特发性血小板减少性紫癜患者血小板相关抗体表达与预后的关系

回顾性分析了2000年1月至2006年1月应用流式细胞仪检测120例临床确诊的特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者初诊时及治疗前后不同血小板相关抗体（PAIg）的表达。为临床诊断和治疗提供帮助。结果显示ITP患者初诊时PAIgG、PAIgA及PAIgM抗体表达水平均高于正常对照组；PAIgG、PAIgM、PAIgA表达水平与血小板数之间均呈负相关。予激素等免疫治疗无效转变为慢性ITP的患者初诊时PAIgM抗体水平要明显高于激素治疗有效的急性ITP患者，并且PAIgM异常增高或联合PAIgG增高的比例要显著多于急性ITP患者（P〈0．05）。35例PAIgG和PAIgM同时升高的ITP患者，在有效治疗血小板升至正常后，PAIgG、PAIgM抗体表达水平均有显著下降。提示ITP的发生与血小板抗体密切相关，初诊ITP患者PAIgM单独或联合PAIgG异常增高常提示预后不良，易转变为慢性ITP。     

多发性骨髓瘤免疫标志联合国际分期系统分期对临床治疗及预后判断的意义

 【摘要】　目的　探讨多发性骨髓瘤（MM）瘤细胞的免疫标志特征、CD28及国际分期系统（ISS）分期在临床治疗及预后判断的意义。方法　用四色流式细胞仪检测49例初诊及22例治疗组MM患者瘤细胞膜表面免疫标志的表达情况,并将患者依据ISS分期法、综合风险组分期,对疗效、生存期进行评价分析。结果　随着ISS分期升高,治疗有效率降低[Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期有效率分别为83.3 %（4／6）、38.5 %（5／13）、36.5 %（19／52）]（χ2＝4.235,P＝0.04）,总生存期及无进展生存期缩短,组间比较差异有统计学意义（均P＜0.05）。CD28的异常表达率在初诊及治疗组患者之间差异无统计学意义[27（55.1 %）、14（63.4 %）]（P＞0.05）,CD+28组患者较CD-28 组的生存期缩短,差异有统计学意义（P＝0.040）。综合风险组中,高危组较低危组治疗有效率降低,差异有统计学意义（χ2＝5.620,P＝0.018）,总生存期及无进展生存期缩短,差异有统计学意义（P＜0.01）。结论　MM患者高ISS分期、CD+28表达者、高危组预后较差。     

淋巴细胞经氟达拉滨培养后免疫表型变化的体外实验

背景:近年来国外一些体外实验和动物模型证实经氟达拉滨处理的供者淋巴细胞具有显著的抑制急性移植物抗宿主病的作用,但其作用机制还不十分清楚。目的:通过体外实验观察供者淋巴细胞经氟达拉滨培养后的免疫表型变化。设计、时间及地点:观察性细胞学实验,于2007-07/2008-01在常州市第一人民医院血液科完成。材料:供者淋巴细胞标本取自4例行异基因外周血造血干细胞移植的健康供者,氟达拉滨由德国先灵公司提供。方法:将COBO SPECTRA采集的外周血造血干细胞用RPMI1640液洗涤2遍。镜下计数后用含体积分数为0.10FBS的RPMI1640液将细胞密度调整至2×109L-1备用。取其中1mL的造血干细胞,PBS洗1遍后加入荧光标记的CD3、CD4、CD8、CD44 mAb 10μL,对照为Mouse Ig-G1-FITC/PE,低温孵育30min后PBS稀释,流式细胞仪检测。其余细胞以每孔1mL置于24孔培养板中,再加入终浓度为8mmol/L氟达拉滨,将培养板置于37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养24h。主要观察指标:流式细胞仪检测细胞免疫表型变化。结果:经氟达拉滨培养前及培养24h后供者淋巴细胞中CD4 CD44 T细胞的比例无明显变化,而CD8 CD44 T细胞的比例下降,组间比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:氟达拉滨可能是通过下调CD44的表达来减少效应性CD8 T细胞向相应组织器官移行,减轻移植后急性移植物抗宿主病的发生。     

超薄琼脂糖凝胶电泳快速检测LDH同工酶

超薄琼脂糖凝胶电泳快速检测ＬＤＨ同工酶吴惠毅，陈晋，沈来龙（连云港市第一人民医院，江苏２２２００２）邱国强（常州市第一人民医院中心实验室）琼脂糖凝胶电泳可同时检测ＬＤＨ（１～５）五种同工酶及异常同工酶区带，但国内目前采用的电泳法操作麻烦、耗时长、灵敏...     

