清髓性和非清髓性预处理对aGVHD中Th1/Th2细胞因子的影响

目的 探讨清髓性和非清髓性预处理对血清辅助性T细胞Ⅰ／Ⅱ类（Th1／Th2）细胞因子水平的影响及其与急性移植物抗宿主病（aGVHD）严重程度的关系。方法 同种异基因骨髓移植模型SD大鼠随机分为A、B、C、D4组,A、B组大鼠接受全身照射（TBI）2．0Gy作为非清髓组,C、D组接受TBI 6．0Gy作为清髓组。TBI4h后,B、D组输注Wistar大鼠骨髓细胞作为实验组,A、C组输注生理盐水作为对照组。移植后用双抗体夹心ELISA法检测4组不同时相血清IFN-7、IL-2、IL-4、IL-10的水平。结果移植后各组大鼠血清中IFN-7、IL-2、IL-4、IL-10有不同程度的升高。D组各细胞因子高峰水平最高,其后依次为B、C、A组。各组间比较差异有显著性（P〈0．05）。临床aGVHD评分,B、D组比较差异有显著性（P〈0．05）。肝脏病理分级和结肠病理分级比较,B、D组差异均有显著性（P〈0．05）。结论 骨髓移植时采用非清髓性的预处理方案,对Th1／Th2细胞因子水平的影响较小,aGVHD的发生程度较轻。     

临床注射用α-干扰素和粒巨-集落刺激因子诱导慢性髓性白血病细胞向树突状细胞分化

目的：研究临床注射用α-干扰素（interferon-alpha，IFN-α）和粒巨-集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimularing factor，GM-CSF）在诱导慢性髓性白血病（chronic myeloid leukemia，CML）细胞向树突状细胞（dendritic cells，DCs）分化过程中的影响，以建立临床应用稳定的培养体系。方法：取6例CML慢性期患者的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells，BMMNCs），用含10％人AB血清的RPMI 1640同时加入不同细胞因子组合（A组：GM-CSF＋IL-4；B组：临床注射用IFN—α＋临床注射用GM—CSF）作为培养体系，培养7～9d后，在倒置显微镜下观察细胞形态，全自动血液分析仪分析CML-DCs数量，通过流式细胞仪检测其表面标志，采用异基因混合淋巴细胞反应（allogeneic mixed lymphocyte reaction，allo—MLR）分析检测DCs的免疫刺激功能。结果：经不同细胞因子组合分别培养诱导5d和7～9d后的细胞，其特征性表面标志（CD80、CD86、HLA-DR、CD83、CD1a）表达率均高于培养前的细胞（P〈0．05）；在培养的第5天，B组细胞表面标记CD83的表达率高于A组（PG0．05）；但培养7～9d后两组表面标记的表达率无明显差异，CML-DCs计数值也无统计学意义。allo-MLR在DC细胞与反应细胞之比为1：10时B组刺激指数高于A组（P〈0．05）。结论：CML患者的BMMNCs在体外经临床注射试剂组合培养后可以分化为具有典型形态、免疫表型和一定功能的DCs，这一结果为培养更适合回输人体的“临床型”DCs提供了新的培养体系。     

