Th细胞极化群体在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的　了解慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染者外周血中辅助性T细胞（Th）内干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）和转化生长因子-β（TGF-β）的表达情况,以测定Th1/Th2 /Th3细胞的百分数,探明Th细胞各极化群体在慢性HBV感染中的作用.方法　常规分离外周血单个核细胞（PBMC）,在佛波脂（PMA）、钙离子导入剂伊屋诺霉素Ionomycin、细胞内转运阻断剂莫能星Monensin的刺激下,采用流式细胞分析术（FACS）对慢性HBV感染者外周血单个Th细胞内IL-4、IFN-γ和TGF-β的表达进行分析.结果　正常对照组,2.3%-18.6%的CD4+T细胞为Th1细胞,0.9%-9.2%为Th2细胞；0.7%-7.1%的细胞仅表达TGF-β, 为Th3细胞.在慢性HBV感染者外周血单个CD4+T细胞中,以Th0细胞居多；而Th1细胞则随着慢性乙型肝炎肝脏炎症活动的加剧而明显增多,在炎症活动明显的慢性乙型肝炎,其Th1百分数明显高于炎症活动呈静止状态的慢性乙型肝炎；Th2细胞在慢性HBV感染的不同阶段则较为恒定(P>0.05),但明显高于对照组(P<0.05).Th3细胞的百分数则随着肝组织炎症活动的加剧,其比例也明显减少(P<0.05),在无症状携带者（AsC）组,Th3细胞的百分数远高于慢性乙型肝炎组及对照组(P<0.05) .Th3细胞重叠于Th2细胞之中.结论　Th1细胞类因子与炎症活动呈正相关,Th2细胞可能与HBV感染的慢性化相关联.而Th3细胞与Th2细胞协同发挥负性免疫调节作用,并可能与慢性HBV感染的免疫耐受状态相关联.     

乙型肝炎病毒核心启动子部分缺失真核表达载体的构建及对病毒抗原表达的影响

乙型肝炎病毒核心启动子 (ＣＰ)部分缺失变异已证实在几种ＨＢＶ感染的临床现象中存在[1 3 ] 。我们在一组 14例血清抗 ＨＢｅ阳性的无症状携带者中 ,发现有 9例在ｎｔ174 8(或ｎｔ174 7)至ｎｔ176 7间 2 0 (或 2 1)个核苷酸的缺失 ,此 9例中有 5例合并有ｎｔ1896Ｇ→Ａ点变异[4] 。本研究在此基础上 ,拟构建这种ＣＰ 2 0 / 2 1ｂｐ缺失及合并存在Ａ1896点变异的ＨＢＶ全基因重组真核表达载体 ,并转染ＨｅｐＧ2细胞 ,以研究此类变异株对病毒抗原表达的影响。一、材料与方法1 材料 :ＥＢＯ ｐｐｌｐ质粒由美国Ｓｃｒｉｐｐｓ研究所Ｆｒａｎ…     

干扰素α/β受体慢性乙型肝炎肝组织的免疫组化定位

目的:IFNα/βR在慢性乙型肝炎患者肝脏组织内的免疫组化定位及其对干扰素应答的预测作用.方法:应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法,对40例慢性乙型肝炎患者肝脏组织内IFNα/βR的分布特点进行了观察.结果:IFNα/βR在慢性乙型肝炎患者肝脏组织肝细胞膜和胞质内均有不同程度的表达,其中2例患者血管内也有分布.结论:慢性乙型肝炎患者肝肝组织内非溶性的IFNα/βR的表达量可能系IFNα干扰素应答率更为有效的预测指标.     

ＲＦＬＰ基因分型在动态监测乙型肝炎病毒基因变异中的应用

目的 探讨基因分型结合克隆后测序方法在动态监测ＨＢＶ基因变异中的价值。方法 分析１例重型肝炎患者发病后血清,用ＰＣＲ扩增血清中ＨＢＶ perＳ／Ｓ基因片段并克隆,２份标本各随机挑取３个阳性克隆进行测序;同时用ＲＦＬＰ方法分析２份血清中ＨＢＶ毒株的基因型。结果 ＲＦＬＰ分析２份血清为Ｂ基因型为主的Ｂ／Ｃ基因型混合毒株感染;６个克隆中仅１株为Ｃ基因型。比较２份血清ＨＢＶ perＳ／Ｓ克隆核酸序列,有１７０个点位的差异,剔除Ｃ基因型株后,仅５４个位点差异。结论 克隆后测序结合ＲＦＬＰ对ＨＢＶ基因型测定有助于更准确地对ＨＢＶ基因变异进行动态分析。     

HBV基因型(A～F)多引物对PCR分型法的初步建立

建立一种简便易行的乙型肝炎病毒基因型分型方法 (只需ＰＣＲ)。对ＧｅｎＢａｎｋ中查获的 114例ＨＢＶ全序列进行比较分析 ,找出每种基因型相对于其他 5种基因型的独特序列 ,并根据这些独特序列设计出 6对分别针对Ａ～Ｆ基因型的特异引物。用这 6对引物分别对标本进行ＰＣＲ ,根据阳性结果判断出标本的基因型。进一步简化该方法 ,用多引物对ＰＣＲ法 (ＭｕｌｔｉｐｌｅｘＰＣＲ) :将Ｂ、Ｃ、Ｄ 3种基因型的特异引物混合进行ＰＣＲ ,并根据扩增片断的大小判断基因型。用此方法对已鉴定的Ｂ、Ｃ、Ｄ型标本进行比较与验证。结果表明 ,单引物对…     

