SELEX技术筛选结核分枝杆菌MPT64蛋白DNA适配子方法学研究

目的 利用指数富集配体系统进化(SELEX)技术筛选能与结核分枝杆菌MPT64蛋白特异结合的寡核苷酸适配子.方法 体外合成长度为78个核苷酸的随机ssDNA文库,利用SEL-EX技术筛选,以MPT64蛋白为靶物质进行12轮筛选,利用生物素-亲和素显色系统检测寡核苷酸与蛋白的结合性.结果 SELEX技术筛选MPT64蛋白适配子的技术体系:PCR扩增的最佳退火温度为65℃;文库优化时,最佳Mg2+的浓度为1.5 mmol/L;不对称PCR法制备ssDNA时,Mg2+的浓度为0.75 mmol/L;以酶联板为介质筛选时,在10轮后筛选达到饱和,且随着筛选轮数的增加,PCR扩增产物的电泳条带逐渐单一、致密,亲和性检测显示第10轮获得的适配子库,比初始的文库亲和性吸光度(A)值增加了9.18倍.将适配子库克隆,随机挑取10个单克隆子,利用混合夹心法检测其与MPT64的亲和性,亲和性范围分布在0.572～1.606之间.结论 已初步筛选到与MPT64蛋白高亲和性结合的DNA适配子.     

亚低温对构建脑梗死模型大鼠梗死区神经再生微环境的影响

BACKGROUND: Numerous studies have demonstrated that mild hypothermia has a better protective effect on neurons after cerebral infarction. OBJECTIVE:To investigate the effect of mild hypothermia on nerve regeneration microenvironment of infarcted area in rat models of cerebral infarction and analyze its possible effects on neural functional recovery after cerebral infarction. METHODS:Twenty out of 65 adult female Sprague-Dawley rats were randomly selected as the sham group. The remaining 45 rats were subjected to carotid artery ligation to establish rat models of cerebral infarction. Five rats were rejected because of modeling failure or death, the remaining 40 rats were randomly and evenly divided into cerebral infarction and mild hypothermia groups. The head temperature of rats in the cerebral infarction group was downregulated to (37±1) ℃ using a semiconductor refrigeration instrument. The rats were transferred to the room with the temperature of 25 ℃ after the operation. Brain hypothermia was also induced in rats from the mild hypothermia group. At 13.0-14.0 minutes after establishing rat models of cerebral ischemia, the head on the side of cerebral ischemia was tightly connected with the probe of the semiconductor refrigeration instrument. The refrigerator temperature was adjusted to 6-8 ℃, so as to make the temperature of brain tissue on the lesion side at 32.0-33.0 ℃ for 4 hours. RESULTS AND CONCLUSION:Compared with the cerebral infarction group, the BBB scores of rats in the mild hypothermia group were distinctly increased, and the volume of infarcted area decreased. At 1 day after modeling, the expression level of growth associated protein 43 mRNA in brain tissue of rats in the mild hypothermia group was close to that in the cerebral infarction group. At 2 weeks after modeling, the expression level of growth associated protein 43 mRNA in brain tissue of rats in the mild hypothermia group was significantly increased compared with that in the cerebral infarction group. These results suggest that mild hypothermia therapy can protect nerve cells against injury caused by cerebral infarction and promote the recovery of neurological function. Its underlying mechanism may be related to the up-regulation of the expression of growth associated protein 43 in ischemic penumbra.     

显微镜观察药物敏感性技术快速检测结核分枝杆菌研究

目的 建立显微镜观察药物敏感性(MODS)技术并应用其进行结核分枝杆菌(MTB)的快速检测.方法 用24孔细胞培养板液体培养方法建立MODS技术,并对其方法学进行探讨和用于MTB及非结核分枝杆菌(NMT)的检测,同时与传统罗氏培养和鉴定法结果进行比较.结果 菌液浓度为3×10~3 CFU/ml时运用MODS技术检测判读结果时间为7 d;4种NMT标准株(草分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、龟分枝杆菌、海分枝杆菌)在液体培养基中观察到卫索状结构生长,镜下难于和MTB形成的特征索状结构区分;以对硝基苯甲酸800μg/ml、噻吩-2-羧酸肼2.5μg/ml为检测条件,能提高检测的正确率;临床分离株检测结果表明,该法与传统罗氏培养和鉴定法结果符合率为97.0%,如以罗氏培养、鉴定法为判断标准,则MODS检测MTB的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、正确性分别为95.7%,100.0%、100.0%、99.9%、97.0%.结论 MODS技术检测MTB与传统罗氏培养和鉴定法结果符合率较高,且具有快速、操作简便、价廉等优点,可作为MTB快速检测的新方法之一.     