活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体阳性的NK细胞对靶细胞的杀伤作用

Objective To study the killing effects of the killer cell immunoglobutin-like receptors (KIR) KIR2DS1-positive natural killer (NK) cells against acute, myeloid leukemia (AML) target cells, and to explore the KIR, human leucocyte antigen-Cw, and Cw loci (HLA-Cw) of NK cells, and, HLA-Cw of target cells mismatches destruction mechanism. Methods High-purified NK cells separated by DNYAL bead negative selection from healthy donor peripheral blood were taken as effector cells, and the freshly isolated bone marrow mononuclear cells from newly diagnosed AML patients as target cells. The anti-CD158a, CD158b monoclonal antibody was used to block inhibitory KLR receptors of NK cells (such as: KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3). The NK cells cytotoxicities against target cells before and after KIR blockades were detected by MTT reduction assay in vitro. Polymerase chain reaction and sequence specific primers (PCR-SSP) genotyping techniques were used to detect HLA-Cw, KIR gene of the healthy donors and patients. NK cells and target cells were divided into group C1 (expressing HLA-Cw 01, 03, 07, 08, 12, 14, 16 alleles), C2 group (expressing HLA-Cw 02, 04, 05, 06, 15, 17, 18 alleles) and the C1/C2 group (co-expressing the alleles in C1 group and C2 group) based on HLA-Cw. Results The purity of NK cells analyzed by flow cytometry was (90.8±6.08)%, and the killing effects of NK cells were significantly enhanced after inhibitory KIR blockades (t=-3.00, P=0.005). The cell lysis in C1 group, KIR2DS1+ NK cells against C2 group target cells (57.37±1.40)% was significantly higher than that against C1 group (44.19±4.67) % and C1/C2 group (36.77±6.56)% target cells (F= 11.87, P = 0.021), furthermore the differences in cell lysis among the above three groups become more evident after the inhibitory KIR blockades (F = 18. 72, P=0. 009). Conclusions The activity of NK cells was increased after the inhibitory KIR blockades, and the killing activities of KIR2DS1+ NK cells were higher than KIR2DS1 NK cells. The incompatibility between KIR, HLA-Cw of NK cells and HLA-Cw of target cells mediated NK alloactivation, realizing "missing self" recognition, and enabling NK cells cytotoxieity against targets.     

米托蒽醌为主的化疗方案对CD34+高表达急性髓细胞性白血病疗效观察

目的：探索米托蒽醌(MTZ)在急性髓细胞性白血病(AML)化疗中的作用特点，提高AML的疗效和无病生存率(FDS)。方法：80例免疫分型中有CD34^ 抗原高表达的AML，随机选择(MA／MAE、DA／DAE和HA／HAE)方案，联合化疗1～2个疗程后分别比较CR率、骨髓抑制及其它毒副作用；同时对白血病细胞进行体外药物杀伤效应实验，分别比较MTZ、柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)对白血病细胞不同分化阶段的抑制作用。结果：CD34抗原高表达的AML中，1～2个疗程CR率，以MA／MAE方案最高。为80．0％(24／30)．白血病细胞体外药物杀伤实验显示，MTZ对CD34^ 高表达的AML的抑制显著高于DNR和HHT。结论：MTZ具有较强的抗AML活性，临床骨髓抑制明显上述特点可能与其主要作用于AML白血病细胞的分化较早阶段有关。     

成人特发性血小板减少性紫癜血小板膜糖蛋白测定及其临床意义研究

目的 :研究成人特发性血小板减少性紫癜 (ITP)血小板膜糖蛋白阳性率与疗效的关系。方法 :利用流式细胞仪、单克隆抗体测定 73例成人特发性血小板性紫癜 (IdiopathicThrombocytopenicPurpura ,ITP)和 19例正常对照血小板膜糖蛋白GPⅡa、GPⅨ、GPⅢa、GPIb、GPⅡb阳性率。观察血小板膜糖蛋白阳性率与成人ITP疗效的关系。结果 :19例正常对照组阳性率均 >97% ;4 0例GP阳性率 <85 %ITP患者组疗效明显低于阳性率≥ 85 %ITP患者组 (F =18 2 5 ,P <0 0 0 5 ) ;5 1例女性ITP患者组疗效明显低于 2 2例男性ITP患者组 (F =8 4 2 4 ,P <0 0 5 ) ;成人ITP患者疗效与血小板膜糖蛋白阳性率呈明显正相关 (R =1 0 ) ,73例成人ITP血小板膜糖蛋白阳性率愈低治疗疗效愈差。成人ITP血小板膜糖蛋白阳性率在一定程度上反应患者病情的程度 ,为成人ITP初诊患者选择治疗方案提供可行性实验依据。     

