免疫球蛋白样抑制性受体KIR基因与HLA-Cw的匹配对NK细胞活性的影响

本研究探索自然杀伤（naturalkiller,rqK）细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样抑制性受体（killerimmunoglobulin—like inhibitionreceptor,KIR）基因与HLA—Cw配体匹配对NK细胞活性的影响。对27名健康人取新鲜外周血20ml,用NK细胞免疫磁珠分选试剂盒负向分选高纯度NK细胞。对30例初治确诊急性髓系白血病（AML）患者取新鲜骨髓液10ml,分离单个核细胞作为靶细胞。流式细胞仪检测NK细胞CD158a,CD158b表达水平。取健康人和患者的外周血各2ml,以PROTRANS法抽提DNA,采用序列特异性引物PCR—SSP分型技术分别检测HLA—Cw、KIR基因。MTT法检测KIR与HLA—Cw基因不同组合的NK细胞对AML患者白血病细胞的杀伤率。结果表明：分选后的NK细胞,纯度为（90．8±6．08）％。NK细胞KIR基因与靶细胞HLA—Cw等位基因的匹配数少则NK细胞的杀伤效应强,0个等位基因匹配的杀伤率为（50．66±8．40）％,1个匹配与2个匹配的杀伤率分别为（38．28±6．71）％,（19．74±4．15）％,（F=20．226,P〈0．001）。NK细胞的KIR表达水平与杀伤作用也有一定的联系（F=16．276,P值〈0．001）。结论：NK细胞对AML白血病细胞的杀伤作用与抑制性KIR／HLA—Cw的匹配数及KIR的表达相关,匹配越少、KIR表达越低,杀伤率越高。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿患者测定CD55、CD59的意义

本文采用流式细胞技术测定6例阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）．11例再障-PNH综合征,10例再生障碍性贫血（AA）患者外周血淋巴细胞膜CD55和CD59标记率。6例PNH患者均表现出CD55和CD59下降（P＜0.01）．11例再障-PNH综合征患者也表现出CD55和CD59下降（P＜0.05）。10例再生障碍性贫血患者中8例CD55和CD59标记率在95％以上．2例标记率在85％以上,与对照组相比无统计学意义。结果表明：血细胞膜上糖基磷脂酰肌醇（GPI）“锚”相关蛋白CD55和CD59的缺陷与PNH有密切关系。流式细胞技术测定血细胞膜CD55和CD59可作为诊断PNH的有效方法。     

K562/MDR细胞与树突细胞融合诱导P170蛋白特异的细胞毒性T淋巴细胞应答

目的通过细胞融合方法将P170抗原负载树突细胞(DC),探讨能否有效诱导P170蛋白特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。方法通过贴壁黏附获得外周血单核细胞,用GM-CSF+ IL-4诱导培养DC,并以TNF-α促进DC成熟,于第7天收获DC,然后分3组:①DC与耐药细胞系K562/MDR细胞融合以负载P170抗原;②DC与K562／MDR细胞共培养;③单独DC培养。通过流式细胞术(FCM)检测PE-P170／FITC-HLA-ABC抗体双标细胞来评估融合率。将3组细胞分别与T细胞共同孵育5 d,通过MTT法比较各组T细胞对P170+靶细胞K562／MDR及HL-60／VCR的杀伤活性。结果采用PEG-DMSO诱导的DC与K562／MDR细胞的融合效率为(22．39±2．55)％,融合细胞同时表达DC表型和P170分子,HLA-ABC和P170双阳性表达率为(26．90±3．63)％,明显高于共培养组的(4．52±1．77)％,融合细胞能激活T淋巴细胞,显示出对P170+靶细胞产生抗原特异细胞毒作用,效靶比为25:1时,对K562／MDR细胞的杀伤率为(65．75±4．65)％,明显高于共培养组[(22．15±2．40)％]。结论K562／MDR与DC融合能够诱导P170蛋白特异的CTL应答,可用于多药耐药白血病的免疫治疗。     

