短发卡状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

为观察构建的AKT2基因特异性短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用，并探讨其促进细胞凋亡的机制。运用基因工程技术，设计合成针对AKT2mRNA的特异性shRNA，构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体（Lipofectamine^TM 2000）包裹转染人卵巢癌A2780和SKOV3细胞，荧光显微镜观察细胞内DsRed红色荧光蛋白的表达，     

蛋白酶体抑制剂联合紫杉醇对卵巢上皮性癌细胞药物敏感性的影响

目的 研究蛋白酶体抑制剂波替单抗与紫杉醇单独作用及联合作用于卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞株SKOV3的效果,并对其诱导细胞凋亡的分子机制进行探讨.方法 波替单抗与紫杉醇单独或联合(50 nmol/L波替单抗、90 nmol/L紫衫醇或50 nmol/L波替单抗+90 nmol/L紫衫醇)作用于SKOV3细胞后,四甲基偶氮唑蓝比色法测定细胞增殖活性并计算细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白印迹法检测磷酸化蛋白激酶B(AKT)和磷酸化糖原合成酶激酶3β(CSK-3β)蛋白的表达水平.结果 波替单抗与紫衫醇联合作用于SKOV3细胞,12、24、36、48及72 h各时间点的细胞存活率分别为(65.2±5.8)%、(58.3±14.4)%、(35.3±5.0)%、(19.2±1.5)%和(11.4±2.5)%,与单用紫杉醇比较,细胞增殖抑制效果增强,各时间点分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).单用紫杉醇、单用波替单抗和两者联用的细胞凋亡率分别为(14.7±0.5)%、(15.1±0.8)%和(20.5±0.7)%,波替单抗与紫杉醇联用的细胞凋亡率明显增高,分别与单用紫杉醇或单用波替单抗比较,差异均有统计学意义(P<0.05).不同药物处理细胞后,磷酸化AKT和磷酸化GSK-3β蛋白的表达水平均有不同程度降低,以波替单抗与紫杉醇联用者降低最为明显[分别为(3.2±0.8)%、(19.3±0.4)%],分别与单用紫杉醇、单用波替单抗、正常未处理细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 蛋白酶体抑制剂波替单抗与紫杉醇联用能增强卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性;AKT/GSK-3β信号通路可能在波替单抗与紫杉醇联用诱导细胞凋亡中发挥了重要作用.     

浙江省HIV-1 CRF01_AE流行株的分子特征分析

目的 分析艾滋病病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组毒株在浙江省的分子流行特征.方法 提取234例HIV-1感染者基因组DNA用巢式聚合酶链反应(nPCR)方法扩增gag部分基因片段,测定序列以后分析核苷酸和氨基酸序列.结果 在扩增阳性并成功测序的192个序列中HIV-1CRF01 AE有81个,占42%,是浙江省HIV主要的流行毒株之一.系统进化树中存在3个bootstrap值＞60的分支簇,其中MIX组包括47个序列,内部基因离散率为2.4%±0.7%,与参考株CM240的基因离散率为3.4%±0.5%;SEX组包括7个样本,组内基因离散率为3.0%±1.2%,与参考株的基因离散率为3.9%±1.0%;MSM组包括12个样本,组内基因离散率为2.8%±1.1%,与参考株的基因离散率为4.9%±0.6%,三者差别有统计学意义.特征性氨基酸分析表明MIX组、SEX组、MSN组共享序列与国际参考株共享序列之间分别存在2个、4个和8个位点的差异.结论 浙江省内HIV-1 CRF01 AE流行株中主要存在三个进化簇,其中两个簇与广西来源株密切相关.CRF01_AE毒株在浙江省内主要以异性性途径和注射吸毒形式传播.     

