慢病毒dUTPase结构与功能的研究进展

dUTPase是生物体遗传和基因复制的重要水解酶,它可以防止dUTP在DNA合成中的插入和错配,维持DNA复制的保真性和降低生物体发生突变的频率;同时还为DNA的合成提供必需的原料.对于慢性病毒来说,它还是构成病毒毒力及病毒高效复制的因素.因此,dUTPase可用于抗肿瘤细胞和抗病毒药物的筛选.本文对dUTPase的分布和进化关系、结构与功能的研究进展进行了概述.     

具有广谱中和活性的新型冠状病毒受体结合结构域抗体的筛选和鉴定

目的 从2名新型冠状病毒感染康复者体内分离针对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain, RBD)的特异性单克隆B细胞,并筛选出具有广谱中和活性的SARS-CoV-2 RBD中和抗体。方法 以生物素化的RBD为分子探针,利用流式细胞仪对康复者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)进行单克隆B细胞分选,将获得的B细胞经裂解并完成逆转录后,采用随机引物对抗体的重链及轻链进行巢式PCR扩增,扩增产物分别克隆至对应的表达载体,随后相应配对的重轻链质粒共转染293F细胞中进行表达,利用Protein A柱纯化获得单克隆抗体。采用原始株(WT)假病毒开展中和实验挑选出半数抑制浓度(IC₅₀)<0.1μg/mL的抗体,进一步在原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒以及目前的流行株XBB、BA.5、BF.7假病毒...     

陕西省HIV-1流行株膜蛋白基因 C2-V3区序列特征和亚型分析

目的了解陕西省HIV-1毒株的流行情况和亚型特征.方法用套式聚合酶链式反应(Nested-PCR)对6份采集于陕西省经确认为HIV-1感染者或艾滋病病人外周血淋巴细胞(PBMC)提取核酸,从6份样品中获得了HIV-1膜蛋白(ENV)基因的核酸片段进行扩增,并测定和分析了C2-V3及其邻区共312个核苷酸序列.结果 6份血样中,2份为HIV-1A亚型毒株感染(SHX7、SHX8);4份为HIV-1B'亚型(泰国B'亚型)毒株感染(SHX1、SHX5、SHX6、SHX9).SHX1、SHX5、SHX6、SHX9彼此间基因离散率为5.62%,SHX7与来自卢旺达的U08794之间的基因离散率仅为2.41%.结论陕西省目前存在HIV-1 A、B'两种亚型的毒株,HIV-1 B'亚型由邻近地区传入,HIV-1 A亚型为与非洲人接触传入.     

HIV抗体诊断初筛试剂临床质量评估

检测艾滋病病毒(HIV)抗体,是当前常规使用的临床诊断依据[1],其正确与否直接影响受检者本人及其家庭以及社会的稳定性,涉及到法律诉讼事件.为此,卫生部专门制定了<全国艾滋病检测工作规范>和,要求对HIV抗体检测严格掌握质量管理,其中试剂质量是质量控制的一项重要措施;而有组织地定期对市场上HIV抗体诊断试剂进行临床应用质量评估工作,是对已实行的国家药政部门对试剂出厂后批批检制度的一项重要补充,无论是对用户,厂家还是政府有关部门都有重要意义[2].     

中国恒河猴Mamu-A*01基因筛查及其对抗原肽p11C的特异性CTL反应

目的 筛查中国恒河猴Mamu-A*01基因,比较中国恒河猴和印度恒河猴的Mamu-A*01基因序列和功能是否相同.方法 PCR方法检测128只中国恒河猴,用特异性引物扩增Mamu-A*01基因,将PCR扩增后的产物克隆测序后与印度恒河猴的Mamu-A*01基因进行同源比对;酶联免疫斑点检测 (ELISPOT) 方法分别检测5只Mamu-A*01基因阳性和5只阴性恒河猴针对SIV、SHIV抗原肽p11C的特异性CTL反应.结果 共筛查出5 只Mamu-A*01基因阳性恒河猴 (3.91%),经测序分析后与印度恒河猴的同源性可达99.1 %.这5只均为SIV/SHIV感染恒河猴,其中四只SIV感染的猴的ELISPOT结果显示针对p11C的高频CTL反应,斑点数在500-1400/106 PBMCs之间,而另1只SHIV感染的恒河猴及5只阴性猴没有斑点出现.结论 中国恒河猴含有Mamu-A*01基因,基因频率有区域性差异,中国恒河猴的Mamu-A*01可提呈特异性抗原肽p11C.     

四川彝族人群HIV-1辅助受体CCR5△32和CCR2-64I基因多态性分析

目的了解中国四川彝族人群艾滋病病毒-1(HIV-1)辅助受体CCR5△32和CCR2．64I基因多态性特点。方法提取119份彝族正常人和88份HIV-1感染人群外周血基因组DNA。用聚合酶链反应(PCR)方法检测CCR5△32突变,阳性产物经克隆、测序进一步证实;用PCR-限制性片段长度多态性技术检测CCR2．64I突变,并测序验证。结果119份正常人样本中,CCR5 wt／△32等位基因突变杂合子2例(1．68％),未检测到CCR5△32／△32突变纯合子,CCR5△32等位基因频率为0．0084;CCR2-64I突变杂合子26例(21．85％),突变纯合子2例(1．68％),等位基因频率为01261。88份HIV-1感染者样本中,未检测到CCR5△32突变;CCR2．64I突变杂合子12例(13．64％),突变纯合子7例(7．95％),等位基因频率为0．1327。统计分析表明,上述等位基因多态性在该群体中均呈Hardy-Weinberg平衡分布;两种等位基因的突变频率在正常人和感染人群中的差异均无统计学意义。结论研究获得了中国四川彝族人群CCR5△32、CCR2-64I等位基因多态性资料,结果有助于综合评估中国人群对HIV-1感染的遗传易感性,同时为深入研究HIV-1抗性基因在中国不同民族的HIV感染及发病机制中的作用奠定基础。     

