞘细胞和黑素细胞的分布。待原代外毛根鞘细胞融合时，加入胰酶消化，大约一半细胞漂浮时，加入含体积分数为0．10小牛血清的DMEM终止，轻柔吹打，弃去飘浮细胞。用DMEM清洗原瓶后加入黑素细胞培养基，继续培养，寻找黑素（母）细胞克隆。并采用胰酶消化法纯化培养黑素细胞。结果：在贴壁生长的毛根周围发现了外毛根鞘细胞团，以毛囊隆突部位为中心呈纺锤形排列。其中含有黑素细胞：临近毛囊漏斗部和毛球部的黑素细胞体积较大，有两个或者多个长一些的树突；隆突部位周围的黑素细胞体积偏小，树枝少而短。经纯化培养获得黑素（母）细胞集落，集落中心细胞呈短梭形，折光性很强，排列密集，增殖活跃；边缘细胞变大，树突延长；集落之间散在分布的黑素细胞体积更大，树突延长，数量增多至3个以上。结论：实验观察到人毛囊外毛根鞘细胞中有黑素细胞分布，并选择性培养获得黑素细胞克隆，分析克隆中心可能含有黑素母细胞。     

釉基质蛋白对牙周膜成纤维细胞合成蛋白的影响

目的:检测釉基质蛋白作用下牙周膜成纤维细胞合成蛋白的变化,分析釉基质蛋白促进牙周组织再生的作用。方法:实验于2004-04/08在第四军医大学口腔医院组织工程实验室完成。选取11～14岁儿童因正畸需要拔除的无牙周病及龋病的健康新鲜前磨牙,锐利刀片刮除牙根颈部1/3牙龈及牙周膜,采用全牙胶原酶消化法培养获得牙周膜成纤维细胞,经免疫细胞化学检测证实为外胚间充质细胞。取第3代细胞用于实验,分为2组:对照组为含10mL/L新生牛血清的低糖DMEM培养液,实验组为100mg/L釉基质蛋白,用含10ml/L新生牛血清的低糖DMEM培养液配制。将第3代人牙周膜成纤维细胞制备成密度为1×104/mL的细胞悬液,接种入预先放置有细胞爬片的6孔板中,24h后按实验分组更换诱导液。逐日倒置显微镜下观察细胞形态。第3,7天利用免疫组化方法和图像分析技术检测两种细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、牙骨质附着蛋白的表达。结果:①细胞形态学观察:加入诱导因子初期细胞形态无明显变化,随时间延长,实验组细胞突起逐渐变短,与对照组相比有明显差异。②免疫细胞化学检测结果:对照组骨涎蛋白、骨桥蛋白呈弱阳性到阳性表达,实验组与对照组相比,骨涎蛋白、骨桥蛋白均呈现不同程度胞浆着色加深,与作用时间成正比。对照组细胞骨粘连蛋白基本为阴性表达,而实验组细胞第3天时即检测到了骨粘连蛋白的表达,且随时间的延长染色加深。未经釉基质蛋白处理的牙骨质附着蛋白抗体为阴性表达,经过釉基质蛋白作用第3,7天均检测到牙骨质附着蛋白抗体的弱阳性表达,胞浆着色呈淡棕黄色。设立的空白对照和阴性对照均未见着色。③釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞合成骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的影响:与对照组比较,实验组第3,7天骨涎蛋白和骨桥蛋白均明显上调(184.31±5.67,168.20±6.93;181.42±4.99,163.91±5.86;213.02±5.40,194.81±5.06;211.12±5.59,182.06±6.66;P均<0.01),骨粘连蛋白对照组未表达,实验组第3天时检测到表达;实验组第7天骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白上调幅度均明显高于第3天(163.91±5.86,168.20±6.93,P<0.05;182.06±6.66,194.81±5.06,P<0.01;196.73±5.47,204.67±5.12,P<0.01)。结论:釉基质蛋白对人牙周膜成纤维细胞具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白的作用,随时间延长这种促进作用愈明显;并能诱导细胞表达牙骨质附着蛋白。釉基质蛋白在一定浓度下可使人牙周膜成纤维细胞向成骨、成牙骨质样细胞分化。     

急性心肌梗死大鼠梗死区血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1αmRNA表达及人参皂苷Rg1的干预效应

