IP-10重组腺病毒载体的构建及其病毒制备

目的利用细菌内同源重组法构建带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的!-干扰素诱导蛋白10(IP-10)重组腺病毒载体并制备重组腺病毒。方法将IP-10编码序列克隆入带有EGFP示踪的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移载体pAdTrack-CMV/IP-10,将其在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd/IP-10;酶切鉴定正确后转染HEK293细胞。收集病毒上清,PCR鉴定正确后,扩增并再次感染HEK293细胞检测病毒感染能力。结果重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在HEK293细胞中包装成有感染活性的病毒颗粒。结论成功地构建了表达IP-10蛋白的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒Ad/IP-10,为研究IP-10的蛋白功能提供了一个重要工具。     

温阳活血利水法对充血性心力衰竭患者甲状腺激素的影响

目的:观察温阳活血利水法治疗充血性心力衰竭疗效及对甲状腺激素的影响。方法:将60例患者分为两组各30例,对照组给予缬沙坦、地高辛、美托洛尔片、螺内酯等西药治疗;治疗组在对照组治疗的基础上予温阳活血利水中药汤剂治疗,均治疗8周。观察两组治疗前后心脏功能、6 min步行距离、甲状腺激素水平变化。结果:总有效率治疗组为83.33%,对照组为56.67%;两组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。两组6 min步行距离比较,差异有显著性意义(P<0.05)。治疗组治疗后T3、rT3、TSH有改善,与治疗前比较,有显著性意义(P<0.05);且优于对照组,有显著性意义(P<0.05)。两组治疗前后T4值比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:温阳活血利水法治疗充血性心力衰竭有效,可改善甲状腺激素水平。     

刘中勇教授治疗脉痹经验

脉痹包括了闭塞性动脉硬化及血栓性静脉炎范畴,为全身动脉粥样硬化病变的一部分,属于中医的痛痹、热痹、瘀证、脱疽等范畴。刘中勇教授多年来致力于心血管系统疾病的研究,注重经典与理论学习,专注于临床,认为脉痹病位在血脉,与气血脏腑密切相关,病机为瘀阻不通,病性以本虚标实,虚实夹杂为主,本虚为气血阴阳的亏虚,标实为寒邪、热毒、气滞、痰浊、瘀血互为交结为患。辨证分为寒瘀闭阻血脉、痰湿瘀闭血脉、热毒蕴滞血脉、气虚血瘀阻脉四型。     

超普疝装置经腹膜前间隙腹股沟疝修补的治疗理会

目的探讨超普疝装置治疗腹股沟疝的治疗效果。方法总结我院2012年8月至2013年8月运用超普疝装置治疗腹股沟疝共56例临床资料。结果56例患者手术时间55—85min,平均66min,术后有尿潴留10例,阴囊积液4例,无切口感染。随访1—12个月未见复发。结论超普疝装置经腹膜前间隙修补术是腹股沟疝治疗的理想术式。     

复方芩柏颗粒剂口服配合保留灌肠治疗溃疡性结肠炎36例

目的:观察复方芩柏颗粒剂口服配合保留灌肠治疗慢性溃疡性结肠炎(湿热内蕴型)的临床疗效。方法:将72例慢性溃疡性结肠炎患者随机分为治疗组与对照组各36例,对照组采用西医常规治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用复方芩柏颗粒剂口服配合保留灌肠治疗。疗程均为4周,比较两组临床疗效并记录不良反应。结果:总有效率治疗组为91.67%,对照组为77.78%,两组比较,差异有统计学意义(P0.05);治疗后治疗组腹痛、腹泻、脓血便、肛门下坠4项主要症状积分均低于对照组,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:复方芩柏颗粒剂治疗慢性溃疡性结肠炎安全有效。     

无POU域八聚体结合蛋白基因的克隆及其在Hepa 1-6细胞内的表达

目的 构建小鼠无POU域八聚体结合蛋白(non-POU-domain-containing,octamer binding protein,NonO)真核表达载体并在小鼠Hepa 1-6肝癌细胞内表达,观察NonO胞内表达、定位及脂多糖(LPS)对其定位的影响.方法 提取小鼠肝组织总RNA,RT-PCR扩增小鼠NonO基因的蛋白编码序列.采用基因重组技术将其亚克隆至pcDNA3-HA真核表达载体中,将该载体瞬时转染Hepa 1-6细胞,通过细胞免疫荧光方法观察NonO的胞内表达及LPS对其定位的影响.结果 酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;细胞免疫荧光可见NonO在Hepa 1-6细胞内表达、分布于细胞核,LPS刺激后NonO分布无明显变化.结论 成功构建NonO真核表达载体,为研究NonO在基因表达调控中作用及其生物功能提供了重要载体.进一步证实NonO为定位于细胞核的核蛋白.     

小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离

目的提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白。方法提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析。结果成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱。质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白。结论磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础。     

早产低出生体重儿与听力损伤

目的:探讨早产低出生体重儿听力损伤特点及其相关因素。方法:52例早产低出生体重儿根据胎龄分为4组,即<30、30～31+6、32～33+6、34～36+6周组,对每组患儿进行听性脑干诱发电位(ABR)检测,异常者于3个月后随访。结果:各组ABR反应阈增高的差异无统计学意义(P>0.05),但χ2分割后A组与C组、A组与D组的差异有统计学意义(P<0.05);各组平均听反应阈、ABR全波缺失、重度异常耳发生率及听力损伤程度的差异均有统计学意义(P<0.05);听力损伤与母妊娠期有病毒感染史、出生体重低于1500g及Apgar评分1min<3分或5min<6分者有相关性(P<0.05);ABR异常的恢复率A组与C组、A组与D组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胎龄越小ABR发生异常的程度越重。母妊娠期有病毒感染史、出生体重低于1500g和重度窒息(Apgar评分1min<3分或5min<6分者)是早产低出生体重儿听力受损的高危因素。ABR异常的小早产儿(胎龄<30周者)有着较高的恢复率。有必要对早产低出生体重儿进行早期的听力检测以及跟踪随访。     

人晚期糖基化终产物受体胞质内段融合蛋白表达载体的构建与表达

目的 构建人晚期糖基化终产物受体胞质内段(hRAGE-C)GST融合蛋白的重组原核基因表达载体并进行表达与纯化，研究其功能并鉴定与其相互作用的蛋白。方法 采用PCR方法扩增hRAGE基因编码区的胞质内段。并将其重组于pGEX-KG载体中。重组质粒经PCR、酶切、序列鉴定分析后，转化大肠杆菌BL21，以异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导产生hRAGE胞质内段的GST融合蛋白。结果 PCR、酶切和测序结果表明所克隆的GST／hRAGE-C原核表达载体完全正确，继而表达、纯化获得了相对分子质量约35000的融合蛋白(符合预期大小)。结论 将hRAGE胞质内段构建于含有GST标记的载体上并获得融合蛋白的高效表达。