人生物素基因的原核表达及纯化

目的构建生物素原核表达载体,获取同源性、可溶性、高纯度的重组生物素融合蛋白,为生物素的深入研究及肿瘤的早期诊断奠定基础。方法从胃癌细胞中提取RNA,经RT-PCR扩增,克隆出生物素基因;用BamHⅠ和HindⅢ对生物素DNA和载体pET32进行双酶切,构建pET32．生物素重组质粒;将重组质粒转化BL21感受态细胞,通过氨苄青霉素抗性、PCR和重组质粒双酶切筛选重组子转化菌落,经DNA测序及BLAST比对,确认生物素基因序列正确性以及插入pET32质粒的位点和方向;用IPTG诱导表达,Western-Blotting鉴定。用Ni2＋金属螯合层析柱纯化重组融合蛋白。结果通过RT-PCR。经1％的琼脂糖凝胶电泳检测,扩增的生物素DNA片段与预期大小一致。经双酶切及DNA测序鉴定,生物素DNA定向插入了pET32质粒。用重组质粒转化大肠杆菌BL21、诱导表达和纯化目的蛋白。经Western．Blotting鉴定。所诱导的蛋白为重组生物素融合蛋白。结论成功构建了生物素基因原核表达载体,表达和纯化了生物素融合蛋白。     

中国海域海洋细菌抗生素敏感性分析

目的对中国海域海洋细菌的抗生素敏感性进行分析,为治疗海洋相关性的感染提供依据。方法对中国海域203个采样点获得的海洋标本进行细菌鉴定,用BIOMIC药敏测定仪进行抗生素敏感性判定,用WHONET5.4软件进行统计分析。结果中国海域共分离到海洋细菌569株,其中弧菌222株、肠杆菌100株和非发酵菌87株。弧菌属:中国海域弧菌对亚胺培南、左氧氟沙星、四环素、氯霉素、第三、四代头孢敏感率较高,达85%。中国海域弧菌对氨苄西林和哌拉西林耐药率达40%和20%左右;经χ2检验,不同海域所分离的弧菌对抗生素耐药率不同(P<0.05),渤海海域菌株对抗生素耐药率最高,南海最低。肠杆菌科:中国海域肠杆菌株对碳青霉烯类敏感率达90%左右,中国海域菌株对哌拉西林耐药率达30%左右,其中黄海海域菌株对23种抗生素均有不同程度耐药。非发酵菌属:中国海域菌株对头孢吡肟和碳青霉烯类敏感率80%左右,中国海域菌株对磺胺耐药率30%左右。结论中国海域海洋细菌对临床常用的某些抗生素存在不同程度的耐药性,提示我们要合理使用抗生素,减少抗生素对环境的污染。     

河豚毒素中和性单抗的制备、鉴定及TTX检测方法的建立

目的研制河豚毒素中和性单抗,建立基于河豚毒素单抗的河豚毒素检测方法。方法用TTX-KLH免疫Balb/c小鼠,用TTX-BSA间接ELISA筛选,建立杂交瘤细胞系,腹腔接种Balb/c小鼠诱生腹水,Protein A Sepharose CL4B亲和柱纯化,SDS-PAGE、间接ELISA鉴定;用常规法确定TTX对昆明小鼠的LD50;将单抗和TTX混合物注入小鼠腹腔,检测单抗对TTX的中和能力;建立检测TTX的竞争ELISA法。结果获得了2株TTX中和性单抗,腹水用Protein A Sepharose CL 4B纯化后抗体纯度大于95%;常规间接ELISA检测,显示单抗5E7的结合能力高于5E4。单抗对2 LD50 TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56μg/mL。结论获得了TTX中和性单抗,对致死剂量TTX攻击昆明小鼠的保护率为50%,建立了基于中和性单抗的TTX检测方法,TTX的最小检出浓度为1.56μg/mL。     

中国海域分离的啮氏艾肯菌致病性和抗生素敏感性研究

目的 就中国海域分离的啮氏艾肯菌对小鼠的毒力及伤口感染情况进行研究,并进行抗生素敏感性实验.方法 昆明小鼠腹腔注射啮氏艾肯菌悬液,观察一般状态、白细胞计数和血培养.第5天脱颈处死后解剖取脏器甲醛固定,石蜡包埋、制片,HE染色,光镜观察;昆明小鼠致伤后浸泡在含啮氏艾肯菌的人工海水中45～60 min,打捞后分笼于层流柜中饲养.于致伤浸泡后不同时间做白细胞计数及血培养,并观察一般状态和伤口炎性反应,定时取伤肢分泌物做细菌培养;实验完毕后伤肢甲醛同定,石蜡包埋、制片,HE染色,光镜检查;用K-B法做啮氏艾肯菌对各种抗生素药物敏感性实验.结果 小鼠注射啮氏艾肯菌液后,白细胞升高,感染12 h后20%小鼠心和肝脏有细菌生长.小鼠感染啮氏艾肯菌后,病变部位以肺、肝及.肾脏为重,病变性质主要是造成血液循环障碍,引起不同程度的充血、出血及血停滞现象.致伤小鼠经含啮氏艾肯菌的海水浸泡后,6、12、24、48、72 h伤肢培养均为阳性,感染后48 h时20%小鼠肠组织细菌培养阳性,其余时间点和其他组织细菌培养均为阴性.伤肢组织可见肌纤维排列疏松、紊乱、断裂,横纹肌间较多炎细胞浸润.啮氏艾肯菌对复方新诺明、哌拉西林、美洛培南、磺胺的敏感性仅为67%,对其他抗生素均表现为敏感.结论 中国海域分离的啮氏艾肯菌具有致病力,啮氏艾肯菌对复方新诺明、哌拉西林、美洛培南、磺胺的敏感性较低,对其他抗生素均表现为敏感.     

