海水中腐败斯瓦尼菌毒力和伤口感染能力研究

目的:研究从海水中分离出的腐败斯瓦尼菌的致病性。方法:毒力实验组:22只二级昆白小鼠随机分为4组:实验组腹腔注射腐败斯瓦尼菌,阳性对照组注射标准金葡菌和标准大肠菌,阴性对照组注射无菌生理盐水。伤口感染组:22只SPF小鼠,腿部致伤后随机分为4组:实验组(浸泡含有细菌的人工海水)和阳性对照组(含有标准金葡菌、标准大肠菌),阴性对照组(浸泡无菌人工海水)。观察小鼠一般状况、白细胞、血培养、脏器和伤口培养及病理检查。结果:毒力实验:实验组12 h血培养阳性率28.6%;脏器阳性率42.9%。伤口感染实验:伤口感染阳性率100%,脏器培养阳性率28.6%;病理学检查伤肢肌层水肿、皮下横纹肌间弥漫大量嗜中性粒细胞。结论:自海水中分离出的腐败斯瓦尼菌在106CFU.mL-1时,具有感染能力,可致小鼠伤口、脏器感染和败血症。     

创伤弧菌溶血素基因的高效表达与鉴定

目的:构建创伤弧菌溶血素基因(vvs)的融合表达载体,并实现创伤弧菌溶血素在大肠杆菌中的高效表达.方法:用一对创伤弧菌溶血素基因特异性引物从创伤弧菌基因组DNA中钓取眦基因,T-A克隆后测定核苷酸序列,构建pET-32a( )-vvc融合表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物行SDS-PAGE并进行West-ern Blot鉴定.结果:构建了pET-32a( )-vvc融合表达载体,DNA测序证明,获得的vvc基因长度为1311 bp,与Gen-Bank中报道的创伤弧菌溶血素基因序列完全一致.SDS-PAGE分析表明,vvc融合蛋白Mr为71×103,其表达量约占菌体总蛋白的32%.Western blot结果显示,目的蛋白可与创伤弧菌免疫后的小鼠血清特异性结合.结论:成功地实现了VVC基因在大肠杆菌中的高效表达,为进一步研究僦蛋白的生物学功能奠定基础.     

多种指标联合检测非小细胞肺癌的诊断价值

目的：探讨血清中神经元特异性烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片断（CYFRA21‐1）、乳酸脱氢酶（LDH）检测在非小细胞肺癌临床诊断中的价值。方法选择病理确诊的非小细胞肺癌患者86例作为研究对象,选取50例非肿瘤肺部感染患者及60例体检健康者血清作对照,采用Beckman全自动免疫分析系统检测患者血清中CEA、CYFRA21‐1水平,Roche411检测患者血清中NSE水平,Beckman全自动生化仪（AU5821）检测LDH水平,分析NSE、CEA、CYFRA21‐1、LDH水平与非小细胞肺癌临床特征之间的关系。结果（1）非小细胞肺癌患者血清中NSE、CEA、CYFRA21‐1、LDH水平明显高于非肿瘤肺部感染患者及健康者;（2）非小细胞肺癌组中NSE在未分型患者中水平明显高于鳞状细胞癌和腺癌患者,CYFRA21‐1在鳞状细胞癌中水平较高,CEA、LDH的水平差异不明显;（3）NSE、CEA、CYFRA21‐1联合检测阳性率高于NSE单独检测的阳性率。结论血清NSE、CEA、CYFRA21‐1水平联合检测有利于提高非小细胞肺癌的诊断率。     

生存素—肿瘤免疫治疗中的新靶点

 细胞毒性T细胞(CTL)的免疫功能在机体抗肿瘤免疫中起决定作用。肿瘤抗原激活CTL及CTL杀伤肿瘤细胞的前提是CTL对肿瘤抗原的有效识别。与抗体和B细胞受体不同，CTL既不能直接识别游离抗原，也不单独识别出现于细胞表面的抗原片段，但是CTL的T细胞受体(T Cell Receptor，TCR)既能识别抗原递呈细胞(Antigen-presenting Cell，APC)又能识别靶细胞上MHC-1类分子及其所递呈的表位肽，这就是所谓的“双识别”，也是MHC限制性的基础。“双识别”产生CTL活化的第一信号，CTL与APC间CD28-B7、LFA-1-CD54、CD2-CD58等多种共刺激分子的相互结合可产生多种第二信号，从而使CTL充分活化。     

血培养中病原菌的分布及耐药性分析

目的 了解血培养的送检、检出及常见细菌的耐药性状况,指导临床对血液细菌感染患者的治疗.方法 用BacT/ALERT 3D全自动血培养仪培养,用VITEK系统鉴定菌种,用琼脂扩散法进行细菌的药敏测试.利用Whonet 5.3和Excel软件分析细菌分布、种类变化及药敏测试的数据.结果 我院自2002年11月～2006年4月共送检血培养标本2 115例,阳性率为14.14%;其中革兰染色阳性菌135例,革兰染色阴性菌125例,真菌49例,各占总数的43.69%、40.45%和15.86%.结论 及时了解血培养结果可以对临床有针对性的抗菌治疗提供依据,降低病死率,提高治愈率.     