脐血细胞成份及造血干/祖细胞的定量研究

目的:探讨脐全血细胞组成特点,对脐血造血干／祖细胞进行定量测定。方法:采用自动血细胞分析仪检测血细胞成份,以流式细胞术为基础.应用双荧光标记单克隆抗体方法,测定造血于／祖细胞的含量。结果:脐血组成细胞的大多数检测指标高于成人外用血。CD34＋细胞占1.14±1.12％;CD34＋CD38-细胞占CD34＋细胞的16％。结论:脐血具有丰富的血细胞及造血于／祖细胞,有造血重建的临床应用潜能。     

AMI测定LDH/LDH_2比值的临床意义

本组收集1989～1991年7月住院的AMI病人61例,符合WHO的AMI诊断标准,有完整的住院病历、临床症状、ECG演变过程或CPK-MB升高,入院即刻、发病后第一周、第二周常规测血LDH及LDH同功酶,其中发病24小时内测LDH同功酶45例,48小时内测LDH同功酶56例。同期选择正常无心脏病者30例作为对照组,选择非AMI的其它心脏病患者60例亦检查LDH同功酶。 1 实验方法 用美国Backman“讯鉴”电脑光密度扫描仪以及     

四色流式分析多发性骨髓瘤细胞免疫表型及稳定性

目的:探讨多发性骨髓瘤(MM)细胞的免疫表型特征及稳定性。方法:用四色流式细胞术检测28例MM患者恶性浆细胞表面免疫表型,并对其中12例MM初诊患者在2～4m非单抗治疗后重复检测免疫表型。结果:与正常浆细胞不同,多数MM恶性浆细胞异常表达CD56(89.3%)、CD117(50.0%)、CD28(25%)、CD20(14.3%),不表达CD19(96.4%),近一半的患者不表达CD27(42.8%);恶性浆细胞表面免疫表型不稳定,12例初诊患者中有5例(41.67%)患者化疗后抗原表达有改变;CD38++CD45dim～-CD19-CD56+表型的恶性浆细胞所占圈定浆细胞百分率(NP)与骨髓形态学检测瘤细胞负荷有很强的正相关性(γ=0.675,P<0.01),并且可以区分稳定期和进展期患者(P<0.05)。结论:恶性浆细胞表面异常表达CD56,不表达CD19,部分表达CD117、CD28、CD20,近一半患者CD27表达缺失。部分初诊患者非单抗治疗后,恶性浆细胞表面抗原表达发生变化。NP可以稳定区分稳定期和进展期患者,是衡量病情的新指标。     

慢性髓细胞样白血病患者和正常人群短串联重复序列基因座频率的比较

目的 比较15个短串联重复序列(short tandem repeats,STR)基因座(D8S1179、D21Sll、D7S820、CSFl PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA)在慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者和常州地区正常人群中的频率,并预测与CML的相关基因.方法 收集745份常州地区正常人以及132份CML缓解期患者的外周血样.用PCR荧光标记复合扩增系统对样本DNA进行基因型分析.比较两组人群的基因频率,并根据15个基因座等位基因频率的差异预测与CML相关的基因.结果 CML患者CSFlPO、vWA、TPOX基因座的等位基因型分布与正常人相比差异有统计学意义(P＜0.05),其余12个基因座等位基因的分布差异无统计学意义(P＞0.05).结论CSFlPO、vWA、TPOX基因座与CML的发生相关,但其生物学意义尚不清楚.     

α-干扰素与慢性髓性白血病来源的树突状细胞

 各种临床观察肯定了α-干扰素（IFN-α）治疗慢性髓性白血病的疗效,其可明显延长白血病的慢性期及患者生存时间。树突状细胞（DC）作为功能最强的专职抗原递呈细胞,能有效递呈白血病抗原,逆转机体对白血病抗原的耐受,启动特异抗白血病的T细胞应答。IFN-α用于诱导慢性髓性白血病来源的DC,已经取得一定成绩,用IFN-α诱导慢性髓性白血病细胞分化成为具有较强功能的"临床型"DC被寄予厚望。