目的:观察人参皂苷Rg1对急性心肌梗死后血管新生及梗死区血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1αmRNA表达的影响及其机制。方法:实验于2005-10/2006-01在中国医科大学附属第一医院循环内科实验室完成。实验分组:健康雄性Wistar大鼠104只,体质量180～220g,随机抽签法分为假手术组8只,对照组、Rg1低剂量治疗组和Rg1高剂量治疗组各32只。实验方法:建立Wistar大鼠急性心肌梗死模型,假手术组开胸不结扎冠状动脉,3d后处死取材;对照组、Rg1低剂量治疗组和Rg1高剂量治疗组分别于术后即刻及术后每天腹腔注射生理盐水1mL、人参皂苷Rg11mg/kg和5mg/kg,术后3,7,10,14d分别取材,每组8只。实验评估:测定血清心肌酶、心肌梗死面积、梗死区微血管密度,逆转录-聚合酶链反应检测梗死区心肌组织血管内皮生长因子和缺氧诱导因子1α的mRNA表达。结果:纳入大鼠104只,均进入结果分析。①人参皂苷Rg1对大鼠心肌酶及心肌梗死面积的影响:Rg1低剂量治疗组、Rg1高剂量治疗组心肌酶较对照组明显降低[(62.25±10.79),(57.64±9.36),(78.63±11.34)μg/L;P<0.05],心肌梗死面积亦明显降低[14d:(12.15±3.68)%,(10.10±3.12)%,(13.94±3.54)%;P<0.05]。②人参皂苷Rg1对大鼠心肌梗死区微血管密度的影响:各组梗死区血管生成数量随着时间的延长呈持续增加的趋势,与对照组比较,差异有显著性意义[Rg1低剂量治疗组14d:(17.29±3.21)个/视野;Rg1高剂量治疗组14d:(23.27±3.42)个/视野;对照组14d:(9.36±3.54)个/视野;P<0.01]。③大鼠心肌梗死区血管内皮生长因子、缺氧诱导因子1αmRNA的表达:心肌梗死后血管内皮生长因子、缺氧诱导因子1αmRNA表达随缺血时间的延长有增高趋势,Rg1低剂量治疗组与Rg1高剂量治疗组明显升高,14d时血管内皮生长因子的增长出现停止或下降[Rg1低剂量治疗组14d:(1.1637±0.1786);Rg1高剂量治疗组14d:(1.7230±0.3102)];而缺氧诱导因子1α继续升高[Rg1低剂量治疗组14d:(1.7263±0.3417);Rg1高剂量治疗组14d:(2.7725±0.3219)]。结论:严重缺血可刺激心肌组织产生大量的血管内皮生长因子、缺氧诱导因子1α,人参皂苷Rg1增加其表达进而刺激心肌梗死区的血管生成,减轻缺血对心肌的损伤。     

先天性心脏病感染性心内膜炎的临床特点

目的 :分析 75例先天性心脏病感染性心内膜炎 (IE)的临床资料 ,为其诊断与治疗提供参考。方法 :分析 75例住院患者中各类先天性心脏病IE的并发率、临床特点、心内膜受累、血培养和治疗情况。结果 :①各类先天性心脏病中主动脉瓣受累的发生率最高 ;②手术证实心内膜可有多个瓣膜及多种病变的损坏 ;③本组中尿检查改变、肝大和脾大的发生率及血培养阳性率下降 ,可能是抗生素广泛应用的结果 ;④ 75例患者中手术治疗 45例 ,治愈 44例 ,死亡 1例 ,其余内科治愈 13例 ,因动脉栓塞或心功能恶化而出院 14例 ,死亡 3例。结论 :①先天性心脏病的早期诊断 ,结合临床心功能的状况 ,早期手术根治 ,是减少IE发生的主要预防措施 ;②赘生物侵犯主动脉瓣的机率高于二尖瓣 ,多起病急 ,短期进展为顽固性心力衰竭 ,唯有尽早行瓣膜替换术。     

校园网安全与ARP病毒

文章介绍了ARP地址解析协议的含义,分析了ARP协议所存在的安全漏洞,指出了ARP欺骗的过程,给出了IP地址和MAC地址绑定、交换机端口和MAC地址绑定等技术等几种能够有效防御ARP欺骗攻击的安全防范方法。     

2008～2010年北京地区门诊口服非甾体抗炎药动态分析

目的:了解北京地区门诊非甾体抗炎药(NSAIDs)的使用情况及发展趋势,比较NSAIDs药物使用状况,为临床合理应用提供参考.方法:采用《医院处方分析》课题组提供的数据,以限定日剂量、用药频度、限定日费用为统计指标,对2008～2010年北京地区门诊口服NSAIDs的应用情况进行统计和分析.结果:2008～ 2010年北京地区NSAIDs销售金额和用药频度呈现下降;用药频度最高为洛索洛芬、萘丁美酮、美洛昔康.结论:北京地区NSAIDs使用基本合理,疗效肯定、不良反应小的NSAIDs具有广阔的市场前景.