凉山彝族自治州HIV/AIDS抗病毒治疗前HIV-1耐药情况及其影响因素分析

目的 了解凉山彝族自治州（凉山州）HIV/AIDS抗病毒治疗前HIV-1耐药情况及其影响因素,为预防HIV-1耐药毒株的传播提供参考依据。方法 分别于2017年1月1日至6月30日、2018年1月1日至6月30日在凉山州开展HIV/AIDS抗病毒治疗前HIV-1耐药的横断面调查。提取获得HIV-1 pol基因区序列,根据2014年WHO耐药监测指南的推荐标准,应用HyPhy 2.2.4和Cytoscape 3.6.1软件进行HIV-1耐药毒株传播网络分析。结果 研究对象464例HIV/AIDS,HIV-1毒株为CRF07_BC亚型的占88.6%（411/464）,总的HIV-1耐药率为9.9%（46/464）,非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTI）、核苷类反转录酶抑制剂（NRTI）和蛋白酶抑制剂（PI）耐药率分别为6.7%（31/464）、1.9%（9/464）和0.4%（2/464）;有1组HIV-1新型重组毒株URF_01BC亚型独立成簇并携带相关耐药突变位点;多因素logistic回归分析结果显示,与异性性传播人群相比,注射吸毒人群的HIV-1耐药风险较高（aOR=3.03,95% CI：1.40～6.54）。结论 凉山州HIV/AIDS抗病毒治疗前的HIV-1耐药率较高,且有新型重组毒株URF_01BC亚型携带相关耐药突变位点的成簇传播,建议加强HIV-1耐药毒株传播的预防工作。     

短发卡状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

目的：构建AKT2基因特异性短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体,观察RNA干扰（RNAi）技术,对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用,并探讨其促进细胞凋亡的机制。方法：运用基因工程技术,设计合成针对AKT2mRNA的特异性shRNA,构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体（Lipofectamine^TM 2000）包裹转染人卵巢癌A2780和SKOV3细胞,荧光显微镜观察细胞内DsRed红色荧光蛋白的表达,计算转染效率,半定量RT—PCR（Semi-quantitative RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）检测AKT2的表达及干扰效率,流式细胞学检测法（FACS）检测细胞凋亡率,比较抑制AKT2基因前后卵巢癌细胞抵抗凋亡能力。结果：成功构建了PAKT2-ShRNA载体。A2780和SKOV3细胞转染pAKT2-shRNA后,荧光显微镜下观察转染效率约40％;Semi-quantitative RT-PCR和Western blot检测结果示,转染后AKT2 mRNA和蛋白表达均显著降低。FACS检测结果显示,转染pAKT2-shRNA后,紫杉醇25nmol／L处理细胞12h,与空白对照组和阴性对照组相比,细胞凋亡率显著增加,P〈0．05。结论：构建的pAKT2-shRNA真核表达载体能有效抑制AKT2基因表达;运用RNAi技术,降低卵巢癌细胞中AKT2基因表达水平,能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。     

HIV-1重组毒株gag区快速基因分型方法

目的建立一种简便、快速基因分型方法,对广西人类免疫缺陷病毒（HIV-1）重组毒株gag基因区进行亚型鉴定。方法从HIV阳性样本中提取核酸,使用HIV-1 M组通用引物对gag区进行第1轮扩增,第2轮使用分别检测C亚型和CRF01-AE重组型的二套特异性引物放入同一反应管中进行扩增,根据不同亚型扩增的目的带位置不同判断亚型。另外设计了一套引物,专门用于检测B’/C重组毒株。扩增出的所有样本均进行基因测序和系统树分析以验证结果。结果54份样本中,经基因测序和系统树分析证实CRF08-BC样本4份（7.41%）,CRF01-AE样本46份（85.18%）,4份（7.41）无法确定亚型。经亚型特异性引物PCR法检测出4份（100%）B’/C重组毒株,45份（97.83%）CRF01-AE重组毒株,灵敏度为98%,特异性为100%。2种方法检测结果经差异性检验显示,P〉0.05,差异无统计学意义,结果一致性高达98.15%。与基因分析结果吻合。重复实验显示,B’/C的平均重复性为100%（20/20）,CRF01-AE为98.3%（59/60）。结论该方法具有简便、快速,高度灵敏度和特异性的特点,可直接对广西HIV-1重组毒株CRFO 1-AE gag基因区进行分型。     

四川彝族人群HIV-1辅助受体CCR5△32和CCR2-64I基因多态性分析

目的了解中国四川彝族人群艾滋病病毒-1(HIV-1)辅助受体CCR5△32和CCR2．64I基因多态性特点。方法提取119份彝族正常人和88份HIV-1感染人群外周血基因组DNA。用聚合酶链反应(PCR)方法检测CCR5△32突变,阳性产物经克隆、测序进一步证实;用PCR-限制性片段长度多态性技术检测CCR2．64I突变,并测序验证。结果119份正常人样本中,CCR5 wt／△32等位基因突变杂合子2例(1．68％),未检测到CCR5△32／△32突变纯合子,CCR5△32等位基因频率为0．0084;CCR2-64I突变杂合子26例(21．85％),突变纯合子2例(1．68％),等位基因频率为01261。88份HIV-1感染者样本中,未检测到CCR5△32突变;CCR2．64I突变杂合子12例(13．64％),突变纯合子7例(7．95％),等位基因频率为0．1327。统计分析表明,上述等位基因多态性在该群体中均呈Hardy-Weinberg平衡分布;两种等位基因的突变频率在正常人和感染人群中的差异均无统计学意义。结论研究获得了中国四川彝族人群CCR5△32、CCR2-64I等位基因多态性资料,结果有助于综合评估中国人群对HIV-1感染的遗传易感性,同时为深入研究HIV-1抗性基因在中国不同民族的HIV感染及发病机制中的作用奠定基础。     