焦磷酸测序技术检测耐多药结核分枝杆菌

目的利用焦磷酸测序技术,建立结核分枝杆菌菌株耐多药检测方法,并与Bactec MGIT 960药敏法进行比较。方法设计rpoB、katG基因PCR扩增引物和焦磷酸测序引物,建立结核分枝杆菌菌株焦磷酸测序检测方法。利用新确立的焦磷酸测序法检测202株临床分离的耐多药结核分枝杆菌的利福平、异烟肼耐药性。结果与BACTEC MGIT 960法检测药物耐药性结果比较,焦磷酸测序检测多耐药结核分枝杆菌临床分离株的敏感性与特异性为72.8%[95%可信区间(confidence in-terval,CI):66.3%~78.4%]及90.0%(95%CI:80.1%~95.1%)。结论新确立的焦磷酸测序技术可快速检测结核分枝杆菌对利福平、异烟肼的耐药性,其可作为耐多药结核分枝杆菌药敏有效的检测工具。     

街头无偿献血者18580名血清学检测分析

如何提高血液质量,杜绝经血液传播疾病是人们一直所观注的焦点,除对献血进行严格筛选外,还要对采集的血液进行全项复检,这是确保输血安全,控制输血后传染病发生的关键环节。为此,我们对2002年10月-2003年10月18580名来街头无偿献血进行了血清学检测统计分析。     

96例开颅术后留置管预防感染

目的 预防开颅术后留置引流管感染。方法 开颅患者采取术中使用抗生素预防,术后各个环节都按无菌原则操作,对病情加强观察,提高医护人员感染意识,发现问题及时采取有效措施,保持室内空气清闲,合理使用抗生素。结果 96例开颅术后留置引流管进行监测,除2例经取材培养为表皮葡萄球菌外,其余为无菌生长。结论 在预防措施中取得了较满意的效果。     

新发和复发肺结核维生素D受体基因多态性分布

目的了解维生素D受体(VDR)基因多态性在中国汉族人群新发和复发肺结核中的分布情况,为探讨其与新发、复发肺结核的相关性打下基础。方法采用病例对照研究,选择新发、复发肺结核患者和健康对照者各30例,使用SNaPshot的SNP分型技术对以上入选者的VDR基因TaqI和FokI多态性位点进行检测分析。结果VDR基因FokI位点ff多态性在肺结核和对照组分布有差异(OR=6.53,95%CI:1.26~33.9,P=0.03);TaqI和FokI位点多态性在新发和复发肺结核中的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论VDR基因ff多态性与中国汉族肺结核易感性有关;TaqI和FokI位点多态性在新发和复发肺结核中的分布是否存在差异有待进一步研究。     

气管切开术后护理

目的分析研究气管切开术后护理在颅脑外科的临床应用及效果。方法对气管切开后,加强呼吸道管理,并进行全程护理。结果本组恢复良好20例（55．55％）,部分残疾12例（33．33％）,死亡4例（11．11％）。结论气管切开术后的有效护理可以提高治愈率,降低致残率和死亡率。     

成人自发性脑出血患者临床预后不良危险因素分析

目的 探讨成人自发性脑出血(ICH)患者临床预后不良的危险因素.方法 选取唐山市协和医院自2017年1月至2020年12月收治的240例成人ICH患者为研究对象.根据血清钙离子水平将其分为A组(血清钙离子水平<2.25 mmol/L,n=66)、B组(血清钙离子水平2.25～2.60 mmol/L,n=90)、C组(血...     

ICU病房耐药性有改变的铜绿假单胞菌的同源性调查

目的:应用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法快速准确分析铜绿假单胞菌(PA)的同源性,及时监测PA院内感染的发生和发展的情况,为指导临床及时合理使用抗菌药物及流行性病学调查提供可靠的实验数据和理论依据。方法:对ICU病房收集到的PA进行药物敏感性试验,筛选从同一部位分离,间隔5天以上,且药物敏感性有改变的菌株并随机选出的5株PA做RAPD基因分型。结果:29株PA共分出9个基因型。1位患者为单一RAPD型PA菌株感染,且耐药性较稳定;其他患者的RAPD分型都有所改变,且存在基因型互变的可能。结论:耐药表型与RADP基因型之间不存在相关性;单独的药敏不能确定交叉感染的存在;进行RAPD分型对于流行病学调查确定院内交叉感染或流行具有重要意义。