hTERT启动子调控p53基因表达逆转录病毒的抗肿瘤作用

目的：观察人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因启动子驱动野生型p53的新型逆转录病毒对肿瘤的杀伤作用。方法：先将前期构建的逆转录病毒穿梭质粒pLHCX-hTERT-EGFP和pLHCX-hTERT-wtp53进行包装，通过浓缩获得高滴度病毒液。然后将逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53感染包含突变型p53的大肠癌细胞系SW620，通过RT-PCR和Western blot证实p53mRNA和p53蛋白的表达。最后将逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53和pLHCX-hTERT-EGFP感染hTERT阳性的人大肠癌细胞株SW620，人肺癌细胞株A549和hTERT阴性的正常人胚肺成纤维细胞MRC-5，观察其特异性杀伤作用；另外通过裸鼠皮下注射肿瘤细胞SW620和A549，建立肿瘤模型，应用逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53治疗后测量肿瘤体积计算肿瘤生长抑制率。结果：获得病毒液的滴度分别为2.3×10^7CFU·mL^-1和3.5×10^7CFU·mL^-1。逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53经RT-PCR证实p53mRNA的表达，经Western blot检测到p53蛋白表达。重组逆转录病毒导入外源的野生型p53基因后，通过流式细胞检测到hTERT阳性人大肠癌细胞株SW620，人肺癌细胞株A549凋亡率远高于hTERT阴性的正常人胚肺成纤维细胞MRC-5（P〈0.05）。体内实验证实各组通过逆转录病毒pLHCX-hTERT-wtp53治疗后的肿瘤体积明显小于对照组（P〈0.05）。结论：获得的新型逆转录病毒对肿瘤有特异性的杀伤作用。     

高职医学物理学教材建设现状及改革思路

研究我国高职医学物理学教材建设现状,分析我国高职医学物理学教材存在的弊端,提出高职医学物理学教材改革的原则、思路和模式。     

腹腔镜下射频消融术治疗原发性肝癌18例报道

目的 探讨腹腔镜下射频消融术治疗原发性肝癌的应用价值.方法 对2011年8月-2012年7月我院完成的18例原发性肝癌病例行腹腔镜下射频消融术的临床资料进行分析.结果 18例病例均在腹腔镜下顺利完成射频消融治疗,平均手术时间80(50-120)min,术中出血量2-10ml,术后均恢复顺利,无术后并发症.术后1个月16例病例肿瘤已完全坏死,2例肿瘤较大者有少量残存病灶.全组病例随访2-13个月,均生活质量满意,无死亡病例.结论 腹腔镜下射频消融治疗原发肝癌具有备安全、微创、疗效确切的优点,值得临床推广.     

FAT10基因单体型与肝细胞癌的相关性研究

背景与目的:人类白细胞抗原FAT10是类泛素调节子蛋白家族中的一员,被认为与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展密切相关。本研究探讨FAT10基因单体型与肝细胞癌的关系。方法:收集254例肝癌病例和268例健康对照人群外周血标本,提取DNA,通过DNA测序分析方法,检测两组人群FAT10基因外显子和侧翼序列单核苷酸多态性。应用Haploview统计软件分析研究对象的连锁不平衡和单体型,并应用病例对照分析方法进行相关性研究。结果:在肝癌组和对照组FAT10基因外显子和侧翼序列上共检测到10个多态性位点。遗传不平衡发现-143 A/G、-121 A/G、+3446 C/T、+3476 T/C、+3527 T/C、+3607 T/C、+3620 C/G、+3803 C/G、+3809 G/T 9个SNPs在同一个单体型块,其中-121 A/G、+3476 T/C、+3607 T/C、+3620 C/G和+3809 G/T多态位点完全连锁。进一步选择-143 A/G、+3476 T/C和+3527T/C 3个tagSNPs进行关联分析和单体型构建,发现-143 A/G和+3476 T/C基因型与相应的野生型纯合子相比能明显降低肝癌发病的风险(P<0.05)。进一步单体型分析发现ATT、ATC、GCT和ACT 4种单体型,其中肝癌患者的GCT和ACT单体型频率显著低于对照组(P<0.05),而ATT单体型频率显著高于对照组(P<0.05),经过1×108的随机置换检验校正后,ATT和GCT单体型与肝癌的发病风险仍然显著相关。结论:FAT10基因单体型可能与肝癌的发病风险相关,ATT单体型可能是肝癌的遗传标志。     

原发性肝癌细胞中Rock2调控MMP2对其侵袭迁移的作用

目的 探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶2 (Rho associated coiled coil containing proteinkinase 2,Rock2)调控基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法 用Western blot法检测30例肝癌组织及对应癌旁组织中Rock2和MMP2的蛋白表达,同时分析它们之间的关联;用荧光定量PCR和Western blot法观察稳定降低Rock2细胞中MMP2 mRNA及蛋白表达变化;利用PCR定点突变技术构建Rock2同义突变质粒“恢复”稳定干扰Rock2的肝癌细胞中Rock2表达后检测MMP2蛋白表达变化;采用Transwell侵袭实验和划痕实验观察空白对照组、稳定低表达Rock2组、“恢复”Rock2组HepG2细胞侵袭和迁移能力变化。结果 Rock2和MMP2蛋白在肝癌组织中均比对应癌旁组织明显增高,且两者的表达呈正相关性。稳定降低肝癌细胞中Rock2的表达后发现MMP2的mRNA和蛋白表达也随之降低;另外,“恢复”稳定干扰Rock2的肝癌细胞中Rock2的表达,MMP2表达也“恢复”;同时证实Rock2通过调节MMP2表达从而影响肝癌细胞的侵袭和迁移。结论 在原发性肝癌细胞中降低Rock2可引起MMP2表达下降,进而抑制肝癌细胞的侵袭和迁移。     