浙江省2004-2007年HIV-1亚型CRF01_AE流行毒株的基因型耐药分析

目的 了解浙江省HIV-1主要流行毒株CRF01_AE在治疗人群和未治疗人群中的基因型耐药变异情况.方法 选取2004-2007年间收集的HIV感染者样本,对HIV蛋白酶(PR)全长和部分反转录酶(RT)基因区进行RT-PCR扩增测序.分析56个感染CRF01_AE重组亚型样本的序列,其中未治疗组43例,已治疗组13例.使用Stanford HIV Drug Resistance Database(http://hivdb.stanford.edu)的在线耐药序列分析软件HIV DB进行序列分析,寻找耐药相关突变位点.结果 未治疗组CD4+T淋巴细胞中位数为229个/mm3,病毒载量log10.中位数为3.41,存在基因型耐药突变率的发生(5/43,11.6%),检出包括PR区第10、46、71位和RT区的第103、118位氨基酸的耐药相关突变;治疗组CD4+T淋巴细胞中位数为186个/mm3,病毒载量log10中位数为3.91,13例中有8例发生了基因型耐药变异(61.5%).检出29个基因型耐药突变.耐药率较高且多表现为交叉耐药.结论 浙江省未治疗的HIV感染者存在一定程度的基因型耐药突变;已开始治疗的HIV感染者基因型耐药突变发生率较高,而且交叉耐药现象广泛存在.     

交界性卵巢肿瘤保留生育功能手术的临床研究

目的回顾性分析交界性卵巢肿瘤保留生育功能手术,比较腹腔镜手术与开腹手术对卵巢生育功能及疾病预后的影响。方法收集襄阳市中心医院2008年1月1日至2013年12月31日予保留生育功能手术治疗的交界性卵巢肿瘤患者52例,分为开腹组27例、腹腔镜组25例。比较两组患者手术前后月经及生育情况、术后复发情况。结果术后总妊娠率56.5%,腹腔镜组高于开腹组(70.8%vs.40.9%,P0.05);总体复发率9.6%,两组差异无统计学意义(P0.05)。但是与开腹手术组相比,腹腔镜组术中出血量少[(342.0±60.9)vs.(422.0±69.8)ml,P0.05)]、手术时间短[(222.0±11.9)vs.(245.9±12.8)min,P0.05]、术后胃肠道功能恢复快[(26.3±7.5)vs.(41.6±6.4)h,P0.05]、合并感染少(8.0%vs.29.6%,P0.05)、住院时间短[(7.2±0.5)vs.(7.9±1.0)d,P0.05]。结论在交界性卵巢肿瘤保留生育功能手术中,腹腔镜手术与传统开腹手术相比具有同样的有效性和安全性,但腹腔镜手术术中出血量及术后并发症少、住院时间短、术后患者恢复快,更重要的是能更好的保留交界性卵巢肿瘤患者的生育力。     

长节段减压、短节段固定融合治疗退行性腰椎疾病的临床应用

目的：探讨长节段减压、短节段固定融合治疗退行性腰椎疾病的手术疗效。方法回顾性研究2010年1月至2015年1月收治的21例以腰部及下肢症状为主的腰椎退行性疾病患者,其中男9例,女12例,平均年龄64．5岁。手术方式采用选择性多节段减压、短节段固定融合。对患者术前、首次随访、终末随访的VAS评分进行对比。结果术前与终末随访VAS评分比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）,手术优良率90．5％。结论以腰部及下肢症状为主的退变性腰椎疾病患者可通过狭窄节段椎管减压、短节段固定融合显著减小手术创伤,减少相邻节段的退变,获得良好的手术疗效。     

细胞动力学和化疗方案的设计

细胞(增殖周期)动力学研究细胞群体生长、繁殖、分化、丢失和死亡等运动变化的规律，肿瘤组织主要由增殖和非增殖细胞群组成，绝大多数细胞毒素型的抗肿瘤药对增殖周期中的各期细胞有不同的影响。因此，了解细胞动力学知识，对深入认识肿瘤细胞繁殖过程和特点及药物作用原理，正确制定肿瘤药物治疗方案及新药研究都有很大的帮助。     

Ku70在卵巢癌组织中的表达及其意义

目的：探讨Ku70在卵巢组织中的表达水平与卵巢癌发生发展的关系。方法：应用免疫组化方法检测Ku70蛋白在15例正常卵巢、20例卵巢囊腺瘤和71例卵巢癌组织中的表达。结果：Ku70在正常卵巢、卵巢囊腺瘤和卵巢癌组织中都有不同程度的表达，但卵巢癌组织中Ku70的表达明显高于正常卵巢组织和卵巢囊腺瘤，且卵巢癌组织分化程度越差则Ku70的阳性率越高，表达强度亦越强，不同组织类型的卵巢癌Ku70的表达无差异。结论：Ku70蛋白可能在卵巢癌的发生发展过程中起重要作用。     

HIV-1Nef蛋白变异对艾滋病疾病进展影响机制的研究

人类免疫缺陷病毒(HIV-1、HIV-2)和猴免疫缺陷病毒(SIV)的Nef基因与病毒致病性有关,在疾病进展到AIDS期的过程中发挥重要作用。Nef可通过提高病毒颗粒感染性、激活CD4淋巴细胞及防止受感染细胞凋亡等多种途径促进HIV复制[1];Nef表位缺失可形成HIV免疫逃逸株,影响机体针对HIV病毒的免疫反应。Nef基因对HIV感染后AIDS疾病进展的影响机制至今仍无定论,本文就近年来此方面的研究,作一简要回顾。