真核表达Survivin基因对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性的影响

目的探讨Survivin基因对卵巢癌细胞紫杉醇（Taxol）敏感性的影响。方法构建Survivin正义全长真核表达质粒（pcDNA3．1-Survivin），经脂质体包裹转染人卵巢癌细胞A2780，以转染pcDNA3．1空载体的A2780细胞为对照。RT—PCR和蛋白质免疫印迹（Western blot）法检测Survivin mRNA和蛋白质的表达；MTT比色法检测紫杉醇对两组细胞存活率的影响；流式细胞仪（FACS）检测细胞凋亡率。结果①RT—PCR和Western blot检测提示转染pcDNA3．1-Survivin组中Survivin mRNA和蛋白质表达明显高于空载体组。②MTT比色法和FACS检测提示转染pcDNA3．1-Survivin组细胞存活率明显高于空载体组，细胞凋亡率明显低于空载体组，差异均有显著性意义（P〈0．05）。pcDNA3．1-Survivin转染后的A2780细胞对紫杉醇的敏感性明显降低。结论卵巢癌对紫杉醇的耐药性可能与Survivin基因表达有关。     

河南省某县HIV感染者耐药性影响因素分析

目的了解河南省某县抗人类免疫缺陷病毒（HIV）治疗病人耐药毒株产生的影响因素。方法对河南省某县抗HIV治疗病人进行队列研究,采用问卷调查和实验室检测耐药性结合的方法,用寿命表方法计算累积耐药率,用COX回归方法分析耐药性产生的影响因素。结果河南省某县艾滋病患者抗病毒治疗时间为182.5,365,547.5,730d,累积耐药率分别为19.0%,35.8%,41.7%,48.2%。家庭人均月收入高、医生经常主动询问服药后情况和已婚是影响耐药产生的保护性因素,而治疗前有临床症状和3 d内漏服治疗药物是耐药产生的危险因素。结论应加大医疗救助、抗病毒治疗督导与管理、加强病人关怀等方面的力度,努力提高病人服药的依从性,以减缓耐药毒株的产生。     

中国南方四省区流行的HIV-1 CRF01_AE病毒株基因特征研究

Objective To analyze the genetic characteristics of HIV-1 CRF01_AE strains prevailing in. the four provinces of southern China. Methods Plasma samples were collected from the newly diagnosed HIV-1 individuals reported in 2006 in Guangdong, Guangxi, Jiangxi and Hunan province. The gag and env gene fragments were amplified from RNA template extracted from plasma using RT and nested PCR methods. CRF01_AE sequences were analyzed by phylogcnetie methods and characterized by calculating the genetic distance and Entropy analysis. Results Two main epidemic clusters were found to exist in the CRF01 AE strains from 210 HIV-1 CRF01 AE infected individuals collected in the 4 provinces, southern China. It was found that no international reference strain was closely correlated with cluster Ⅰ , which including 123 samples. The strains in cluster Ⅱ, consisting 57 cases of samples, were closely related with the strains identified in Vietnam. Genetic distance analysis of gag and env genes showed that the diversity of cluster Ⅰ was obviously less than that of cluster Ⅱ. Data on nucleotide polymorphism showed that nucleotides compositions of 42 sites in gag and 40 sites in env wer esignificantly different between the two clusters. When compared with cluster Ⅱ , the polymorphism decreased at 61 nucleotide sites but increased at 21 sites in cluster Ⅰ. Conclusion This was the first report describing that two main epidemic clusters were existed in CRF01_AE strains prevailing in the 4 provinces, Southern China. The vires in cluster Ⅰ was the dominant strain in this region, with shorter period of circulation and higher proportion seen in the HIV-infected population, which might belong to CRF01_AE strain with certain features facilitating the spread of the virus. The virus in cluster Ⅱ was highly homology with the CRF01_AE strains from Vietnam, and seemed to have had several events of epidemics in populations in border regions of China and Vietnam.     