RNA干扰真核翻译延长因子1A1抑制肝癌Hep3B细胞的增殖

目的 :探讨RNA干扰真核翻译延长因子1A1(eukaryotic translation elongation factor 1A1,e EF1A1)的表达对肝癌Hep3B细胞增殖能力的影响及其可能的作用机制。方法 :构建靶向e EF1A1的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)重组载体p GPU6/GFP/Neo-e EF1A1-sh RNA,并将其转染至肝癌Hep3B细胞中,随后应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测e EF1A1 m RNA和蛋白的表达,CCK-8(cell counting kit 8)法检测细胞的增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞的克隆形成能力,FCM法检测细胞周期的变化,蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)的表达。结果 :成功构建重组载体p GPU6/GFP/Neo-e EF1A1-sh RNA,并获得稳定低表达e EF1A1的肝癌Hep3B细胞。p GPU6/GFP/Neo-e EF1A1-sh RNA转染组Hep3B细胞中e EF1A1 m RNA和蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(转染阴性对照载体p GPU6/GFP/Neo-NC的Hep3B细胞)和空白对照组(未转染的Hep3B细胞)(P<0.01,P<0.05)。与阴性对照组比较,p GPU6/GFP/Neo-e EF1A1-sh RNA转染组Hep3B细胞的体外增殖能力和克隆形成能力明显下降(P<0.05,P<0.01),G1期细胞所占比例明显上升(P<0.01),S期细胞所占比例明显下降(P<0.05),cyclin D1和CDK4蛋白的表达水平明显下调(P<0.05)。结论 :下调e EF1A1的表达可以抑制肝癌Hep3B细胞的增殖能力。     

类泛素蛋白与肝癌

类泛素蛋白是一类与泛素有类似空间结构及酶修饰系统的蛋白质,它们在调节蛋白质功能中发挥着重要作用。类泛素蛋白主要通过对底物蛋白进行类泛素化修饰而发挥核质转运、转录调节、稳定蛋白质、应激反应以及细胞周期调控等多种生物学功能。近年来有大量的研究表明类泛素蛋白功能失调与肝癌的发生、增殖、凋亡以及血管新生等过程密切相关;并且在抗肿瘤药物的研究中也发现,通过调控类泛素化修饰过程可以改变化疗药物的抗肿瘤作用,进而影响肝癌的化疗敏感性,这表明类泛素蛋白可能成为一个新的肿瘤防治靶点。探究类泛素蛋白在肝癌发生、发展中的作用机制对诊断和治疗肝癌有着重要作用。      

大肝癌手术切除的体会

目的　研究大肝癌的手术切除和围术期处理技术 ,提高大肝癌的手术安全性。方法　回顾性分析施行肝切除术的 6 2例大肝癌病例 ,与同时期施行肝切除术的 34例小肝癌病例对比术中出血量、术中输血量、手术时间及术后并发症率、死亡率等。结果　前者的术中出血量、术中输血量、手术     

保留幽门胰十二指肠切除术治疗壶腹周围癌的Meta分析

目的：评价保留幽门的胰十二指肠切除术（PPPD）治疗壶腹周围癌的疗效及安全性。方法检索1980年1月1日至2013年11月18日Cochrane libriary、Embase、Pubmed、Ovid、Web of science及中国生物医学文献数据库（CBM）等数据库公开发表的比较PPPD和胰十二指肠切除术（PD）治疗壶腹周围癌的随机对照研究,通过纳入和排除标准筛选文献,采用Cochrane 系统评价员手册中RCT的偏倚风险评价标准评价纳入研究的方法学质量,分析软件为RevMan5．2。结果共有7篇随机对照研究被纳入。结果显示,与PD组相比,PPPD组的术中出血量（MD＝－200．10,95％ CI：－400．66～0．46,P＝0．05）、手术时间（MD＝－46．55,95％ CI：－91．02～－2．07,P＝0．04）及围手术期输血量（MD＝－0．89,95％ CI：－1．59～－0．19,P＝0．01）均明显减少,而胰漏、胆漏、肠瘘、腹腔脓肿、术后出血、伤口感染及手术死亡率等并发症以及生存率的差异无统计学意义（均P＞0．05）。结论 PPPD治疗壶腹周围癌疗效确切且安全性好,能够获得与PD相当的生存率。     

包膜外剥脱法切除肝海绵状血管瘤

肝血管瘤是常见的肝脏良性肿瘤,其中绝大部分为海绵状血管瘤.手术切除为目前治疗肝血管瘤的首选方法.我院自2004年4月至2009年4月,采用包膜外剥脱法切除肝海绵状血管瘤26例,无手术病死和术后复发.现报告如下.