1,25（OH）2维生素D3对人树突状细胞成熟及其介导免疫耐受的影响

本研究旨在探讨1,25(OH)2维生素D3〔1,25(OH)2Vit D3〕对人树突状细胞(DC)分化、成熟及功能的影响及其机制。在体外将人外周血单个核细胞诱导分化成DC,实验组加入1,25(OH)2Vit D31 nmol/L培养9 d,对照组加入等量无水乙醇,流式细胞仪检测DC表面共刺激因子表达水平。混合淋巴细胞培养后,用MTT法评估DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。Western blot检测DC吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)蛋白表达。结果表明,与对照组相比,实验组DC表面标志CD80、CD83、CD86表达率低于对照组(P<0.05),CD1a高于对照组(P<0.05);CD80、CD83、CD86、CD1a表达率分别为(40.43±9.83)%、(20.04±4.73)%、(14.45±5.38)%,(58.48±10.72)%;对照组CD80、CD83、CD86、CD1a表达率分别为(29.36±13.34)%、(35.91±10.19)%、(27.15±11.64)、(72.20±12.79)%。实验组DC刺激同种异体T细胞增殖的能力受到抑制;DC表达IDO蛋白上调。结论:1,25(OH)2Vit D3抑制DC的成熟,通过上调DC的IDO蛋白表达抑制DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖及介导免疫耐受。     

髓系白血病干细胞培养及其特征鉴定

目的对急性髓系白血病(AML)骨髓单个核细胞进行体外培养,获得白血病干细胞并进行特征鉴定。方法体外培养AML患者的骨髓单个核细胞,观察其形态学特征、长期存活及增殖特性,用染色体分析和流式细胞分析技术研究其核型和细胞表面标志,用RT-PCR技术分析其nucleostemin、Bmi-1、ABCG2、prominin1、OCT4、Nanog等干细胞相关基因的表达。结果培养的白血病细胞呈集落样悬浮生长,在体外能存活12个月以上并保持增殖特性。染色体核型呈亚四倍体。表达上述干细胞相关基因。细胞表面表达CD38、CD29、CD44和HLA-DR,弱表达CD19和CD71,不表达CD34、CD13、CD2和CD105。结论经培养获得的白血病细胞,具备肿瘤干细胞的一些特征,提示为白血病干细胞。     

辛伐他汀对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞NF-kB信号通路的影响

目的探讨辛伐他汀对人急性早幼粒细胞白血病细胞株（NB4细胞）增殖与凋亡的影响以及对凋亡信号转导通路NF．KB通路相关基因mRNA表达的影响,以探讨辛伐他汀抗白血病效应及可能机制。方法以不同浓度辛伐他汀处理NB4细胞,取对数生长期细胞进行实验。实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组（终浓度分别为5、10、15μmol／L）,培养24、48、72h。采用MTT法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞凋亡指标Annex—inV／propidiumiodide变化;PCR芯片研究NB4细胞NF—KB通路相关基因mRNA的差异表达。结果辛伐他汀对NB4细胞的生长有明显抑制作用和促凋亡作用（均P〈0．01）,且呈时间与剂量依赖性。15μmol／L辛伐他汀处理NB4细胞24、48、72h细胞抑制率分别达到45．75％、92．91％、96．46％,而细胞早期凋亡率分别为30．25％、64．34％、87．38％。与对照组相比,15μmol／L辛伐他汀处理NB4细胞48h组中NF—KB通路有56个基因表达发生改变,其中47个基因表达下调、9个基因表达上调。结论辛伐他汀能抑制NB4细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节NF—KB通路相关基因的表达有关。     

