体外扩增的脐血细胞移植于BALB/C小鼠的实验研究

目的　探讨经体外扩增的脐血造血细胞对小鼠造血重建功能的影响 ,寻求脐血用于成人移植的可行方法。方法　将经致死剂量γ射线照射后的BALB/C小鼠 ,随机分为 4组 ,每组 10只。A组 :每只移植 2 .5× 10 6个新鲜脐血细胞 ;B组 :每只分别移植 1.2 5× 10 6个新鲜脐血细胞和 1.2 5×10 6个扩增培养 1周的脐血细胞 ;C组 :每只移植 2 .5× 10 6个扩增培养 1周的脐血细胞 ;D组 :每只仅输注 0 .5ml生理盐水。比较各组造血重建的差别。结果　在脐血细胞移植后第 13d ,A组存活 5只(5 0 % ) ,B组 8只 (80 % ) ,C组 6只 (6 0 % ) ,D组全部死亡。B组小鼠的死亡率最低。脐血细胞移植后 14d ,小鼠的WBC已开始回升 ,B组与C组的恢复明显较A组快 ,P <0 .0 5。结论　混合移植新鲜的和体外培养 1周的脐血造血细胞 ,可能是脐血移植的较好办法。     

CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞及其在GVHD和GVT中的作用

正常机体的免疫系统在有病原体或是肿瘤细胞出现时能够有效地产生免疫应答，同时对其自身组织抗原产生免疫耐受，以避免自身免疫性疾病的发生。免疫耐受是保持机体内环境稳定的一个重要机制，它包括中枢耐受和外周耐受。近几年来，人们发现在T细胞中存在着一种特殊作用的调节细胞，即CD4^＋CD25^＋调节性T细胞，它能抑制效应性T细胞的免疫反应，在主动诱导外周免疫耐受过程中承担着重要作用。     

活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体阳性的NK细胞对靶细胞的杀伤作用

Objective To study the killing effects of the killer cell immunoglobutin-like receptors (KIR) KIR2DS1-positive natural killer (NK) cells against acute, myeloid leukemia (AML) target cells, and to explore the KIR, human leucocyte antigen-Cw, and Cw loci (HLA-Cw) of NK cells, and, HLA-Cw of target cells mismatches destruction mechanism. Methods High-purified NK cells separated by DNYAL bead negative selection from healthy donor peripheral blood were taken as effector cells, and the freshly isolated bone marrow mononuclear cells from newly diagnosed AML patients as target cells. The anti-CD158a, CD158b monoclonal antibody was used to block inhibitory KLR receptors of NK cells (such as: KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3). The NK cells cytotoxicities against target cells before and after KIR blockades were detected by MTT reduction assay in vitro. Polymerase chain reaction and sequence specific primers (PCR-SSP) genotyping techniques were used to detect HLA-Cw, KIR gene of the healthy donors and patients. NK cells and target cells were divided into group C1 (expressing HLA-Cw 01, 03, 07, 08, 12, 14, 16 alleles), C2 group (expressing HLA-Cw 02, 04, 05, 06, 15, 17, 18 alleles) and the C1/C2 group (co-expressing the alleles in C1 group and C2 group) based on HLA-Cw. Results The purity of NK cells analyzed by flow cytometry was (90.8±6.08)%, and the killing effects of NK cells were significantly enhanced after inhibitory KIR blockades (t=-3.00, P=0.005). The cell lysis in C1 group, KIR2DS1+ NK cells against C2 group target cells (57.37±1.40)% was significantly higher than that against C1 group (44.19±4.67) % and C1/C2 group (36.77±6.56)% target cells (F= 11.87, P = 0.021), furthermore the differences in cell lysis among the above three groups become more evident after the inhibitory KIR blockades (F = 18. 72, P=0. 009). Conclusions The activity of NK cells was increased after the inhibitory KIR blockades, and the killing activities of KIR2DS1+ NK cells were higher than KIR2DS1 NK cells. The incompatibility between KIR, HLA-Cw of NK cells and HLA-Cw of target cells mediated NK alloactivation, realizing "missing self" recognition, and enabling NK cells cytotoxieity against targets.     

癌性胸水肿瘤浸润淋巴细胞的增殖力、表型和杀伤细胞活性的研究

探讨癌性胸水中肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的生物学特性,便于更好地应用于临床.用低浓度白细胞介素2(IL-2)诱导培养癌性胸水TIL,按常规法计数TIL细胞增殖量,采用流式细胞仪分析TIL细胞表型及MTT法检测其杀伤细胞活性.经低浓度IL-2(10U/ml)诱导培养TIL21d后,TIL增殖倍数为2130±1140,大于1000倍占72%.CD3无显著性变化(P>0.05),CD4,CD8有显著性差异(P<0.01),而CD4/CD8     

冻融抗原负载树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞特异性杀伤急性白血病细胞的实验研究

我们应用基因重组人白介素 4 (rhIL 4 ) ,基因重组人粒 /单细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)联合培养体系自健康志愿者骨髓单个核细胞诱导产生DC ,使其负载急性髓系白血病 (AML)细胞冻融抗原 ,体外诱导细胞毒性T细胞 (CTL) ,观察负载AML细胞冻融抗原后DC的状态对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对AML细胞特异性杀伤活性。我们发现负载AML冻融抗原后DC的CD1a、CD83、CD86、CD11C、HLA DR表达率为较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,且负载AML冻融抗原的DC诱导的CTL中CD3 CD8 T细胞比例 ,较诱导前明显增高 (P <0 .0 1) ,而负载AML细胞冻融抗原的DC诱导CTL对AML细胞有较强的杀伤作用 ,明显强于加或不加IL 2培养的T细胞对照组 (P <0 .0 1) ,而对K5 6 2细胞无明显的杀伤活性。通过以上实验我们认为经rhGM CSF ,rhIL 4培养产生的DC为CD14CD1a DC ,能诱导CTL对AML细胞产生明显的特异性杀伤作用 ,另外 ,负载AML细胞冻融抗原DC诱导的CTL中CD3 CD8 T细胞比例明显增高 ,提示CD8 T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。     