负载冻融抗原的DC诱导特异性CTL杀伤U937细胞的实验研究

目的　探讨树突状细胞 (DC)负载白血病细胞株U937冻融抗原 ,体外诱导细胞毒性T细胞 (CTL) ,使其对U937细胞产生特异性杀伤作用。方法　应用基因重组人白介素 4 (rhIL 4 )、基因重组人粒 /单细胞集落刺激因(rhGM CSF)联合培养体系自正常人骨髓单个核细胞诱导产生DC ,使其负载U937冻融抗原 ,致敏T淋巴细胞 ,产生CTL。观察负载U937冻融抗原的DC对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对U937细胞的特异性杀伤活性。结果　负载U937冻融抗原后DC的CD1a表达率较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,CD86、CD11c、HLA DR表达也较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,而CD83、CD14与培养前相比无明显变化 (P >0 .0 5 )。且负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中 ,CD3+ CD8+ T细胞比例较诱导前明显增高 (P <0 .0 1)。U937冻融抗原负载DC诱导CTL对U937细胞及K5 6 2细胞的杀伤率分别为 (6 6 .96± 6 .2 1) %和 (9.81± 4 .4 5 ) % ,两者有极显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论　经rhGM CSF、rhIL 4培养产生的DC为CD14 -CD1a+ 的DC ,能诱导CTL产生明显的特异性杀伤作用 ;负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中的CD3+ CD8+ T细胞比例明显增高 ,提示CD8+ T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。     

医院制剂质量管理的几点体会

当前，医院自制制剂的配制量越来越大，如何加强医院制剂的质量管理，不断提高制剂的合格率成为一个重要的课题。几年来，我院制剂室为达到国家卫生部提出的医院制剂室应达到GMP标准的要求，保证临床用药需要，保障医疗工作顺利进行，作了不懈的努力。这里，我们根据长期一线工作的经验积累，谈谈在医院制剂配制过程中应从几个方面来加强管理的体会。1．首先要做好原辅料的验收检查：要坚持向正规渠道购进原辅料的原则，把好原料关，在购进的原辅料入库前，一定要进行质量检测，对不符合规定的原辅料要坚决予以退货，不能随便迁就。严禁购…     

负载U937细胞冻融抗原的DC诱导CTL的特异性杀伤

树突状细胞 (DC)作为重要的专职抗原提呈细胞 ,其抗原提呈能力远强于巨噬细胞和B细胞等抗原提呈细胞。因而 ,以DC为中心的免疫治疗是肿瘤生物学治疗的主要方向之一。我们应用当前普遍采用的rhGM CSF、rhIL 4培养体系 ,自骨髓单个核细胞诱导产生CD14 - CD1a 的前体DC ,使其负载     

浅谈儿童感冒的合理用药

感冒是儿童的常见病、多发病，其中80％-90％是由病毒引起的，其余可能是细菌、其他微生物等感染或病毒感染后继发的细菌感染所致。对于儿童感冒怎样才能合理用药呢？     

网织血小板的检测及其临床意义

网织血小板 (reticulatedplatelet,RP)与网织红细胞一样都是刚从骨髓中释放出来的未成熟细胞[1] ,RP与正常血小板相比胞浆内含有少量mRNA ,体积较大 ,而且有更强的活性[2 ] 。随着血小板的成熟 ,胞浆内mRNA逐渐消失 ,体积逐渐变小。RP可以比较精确地反映骨髓血小板生成情况。荧     

特发性血小板减少性紫癜患者血小板相关抗体及网织血小板检测的临床意义

目的探讨血小板相关抗体(PAIgG)和网织血小板(RP)检测在特发性血小板减少性紫癜(ITP)治疗中的临床意义。方法收集常州市第一人民医院2003-06～2004-10住院的ITP患者48例,根据疗效分为两组,其中临床有效组40例,临床无效组8例,以50例健康人为正常对照。应用流式细胞仪(FCM)测定其治疗前后血浆和(或)血清PAIgG及RP%,并常规血小板计数。结果ITP患者临床有效组治疗后较治疗前血小板计数明显升高、PAIgG和RP%显著降低(P<0.01)。临床无效组治疗前后血小板计数、PAIgG和RP均无明显变化(P>0.05)。两组治疗前3项指标与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01)。结论PAIgG和RP动态检测将是ITP患者血小板治疗效果的预测指标之一。