脂多糖对S100A8和S100A9在Hepa 1-6细胞内定位的影响

目的观察S100钙结合蛋白A8（S100A8）和S100钙结合蛋白A9（S100A9）在细胞内定位及脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激对其细胞内定位的影响。方法将带有血凝素（HA）标签的S100A8或S100A9真核表达载体瞬时转染至小鼠Hepa1-6肝癌细胞,通过细胞免疫荧光方法观察S100A8、S100A9的胞内表达、定位及LPS对其定位的影响。结果静息状态下,S100A8、S100A9在细胞浆和细胞核都有分布;LPS刺激细胞2h后,S100A8移位入核,而S100A9在细胞内分布无明显变化。结论LPS刺激后S100A8、S100A9在细胞内的差异分布,提示两者在炎症反应中的作用不同,S100A8可能参与LPS诱导的基因表达调控。     

改良面中部翻揭进路切除婴儿右颌面部胚胎性横纹肌肉瘤1例

患儿，女，3个月，因发现右颌面部肿物2月余入院.查体：右侧上颌骨部广泛隆起，将鼻部向左侧推移，局部皮肤呈暗蓝色。可触及一3cm×3cm×4cm大小实质性肿块，质中，表面光滑，边界不清，无压痛及搏动，活动度欠佳。鼻内结构清晰，无脓涕及新生物：面部CT平扫＋增强示：右侧颌面部见一4cm×3cm×3cm的软组织，近上颌骨质部分吸收、破坏，增强后见其内较明显强化，但内部均匀，     

穿透肽TAT融合表达载体的优化及其靶向应用的初步研究

目的设计并构建分别位于融合蛋白氨基端和羧基端的穿透肽TAT表达载体,比较两种融合蛋白的内化差异,并利用TAT将凋亡素VP3转导入细胞内,检测其促凋亡活性。方法荧光显微镜观察His-TAT-EGFP和His-EGFP-TAT融合蛋白内化效率的差异,并利用Western blotting检测内化入细胞的蛋白量。将VP3序列插入到内化效率高的穿透肽载体pET14b-EGFP-TAT中并诱导表达蛋白,观察该蛋白在不同细胞系(HeLa、HEK293、3T3、PC-3)的内化;利用DAPI染色观察该融合蛋白诱导HeLa细胞凋亡后核小体的形成,MTT法检测细胞存活率。结果在蛋白浓度梯度实验中,荧光显微镜观察和Western blotting检测均显示His-EGFP-TAT融合蛋白的内化效率明显高于His-TAT-EGFP融合蛋白。在不同种类细胞中均可观察到His-VP3-EGFP-TAT内化的强荧光颗粒;该蛋白和对照蛋白(His-EGFP-TAT)孵育HeLa细胞48h后,His-VP3-EGFP-TAT孵育细胞中可观察到核小体形成,MTT法检测该组细胞的存活率在500、1000、2000nmol/L蛋白作用下分别为87.23%±2.09%、53.01%±1.79%和42.52%±1.90%,与His-EGFP-TAT孵育细胞存活率(分别为97.21%±1.41%、95.72%±1.26%和94.35%±1.67%)比较差异有统计学意义(P0.01)。结论 TAT位于融合蛋白羧基端的蛋白内化活性高于位于氨基端的蛋白,His-VP3-EGFP-TAT融合蛋白可以高效内化进入不同的细胞系,并能有效诱导细胞凋亡。     

小鼠固醇载体蛋白2原核表达载体的构建与表达纯化

目的 构建小鼠固醇载体蛋白2(SCP-2)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化获得具有活性的融合蛋白,为进一步研究SCP-2的生物学功能提供基础.方法 提取BALB/c小鼠肝脏组织总RNA,通过RT-PCR扩增得到鼠SCP-2编码序列,然后将该编码序列克隆到带有His标记的载体pET14b上,重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确后转化大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,用镍离子亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性,然后切取分子量正确的条带用SDS-PAGE及质谱技术进行鉴定.结果 重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确.融合蛋白表达纯化后获得了分子量约59kD的融合蛋白,符合预期大小,并经质谱分析证明该融合蛋白的表达正确.结论 成功构建了带His标签的SCP-2原核表达载体,并成功表达及纯化出该融合蛋白,为深入研究SCP-2的相关生物学功能提供了一个重要的工具.     