乳腺癌患者T细胞亚群的变化及其意义

为研究乳腺癌患者的细胞免疫状态,应用流式细胞仪检测了３２ 例乳腺癌患者的 Ｔ 细胞亚群,并与良性疾病患者对比分析。结果：乳腺癌患者 Ｃ Ｄ３ 、 Ｃ Ｄ４ 较对照组明显降低（ Ｐ＜ ０ ．００５） , Ｃ Ｄ８ 较对照组明显升高（ Ｐ＜０ ．００５） , Ｃ Ｄ４／ Ｃ Ｄ８ 比值明显低于对照组（ Ｐ＜ ０ ．０１） ,而乳腺癌转移组与非转移组之间 Ｃ Ｄ３ 、 Ｃ Ｄ４ 、 Ｃ Ｄ８ 、 Ｃ Ｄ４／ Ｃ Ｄ８ 比值无明显差异。提示乳腺癌患者细胞免疫功能显著低下,但转移组与非转移组之间无明显差异。     

CD4＋CD25＋CD127^lowTregs及TGF-β在多发性骨髓瘤患者外周血的表达分析

目的：初步探讨CD4＋CD25＋/highCD127lowT调节性T细胞（Tregs）及TGF-β在不同病程阶段多发性骨髓瘤（MM）患者外周血中的表达水平,并研究患者血清TGF-β水平是否与CD4＋CD25＋/highCD127lowTregs具有相关性。方法：流式细胞术（FCM）检测50例MM患者及30例健康志愿者外周静脉血CD4＋CD25＋/highCD127lowTregs细胞的比例并分析比较。ELISA法定量检测血清TGF-β的表达水平。结果：（1）化疗后组CD4＋CD25＋CD127low、CD4＋CD25highCD127lowT细胞的比例均显高于初诊组及正常对照组;初诊组与正常对照组的CD4＋CD25＋CD127lowT细胞相比无统计学意义,但其CD4＋CD25highCD127lowT细胞明显高于正常对照组。（2）化疗后稳定期CD4＋CD25＋CD127lowT细胞与活动期没有差异,但其CD4＋CD25highCD127lowT细胞明显低于活动期。（3）MM各组TGF-β水平均较对照组明显升高,但各组比较无统计学意义。（4）TGF-β与CD4＋CD25＋CD127^low、CD4＋CD25highCD127lowT细胞的表达水平均不成相关性。结论：CD4＋CD25＋/highCD127low调节性T细胞MM患者外周血中比例明显升高,且化疗及疾病进展程度可能影响其在外周血的比例。TGF-β可能不是导致其比例增加的直接原因。     

树突状细胞扩增抗原特异性CD4+ CD25+调节性T细胞研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(Tr)是同时具有免疫低反应性和免疫抑制性功能两大特征的T细胞.研究证实,CD4+ CD25+ Tr在抑制器官特异性自身免疫性疾病及GVHD是抗原特异性的,因此,应用器官特异性而不是多克隆性的Tr将大大促进以Tr为基础的免疫治疗.而具有调节活性的CD4+ CD25+ Tr仅占人类外周血CIM+ T细胞的1%～2%,因此,研究体外大量扩增的方法 对于以Tr基础的治疗至关重要.研究表明,树突状细胞(DC)作为机体强有力的专职抗原递呈细胞可以扩增具有抗原特异性的CD4+ CD25+ Tr且能增加后者的抑制活性,这为治疗自身免疫性疾病及GVHD提供了新的治疗前景.     

米托蒽醌方案对CD+34高表达急性淋巴细胞白血病的临床疗效观察

目的 探讨米托蒽醌(MTZ)在急性淋巴细胞白血病(ALL)化疗中的作用特点。方法 50例CD34^ 抗原高表达的ALL上,随机选择二种化疗方案(CPMP,CODP)。联合化疗1个疗程后分别比较CR率、骨髓抑制及其他毒副作用;同时将骨髓白血病细胞体外培养72h。进行药物杀伤效应实验。分别比较MTZ、柔红霉素(DNR)在体外对ALL细胞不同分化阶段的抑制作用。结果 CD34抗原高表达的ALL中,以MTZ为主的COMP方案的1个疗程缓解率为92．6％。比CODP方案高27．4％。体外白血病细胞培养加药物抑制试验结果显示,MTZ对分化较早阶段的CD34^ ALL细胞的抑制显著高于DNR。结论 MTZ对ALL具有较强的抗白血病活性,临床骨髓抑制明显。上述特点可能与其主要作用于白血病细胞的分化较早阶段有关。     

脑血管病患者血小板膜糖蛋白CD_(62P)、CD_(63)的变化

目的 :探讨CD62P 和CD63 与脑血管病发生发展的关系。方法 :应用流式细胞术、以单克隆抗体作分子探针 ,检测脑血管病患者248例及正常对照者38例外周血CD62P 和CD63 的变化。结果 :脑血管病组与正常对照组差异有高度显著意义(P<0.01) ,脑血管病不同病程的差异有显著意义(P<0.05) ,不同病变部位的差异无显著意义。结论 :检测脑血管病患者CD62P、CD63 的变化对诊断、治疗和预防有重要意义。