活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体阳性的NK细胞对靶细胞的杀伤作用

Objective To study the killing effects of the killer cell immunoglobutin-like receptors (KIR) KIR2DS1-positive natural killer (NK) cells against acute, myeloid leukemia (AML) target cells, and to explore the KIR, human leucocyte antigen-Cw, and Cw loci (HLA-Cw) of NK cells, and, HLA-Cw of target cells mismatches destruction mechanism. Methods High-purified NK cells separated by DNYAL bead negative selection from healthy donor peripheral blood were taken as effector cells, and the freshly isolated bone marrow mononuclear cells from newly diagnosed AML patients as target cells. The anti-CD158a, CD158b monoclonal antibody was used to block inhibitory KLR receptors of NK cells (such as: KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3). The NK cells cytotoxicities against target cells before and after KIR blockades were detected by MTT reduction assay in vitro. Polymerase chain reaction and sequence specific primers (PCR-SSP) genotyping techniques were used to detect HLA-Cw, KIR gene of the healthy donors and patients. NK cells and target cells were divided into group C1 (expressing HLA-Cw 01, 03, 07, 08, 12, 14, 16 alleles), C2 group (expressing HLA-Cw 02, 04, 05, 06, 15, 17, 18 alleles) and the C1/C2 group (co-expressing the alleles in C1 group and C2 group) based on HLA-Cw. Results The purity of NK cells analyzed by flow cytometry was (90.8±6.08)%, and the killing effects of NK cells were significantly enhanced after inhibitory KIR blockades (t=-3.00, P=0.005). The cell lysis in C1 group, KIR2DS1+ NK cells against C2 group target cells (57.37±1.40)% was significantly higher than that against C1 group (44.19±4.67) % and C1/C2 group (36.77±6.56)% target cells (F= 11.87, P = 0.021), furthermore the differences in cell lysis among the above three groups become more evident after the inhibitory KIR blockades (F = 18. 72, P=0. 009). Conclusions The activity of NK cells was increased after the inhibitory KIR blockades, and the killing activities of KIR2DS1+ NK cells were higher than KIR2DS1 NK cells. The incompatibility between KIR, HLA-Cw of NK cells and HLA-Cw of target cells mediated NK alloactivation, realizing "missing self" recognition, and enabling NK cells cytotoxieity against targets.     

脾切除对特发性血小板减少性紫癜患者可溶性选择素表达的影响

目的:研究特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者可溶性选择素的表达水平,及其与脾切除治疗疗效的关系.方法:利用19例激素治疗疗效不良者的ITP,在全麻下行脾切除术,于术前术后分别抽全血用ELISA法检测可溶性选择素E、P、L(sE-selectin、sP-selectin、sL-selectin);同时检测血小板计数.15名健康献血者为正常对照.结果:①ITP术前sE-selectin 水平为58.2 ng/ml,明显高于正常(28.3 ng/ml,P<0.05),术后逐步下降,在术后一个月接近正常水平;sP-selectin/Plt术前A组远高于正常水平(7.69 vs 0.6 fg/platelet,P<0.05),术后一个月下降至正常水平; sL-selectin与正常无明显差异.②A组18例特发性血小板减少性紫癜术后获随访,17例属反应极好,1例属反应良好;术后一个月平均血小板数为188.3×109/L,术后六个月为198.6×109/L,术后一年为136.6×109/L,术后二年为234.1×109/L,术后三年为176.5×109/L.结论:选择素参与了特发性血小板减少性紫癜血小板破坏的病理过程,ITP术前表达的sE-selectin、sP-selectin/Plt较高,脾切除后sE-selectin、sP-selectin/Plt明显下降.     

浅谈正确使用抗生素

抗生素能选择性地抑制或杀灭细菌等病原微生物,有良好的抗菌作用,能防治多种感染性疾病,然而,抗生素也会引起种种不良反应,有的还相当严重,例如,链霉素可引起耳聋,在少数情况下,抗生素也会致人于死地,对青霉素过敏的病人,在接受青霉素治疗时,可能发生过敏性休克而死亡,因此,在注射青霉素前必须先作皮肤过敏试验,反应阳性者禁用。