热敏灸治疗冠心病心绞痛50例临床观察

目的：观察热敏灸治疗冠心病心绞痛的临床疗效。方法：将100例患者分为2组各50例,西药组给予阿托伐他汀片、单硝酸异山梨酯缓释片、美托洛尔片、阿司匹林片等西药治疗;热敏灸组在西药组治疗的基础上予热敏灸治疗,2组均治疗8周。观察2组治疗前后心绞痛发作情况、心电图及血液流变学指标的变化。结果：临床疗效总有效率热敏灸组为92．00％,西药组为84．00％,2组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。2组心电图疗效比较,差异无显著性意义（P〉0．05）。热敏灸组治疗后心电图∑ST、NST、NT值,血液流变学指标全血黏度低切、全血黏度高切、血浆比黏度、红细胞比值均有改善,与治疗前比较,差异均有显著性意义（P〈0．05）;且优于西药组,差异均有显著性意义（P〈0．05）。结论：热敏灸治疗冠心病心绞痛有良好疗效.     

甲氨喋呤口服冲剂剂量治疗类风湿性关节炎的毒副作用与处理

甲氨喋吟(MTX)是一种叶酸拮抗剂,已被广泛应用于肿瘤、白血病及牛皮癣等疾病的治疗。近来MTX颇受国内外风湿病学家的重视,并已应用于对难治性类风湿性关节炎(RA)的治疗。由于小剂量疗效不显著,且易产生耐药性,故多主张大剂量的冲     

人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒的快速构建及其鉴定

目的 构建人的AWP1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因的重组腺病毒载体，为研究AWP1的生物功能提供工具。方法将克隆的AWP1 cDNA插入高效表达RFP的载体pDsRedl-N1的多克隆位点，与RFP序列形成AWP1-RFP融合基因，将该融合基因亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV和pAdShuttle-CMV中：经酶切鉴定正确后Pine I线形化，与骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183以同源重组：用lipofectAMINE将Pac I线形化的同源重组腺病毒载体转染293细胞以包装腺病毒：通过同源重组病毒载体和病毒颗粒基因组的DNA测序及PCR扩增和在293细胞中的表达鉴定重组腺病毒。结果同源重组载体和病毒颗粒的DNA测序和PCR分析显示AWPIcDNA序列正确，感染293细胞获得了AWP1-RFP融合蛋白的高效表达。结论成功构建和包装了人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒。     

内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞特异性结合肽的体内筛选及初步鉴定

目的：利用体内噬菌体展示技术筛选能与内毒素休克小鼠肝脏血管特异性结合的短肽。方法:尾静脉注射噬菌体环七肽库至内毒素休克小鼠体内，循环10 min后，回收肝脏中的噬菌体。将回收的噬菌体扩增、纯化，并以此为起始物进行下一轮筛选。经过4轮筛选后，将所得文库与正常小鼠做一次差减筛选。随机挑取噬菌体单克隆进行测序，序列分析后，进行噬菌体的体内回输实验及免疫组化分析，验证所筛得噬菌体克隆的导向情况。结果:经过4轮体内筛选，肝脏中噬菌体回收率逐步提高，证明噬菌体文库在肝脏血管中得到有效富集。DNA测序后发现，10条序列中有5条为LTTWAPA，体内回输实验和免疫组化实验均证实表达该序列的噬菌体能有效地靶向于休克小鼠肝脏血管内皮细胞。结论:筛选到的短肽LTTWAPA能特异性结合于内毒素休克小鼠肝脏血管内皮细胞，有可能对内毒素休克的治疗具有重要意义。     

2019～2021年重庆市渝北区婴幼儿谷类辅助食品中黄曲霉毒素B1B2G1G2污染状况

目的：了解重庆市渝北区市售婴幼儿谷类辅助食品中黄曲霉毒素中AFB₁、AFB₂、AFG₁、AFG₂的污染状况。方法：2019～2021年在重庆市渝北区各孕婴店和大型超市等流通环节采集的婴幼儿谷类辅助食品,采用超高效液相色谱—柱前衍生法进行4种黄曲霉毒素的检测。结果：180份婴幼儿谷类辅助食品中(2019～2021年各60份)黄曲霉毒素阳性样品共63份,总检出率为35.00%;4种黄曲霉毒素中以AFB₁的检出率和检出浓度最高,检出率为27.78%,阳性样品浓度为0.165～8.547μg/kg; 2019年AFB₁超标率为3.33%,2020年AFB₁超标率为15.0%,2021年AFB₁超标率为13.33%。结论：渝北区市售婴幼儿谷类辅助食品中存在一定的黄曲霉毒素污染,4种毒素中以AFB₁污染为主,污染水平总体呈上升趋势,相关部门应引起重视。