抗腐败西瓦菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

目的 制备和鉴定抗腐败西瓦菌单克隆抗体(mAbs),为建立重要海洋细菌快速ELISA检测试剂盒奠定基础.方法 用灭活腐败西瓦菌免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备出抗腐败西瓦菌杂交瘤细胞株,用Giemsa染色对其进行染色体鉴定,并用间接ELISA方法筛选、鉴定其与腐败西瓦菌及其他重要海洋细菌的交叉反应性和效价.结果 共获得4株抗腐败西瓦菌的杂交瘤细胞株(02D6、02H12、03G4、03A7),均符合杂交瘤细胞染色体特点,其培养上清效价为10-1～10-2,具有良好的特异性和免疫反应性.结论 研究制备、筛选出抗腐败西瓦菌的特异性抗体,有助于进一步建立重要海洋细菌快速检测试剂盒.     

2006年度临床常见细菌分布及耐药性监测分析

目的了解2006年度本院细菌分布及对抗菌药物耐药情况,为临床抗感染治疗提供依据。方法药物敏感性试验采用琼脂纸片扩散法,耐药性分析采用WHONET 5.4软件。结果2006年度我院共收集患者首次分离株细菌1 497株,革兰阴性菌878株,革兰阳性菌400株,真菌219株。铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌、阴沟肠杆菌是最常见菌,检出率分别为17.0%、13.2%、8.9%、7.0%、6.9%、4.7%、3.7%、3.2%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌的比例分别为63.9%、82.1%,未发现对万古霉素和替考拉宁耐药的葡萄球菌。肠球菌对万古霉素耐药率为1.0%,对替考拉宁耐药率为3.8%。革兰阴性菌对亚胺培南-西拉司丁钠的敏感性最好,产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和克雷伯菌株的检出率分别为26.1%和34.2%。在痰标本中铜绿假单胞菌检出率最高,为22.2%,对亚胺培南-西拉司丁钠和头孢他啶敏感性最好;在血标本中大肠埃希菌检出率最高,共9株,占血标本阳性率的18.4%,对万古霉素敏感性最好,耐药率为0。结论加强细菌耐药性监测,以推动临床抗菌药物的合理使用。     

用夹心ELISA检测沙眼衣原体

目前，国内对沙眼衣原体感染的实验室诊断以直接免疫荧光法和聚合酶链式反应（PCR）为主，这两种方法本身的局限性限制了其在广大基层医院的应用，使其难以成为一种临床常规检查项目。酶免疫检测法以其快速、简单、经济和可同时检测大量标本而深受广大基层医院的欢迎。本文建立的方法将会满足国内广大基层医院的需求。材料和方法1材料1．l抗沙眼衣原体的多克隆抗体1．2抗沙眼衣原体75KDOMP的单克隆抗体5D9和ID6（本室自制）。2方法2．l沙眼衣原体多克隆抗体的制备，纯化与标记2．1．1家兔的免疫于家兔腋窝、腹股沟皮下多点注射台福氏完…     

胃癌组织CD1α和survivin表达及临床意义

目的:观察胃癌组织中树突状细胞及树突状细胞前体的分布,并探讨survivin作为胃癌生物治疗靶抗原的可能性.方法:用免疫组织化学染色对不同类型胃癌组织132例(中分化腺癌72例,低分化腺癌60例)CD1α,CD68,S100和survivin蛋白的表达进行了检测.结果:中分化腺癌CD1α表达率为33%(24/72),低分化腺癌CD1α表达率为10%(6/60),二者有显著性差异(x2=6.56,P＜0.05).中分化腺癌S100表达率为50%(36/72),低分化腺癌表达率30%(18/60),二者无显著性区别(P＞0.05).CD1α阳性胃癌组织S100表达均阳性,二者有良好的一致性.中分化腺癌CD68表达为91.6%(66/72),低分化腺癌表达率为60%(36/60),二者无显著性差别(P＞0.05),CD68和CD1α在中分化腺癌和低分化腺癌中的分布也有良好的一致性.Survivin在中分化腺癌的表达为91.7%(66/72),低分化腺癌表达为90%(54/60),二者无显著性差别(P＞0.05).结论:survivin和DC的结合在胃癌生物治疗中具有潜在而重要的应用价值,以survivin为靶抗原的胃癌个体化DC疫苗值得进一步深入研究.     

未行LASIK手术92例原因分析

目的 :分析 92例未行准分子激光角膜原位磨镶术 (LASIK)的原因 ,了解手术的适应范围。方法 :对 4 6 0例近视患者进行术前常规检查 ,对其中未行手术的 92例的病因进行分析。结果 :92例中眼底病变 32例占 34.8% ;对手术顾虑大 2 8例占30 .4 % ;眼压偏高 12例占 13.1% ;角膜厚度不足 8例占 8.7% ;角膜屈光力偏大偏小 6例占 6 .5 % ;角膜点状浸润、瘢痕 4例占4 .3% ;睫状肌痉挛 2例占 2 .2 %。结论 :近视预行LASIK手术的患者有一定的选择性 ,医患双方术前应加强谈话、沟通