瞬时弹性记录仪检测肝纤维化影响因素及稳定性分析

目的 探讨影响瞬时弹性记录仪FibroScan(R)测量肝纤维化成功率因素及其重复性.方法 用FibroScan(R)对637例健康人群、慢性乙肝病毒携带者、慢性肝炎和肝硬化患者共进行939次系列肝脏硬度测量.其中302例受检者进行了2次系列检测.对同一检测对象,两位操作者分别检测或同一操作者分别进行2次系列检测,每系列检测取10个检测值. 取中位数为最终检测值.分析评价体质量指数、性别、年龄、疾病状态等对检测成功率的影响,组内相关系数(ICC)评价FibroScan(R)检测结果 的可重复性.结果 14例无法获得弹性值,失败率为2.2%.失败率与疾病状况无关,质量指数高将使成功率降低(t=3.112,P=0.002).女性成功率较男性低(t=-2.193,P=0.029).对同一检测对象,同一操作者多次操作或不同操作者进行FibroSear(R)检测,ICC分别为0.970、0.847;对于健康和慢性乙肝病毒携带受检者,FibroScan(R)检测稳定性下降(ICC分别为0.736、0.639).既往肝硬化并发症病史及高肝功能Child-Pugh评分将使肝硬化患者FibroScan(R)弹性值升高.结论 FibroScan(R)检测慢性肝病患者肝纤维化程度稳定性良好;高体质量指数降低操作成功率:高弹性值可能预测肝硬化并发症及肝功能代偿状态.     

乙型肝炎病毒C基因调节序列变异分析

ＨＢＶＣ基因上游约 2 0 0ｂｐ序列(ｎｔ 16 0 0～ｎｔ 185 0 )是重要ＨＢＶ基因调控区。Ｔ 176 2Ａ 176 4(ｎｔ 176 4Ａ→Ｔ ,ｎｔ 176 4Ｇ→Ａ ,)变异在慢性ＨＢＶ感染者是变异的热点。为了解我国ＨＢＶ流行株Ｃ基因调节序列及变异情况 ,分别对 7例慢性无症状ＨＢＶ携带者和 7例亚急性重症乙型肝炎患者ＨＢＶＣＰ区序列进行了分析。1　研究对象　 7例慢性无症状ＨＢＶ携带者 (ＡｓＣ) (3例来自广东地区 ,4例自东北地区 )、7例亚急性重症乙型肝炎患者 (ＦＨ) (为我科 1993～ 1996年间收治的住院患者 )。酶联免疫法检测ＨＢＶ血清标志物。2…     

HBe抗体阳性的肝炎静息与活动者HBV X及C基因变异的对比研究

目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）X及C基因变异是否与e抗体阳性的HBV感染的不同临床现象相关。方法 对e抗体阳性14例无症状携带（AsC）者及e抗体阳性14例慢性活动性肝炎（CAH）患者的血清HBV X及前C/C基因序列进行克隆、测序。结果 AsC组中，12例（85.7%）X基因上出现核苷酸插入、缺失、点突变，导致X基因编码的框移而提前终止，或提前出现终止密码子，从而使X蛋白被截短，而14例CAH均编码154个氨基酸的完整X蛋白，没有出现上述X基因的变异；AsC与CAH组中，前C终28变异分别为7例和10例；CAH组C区平均发生氨基酸替代数量（5.71±2.20）显著高于AsC组（2.71±1.73，P<0.001）；C区Val60、Gly87、Leu97变异仅出现于CAH组而不见于AsC病例中，Gln79、Gln135变异多见于CAH而罕见于AsC病例中。结论 X基因的变异所致X蛋白的截短与e抗体阳性肝炎静息的无症状携带临床现象密切相关；C基因的热点变异与e抗体阳性的HBV感染肝炎活动的临床现象密切相关。     

医用臭氧在内科临床中的应用

臭氧(臭氧,ozone,O3)是由3个氧原子组成的、空气中不稳定、常温常压下约45 min转化成氧气.医用臭氧是用医用纯氧通过臭氧发生器产生的臭氧与医用氧气的混合气体,所产生的臭氧浓度必须是能够精确调控的.……     

糖皮质激素治疗SARS的探讨

目的　探讨糖皮质激素在严重急性呼吸综合征 (SARS)治疗中的作用。方法　对 2 0 0 3年 1月～ 5月在本院收治的 99例SARS患者的临床治疗进行回顾性分析。结果　糖皮质激素多采用早期、小剂量、短疗程方案。激素组 4 6例 ,非激素组 5 3例。激素组与非激素组年龄与性别构成比差异均无统计学意义(P >0 0 5 ) ;退热时间和肺部炎症吸收时间 ,激素组分别为 6 3±3 5天和 1 8 2± 7 8天 ,非激素组分别为 8 1± 3 2天和 2 1 7±8 9天 ,两组比较差异有统计学意义 (P <0 0 5 )。结论　早期、小剂量、短疗程使用糖皮质激素能明显缩短SARS的病程 ,加快肺部炎症的吸收