抗河流弧菌单克隆抗体的建立及初步鉴定

目的 制备高效、特异的抗河流弧菌单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb),为海洋致病细菌的快速免疫诊断提供技术支持.方法 选用雌性BALB/c小鼠(8周龄)制备成为灭活河流弧菌免疫小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术,制备出抗河流弧菌杂交瘤细胞株,用Giemsa染色对其进行染色体鉴定,并用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法筛选其与河流弧菌及其他重要海洋细菌的交叉反应特异性.结果 共获得4株抗河流弧菌mAb,均符合杂交瘤细胞染色体特点,具有良好的特异性和免疫反应性,分别命名为01H10,02F12,05F3和03G10.结论 本研究制备、筛选出抗河流弧菌的mAb,有助于建立抗河流弧菌快速免疫检测试剂盒.     

血浆1-3-β-D葡聚糖检测深部真菌感染的应用研究

目的探讨血浆1-3-β-D葡聚糖水平检测与传统真菌培养方法的一致性,为深部真菌感染的临床诊断寻找快速、准确的方法。方法对212例临床疑似深部真菌感染病例采集静脉血标本,用MB-80微生物动态快速检测系统测定血浆1-3-β-D葡聚糖,同时行痰液真菌培养和真菌涂片染色,比较血浆1-3-β-D葡聚糖水平检测与传统真菌培养方法的一致性。结果本组88例血浆1-3-β-D葡聚糖阳性,24例可疑阳性,阳性率52.8%。84例痰液真菌培养阳性,阳性率39.6%,其中78例(92.9%%)1-3-β-D葡聚糖阳性。46例真菌涂片染色阳性,阳性率21.7%,其中42例1-3-β-D葡聚糖阳性。若以真菌培养结果作为诊断标准,则1-3-β-D葡聚糖检测的灵敏度为95.3%,特异性为90.6%。结论血浆1-3-β-D葡聚糖水平检测比痰液真菌培养能更早、更灵敏地反映深部真菌感染,但具有一定的假阴性率,故应同时行真菌培养,以提高诊断准确性。     

创伤弧菌实验室诊断的研究进展

创伤弧菌自然存在于近海和海湾的海水和海底沉积物中，属弧菌属，为低度嗜盐菌。流行病学和微生物学研究显示，海水温度超过20℃持续2周以上，海水可污染大量创伤弧菌。人通过进食生的牡蛎，经胃肠道黏膜或破损的皮肤接触海水而感染创伤弧菌。临床主要表现为原发性败血症、下肢创伤感染，出现大疱性皮肤损害、皮肤淤斑坏死、蜂窝组织炎等，同时伴高热、低血压、休克。病情进展迅速，最终发展为感染性休克、多器官衰竭甚至死亡，死亡率高达70％。     

EB病毒感染的核酸检测:标本类型的选择

近年来的研究表明,EB病毒(epstein-barr virus,EBV)感染与多种疾病的发生有密切的关系.由于EB病毒独特的感染方式,其实验室诊断特别是核酸检测显得尤为重要.本文就EB病毒的生物学特性、感染方式、抗体产生,特别是核酸检测中标本类型的选择、标准化以及未来的检测方向等问题进行了述评和展望,以期为EB病毒感染相关疾病的诊断和预后评判提供更准确的核酸检测结果.     

海洋细菌的三种保存方法比较

应用10%脱脂乳、35%甘油肉汤和鉴定卡分别在-80 ℃保存海洋细菌,在保存3个月、6个月、1 a和2 a后分别复苏菌种,进行菌种的生化鉴定和药敏测评.发现10%脱脂乳和35%的甘油肉汤对各种菌种的保存效果都很好,到2 a时复苏率和鉴定率都为100%;鉴定卡对肠杆菌、非发酵和肠球菌保存到2 a时的复苏率和鉴定率为100%,但是对弧菌的复苏率则在保存3个月和6个月时为100%,到1 a时降低为80%,到2 a时仅为30%.认为10%脱脂乳和35%甘油肉汤在海洋细菌保存中效果较好,可以长期保存;鉴定卡短期保存细菌是可行的.