四川省西昌市吸毒人群首次海洛因滥用情况调查

目的 了解四川省西昌市吸毒人群首次海洛因滥用的发生情况。方法 于2004年5～7月，从社区中搜集吸毒人群，调查其社会人口学特征、首次使用毒品的时间和方式及种类、首次吸毒前吸烟、饮酒、朋友、家庭成员和亲戚吸毒的情况。结果 在调查的451名吸毒人员中，首次使用的毒品均为海洛因，其中，首次吸毒方式为口吸和静脉注射的分别为80．7％和19．3％。从出生到首次吸毒的发生率为4．43／100人年（95％CI=4．02～4．84）。多因素Cox比例风险模型分析结果显示，彝族及其他少数民族（FIR：1．47，95％CI=1．22～1．78）、15岁以前开始吸烟（FIR=1．54，95％CI=1．25～1．83）与首次吸毒发生的关系差异有统计学意义。结论 需进一步了解吸毒人群首次吸毒的发生情况及其影响因素，为开展针对性的健康教育和行为干预措施提供科学指导。     

社区中静脉吸毒人群梅毒感染危险因素研究

目的　了解四川省凉山地区静脉吸毒人群梅毒感染情况及相关危险因素。方法　以社区为基础招募吸毒人员 ,调查静脉吸毒人群梅毒感染的危险因素。结果　静脉吸毒人群中梅毒感染率为15 3% (5 8/ 379)。在单因素卡方分析和多因素Logistic回归模型分析中 ,梅毒感染的危险因素包括与性行为相关的因素 :近 6个月是否有性伙伴以性交为条件给你提供了毒品、物品或住处 (商业性性行为 )、近 6个月性伴人数、近 6个月新性伴人数、近 6个月与非主要性伴的性交频率和近 1个月是否与非主要性伴有过阴道性交。结论　需加强对四川省凉山地区静脉吸毒人群吸毒行为和性行为的健康教育和干预措施来控制性病和艾滋病传播     

HIV-1重组毒株gag区快速基因分型方法

目的建立一种简便、快速基因分型方法,对广西人类免疫缺陷病毒（HIV-1）重组毒株gag基因区进行亚型鉴定。方法从HIV阳性样本中提取核酸,使用HIV-1 M组通用引物对gag区进行第1轮扩增,第2轮使用分别检测C亚型和CRF01-AE重组型的二套特异性引物放入同一反应管中进行扩增,根据不同亚型扩增的目的带位置不同判断亚型。另外设计了一套引物,专门用于检测B’/C重组毒株。扩增出的所有样本均进行基因测序和系统树分析以验证结果。结果54份样本中,经基因测序和系统树分析证实CRF08-BC样本4份（7.41%）,CRF01-AE样本46份（85.18%）,4份（7.41）无法确定亚型。经亚型特异性引物PCR法检测出4份（100%）B’/C重组毒株,45份（97.83%）CRF01-AE重组毒株,灵敏度为98%,特异性为100%。2种方法检测结果经差异性检验显示,P〉0.05,差异无统计学意义,结果一致性高达98.15%。与基因分析结果吻合。重复实验显示,B’/C的平均重复性为100%（20/20）,CRF01-AE为98.3%（59/60）。结论该方法具有简便、快速,高度灵敏度和特异性的特点,可直接对广西HIV-1重组毒株CRFO 1-AE gag基因区进行分型。     

北京市MSM人群HIV抗体检测及影响因素分析

目的 了解北京市男男性行为者( men who have sex with men,MSM)近一年HIV抗体检测情况及其影响因素.方法于2009年8-12月对北京市962名MSM进行问卷调查,了解其社会人口学特征、艾滋病相关知识、近6个月性行为、性病史、吸毒史等情况,并采集血样进行血清学检测.结果共调查962名MSM,近1年51.4％( 494/962)的MSM进行过HIV抗体检测,其中HIV感染者61例,感染率为6.3％;梅毒血清学阳性170例,感染率为17.7％;多因素Logistic回归分析结果表明,自我认同是同性恋(OR=1.41,95％CI=1.04～1.90)、8个HIV相关知识都回答正确(OR=2.22,95％ CI= 1.67～ 2.95)、近1年接受过艾滋病预防服务(OR= 10.01,95％ CI =6.22 ～ 16.11)、在公园或浴池寻找性伴(OR =0.63,95％ CI =0.46～0.86)和近6个月与男性发生过无保护性行为(OR= 1.65,95％ CI= 1.24～2.18)与近1年进行过HIV抗体检测的关系有统计学意义.结论近1年北京MSM的HIV检测比例不高,需开展艾滋病宣传和预防服务以提高其检测比例,尤其应针对在公园或浴池寻找性伴者.