人卵巢癌细胞SKOV3对硼替佐米和紫杉醇联合应用的药物敏感性及可能机制

背景与目的:蛋白酶体抑制剂硼替佐米是新型抗癌药物,体外对多种恶性肿瘤细胞均具有良好的疗效.本实验研究硼替佐米与紫杉醇单独及联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3的存活率和凋亡率的影响,并对糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和髓样白血病-1基因(Mcl-1)在其诱导细胞凋亡中的作用机制进行探讨,为临床治疗卵巢癌提供理论依据.方法:用50 nmol/L硼替佐米、90 nmol/L紫衫醇,或50 nmol/L硼替佐米联合90 nmol/L紫衫醇分别作用于SKOV3细胞12、24、36、48及72 h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性,并计算细胞存活率,Annexin-V/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测相关蛋白表达水平.结果:50 nmol/L硼替佐米和90 nmol/L紫衫醇联合作用于SKOV3细胞,12、24、36、48及72 h时间点细胞存活率分别为(65.2±5.8)%,(58.3±14.4)%, (35.3±5.0)%,(19.2±1.5)%和(11.4±2.5)%,与紫杉醇单用组比较,细胞生长抑制增强,差异有显著性(P<0.05).药物单独或联合作用细胞24 h后,紫杉醇单用组、硼替佐米单用组和两者联用组细胞凋亡率分别为(14.7±0.5)%、(15.1±0.8)%和(20.5±0.7)%,硼替佐米与紫杉醇联用组凋亡率显著增高(P<0.05).药物处理细胞后,经免疫印迹法检测p-GSK-3β和Mcl-1蛋白表达水平,硼替佐米与紫杉醇联用组p-GSK-3β和Mcl-1表达水平降低最为明显,分别为正常细胞组表达水平的(19.3±0.4)%和(31.6±3.1)%,差异均有显著性(P<0.05).硼替佐米和紫杉醇单用组中p-GSK-3β表达水平有所降低,分别为正常细胞组的(78.7±1.2)%和(85.1±1.6)%,Mcl-1表达水平分别为对照组的(68.2±4.5)%和(57.0±4.1)%,差异均具显著性(P<0.05).结论:硼替佐米与紫杉醇联用能增强人卵巢癌细胞对紫杉醇的药物敏感性,并促进GSK-3β磷酸化Mcl-1,使其降解,诱导细胞,GSK-3β/Mcl-1信号通路可能在硼替佐米与紫杉醇联用诱导凋亡中发挥了重要作用.     

陕西省HIV—1流行株膜蛋白基因C2—V3区序列特征和亚型分析

目的 了解陕西省HIV－1毒株的流行情况和亚型特征。方法 用套式聚合酶链反应（Nested-PCR)对6份采集于陕西省经确认为HIV－1感染者或艾滋病病人外周血淋巴细胞（PBMC）提取核酸,从6份样品中获得了HIV－1膜蛋白（ENV）基因的核酸片段进行扩增,并测定和分析了C2－V3及其邻区共312个核苷酸序列。结果 6份血样,2份中HIV－1A亚型毒株感染（SHX7、SHX8）;4份为HIV－1B’亚型（泰国B’亚型）毒株感染（SHX1、SHX5、SHX6、SHX9）。SHX1、SHX5、SHX6、SHX9彼此问基因离散率为5．62％,SHX7与来自卢旺达的U08794之间的基因离散率仅为2．41％。结论 陕西省目前存在HIV－1A、B’两种亚型的毒株,HIV－1 B’亚型由邻近地区传入,HIV－1A亚型为非常人接触传入。     

乙二胺四乙酸依赖性假性血小板减少症一例分析

[病例] 男,50岁.因反复发热伴咳嗽、头痛半个月入院.半个月前患者无明显诱因出现发热伴头痛,体温最高39.6℃.有乙型病毒性肝炎(乙肝)病史10余年.查体:体温36.5℃,呼吸18/min,脉搏78/min,血压137/82 mmHg.     

宫颈癌IGF—IR的表达及与肿瘤血管生成、癌细胞增殖关系

目的探讨宫颈癌组织中胰岛素样生长因子-I受体（insulin—likegrowthfactor-Ireceptor，IGF-IR）表达及其与肿瘤血管生成、癌细胞增殖的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测93例宫颈癌和21例正常宫颈上皮组织中IGF．IR蛋白表达，并检测微血管密度（CD34标记）和癌细胞增殖指数（Ki-67标记）。结果宫颈癌组织中IGF-IR、微血管密度、Ki．67指数明显高于正常宫颈上皮组织（P〈0．01），IGF-IR高表达与宫颈癌淋巴结转移和浸润深度有关，而与患者年龄、宫颈癌组织学类型和临床分期无明显相关性。结论IGF．IR过度表达者，宫颈癌血管生成能力显著增强、癌细胞增殖活跃，检测宫颈癌中IGF-IR表达对进一步了解宫颈癌生物学行为和判断其预后有一定的价值。