DNA甲基化PCR引物的设计

DNA甲基化是哺乳类动物一个重要的基因外遗传信号。有研究表明,DNA甲基化与大多数肿瘤的发生相关,抑癌基因启动子CpG岛的高甲基化可引起抑癌基因表达沉默,细胞出现无节制生长,导致肿瘤的发生[1]。目前,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MS-PCR)是研究DNA甲基化最为常用且准确度较高的方法之一,而理想的引物设计则是其成功的关键因素之一。国外互联网上有1个提供免费在线引物设计程序“MethPrimer”,它能够预测CpG岛,根据实验者要求设计硫化测序PCR(bisulfate-sequencing PCR,BSP)和甲基化特异性PCR(methylation-sp…     

乳腺癌细胞中PNRC基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究

目的 研究乳腺癌细胞中富含脯氨酸核受体辅活化子(proline-rich nuclear receptor coactivator protein,PNRC)基因启动子CpG岛的甲基化状态及在PNRC转录调节中的作用.方法 应用PT-PCR检测PNRC基因在正常乳腺细胞与乳腺癌细胞中的表达情况,并运用"MethPrimer"软件对PNRC启动子区进行分析,预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测PNRC启动子区CpG岛的甲基化状况;PT-PCR及Northern杂交检测乳腺癌细胞经甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dc)作用后,PNRC基因mRNA的表达情况;Westernblot检测5-Aza-dc干预对PNRC蛋白表达的影响;将含PNRC启动子序列的报告质粒转染乳腺癌细胞,再经5-Aza-dc处理后,检测PNRC基因启动子的活性.结果 PNRC基因在乳腺癌细胞中的表达较正常乳腺细胞明显降低;乳腺癌细胞PNRC基因启动子区存在CpG岛甲基化;乳腺癌细胞经5-Aza-dc处理后,PNRC基因mRNA及蛋白表达水平显著增加,其PNRC基因启动子的活性也明显增强.结论 PNRC基因启动子区的高甲基化导致PNRC在乳腺癌细胞中表达降低.     

大鼠肝叶切除后肝细胞再生相关蛋白的蛋白质组学分析

目的 通过对肝叶切除后6、24 h的肝细胞与正常肝细胞的蛋白质组分析,筛选出与肝细胞再生相关的蛋白质.方法 选择雄性SD大鼠9只(体质量200 g),分3组,6 h组、24 h组和对照组,每组3只,建立大鼠70%肝叶切除模型.6 h组在肝叶切除后6 h分离肝细胞,24 h组在肝叶切除后24 h分离肝细胞,对照组为正常肝细胞.裂解液裂解细胞提取总蛋白,运用蛋白组学相关技术分析3组细胞的蛋白组学差异.结果 总共得到47个差异蛋白质点,鉴定出42个.结论 我们的数据显示:24 h组与对照组和6 h组都有重叠,而6 h组和对照组重叠部分较少,推测其可能的原因为6 h组肝细胞处于肝再生的启动阶段,与对照组差异较大,而24 h组,肝再生已启动,各种维持肝细胞正常功能的蛋白质也开始表达.     

高级动态血流成像探测胰十二指肠上前动脉的研究

目的比较不同彩色超声成像模式显示胰腺动脉的能力,探讨高级动态血流成像技术（advanced dramaticflow imaging,ADF）探测正常人及糖尿病患者胰腺动脉价值。方法分别应用彩色多普勒血流成像（color dopplerflow imaging,CDFI）、彩色多普勒能量图（color doppler energy imaging,CDE）、脉冲多普勒技术（pulse wave,PW）和ADF检测101例（糖尿病组22例,正常老年组31例,正常成人组48例）胰十二指肠上前动脉,自身配对。结果胰腺十二指肠上前动脉总显示率93.0%。CDFI和CDE显示胰十二指肠上前动脉动脉58例,显示率为57.4%。ADF显示胰十二指肠上前动脉94例,显示率为93.0%。ADF与CDFI和CDE对胰十二指肠上前动脉显示差异具有显著统计学意义（P〈0.01）。ADF技术对各组胰十二指肠上动脉均有较高比例的显示,组间显示构成比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论ADF对不同年龄正常人及糖尿病患者的胰腺动脉均有较强的显示能力,并可获得多普勒参数,可作为胰腺血管研究的新方法。     

酶联免疫吸附试验检测人疱疹病毒7型抗体的研究

目的 建立一种简便、快速、可靠的检测人疱疹病毒7型（HHV7）特异性IgG和IgM酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法 应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞,制备并纯化细胞工程抗原和重组ppS5抗原;对325份血清HHV7抗体进行检测,建立HHV7特异性IgM和IgG间接ELISA,并与Qiagen公司ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果 采用细胞工程抗原和重组抗原制备的HHV7 IgG和IgM ELISA诊断试剂敏感性、特异性、稳定性及重复性[变异系数（CV）〈10％]较好;以Qiagen公司ELISA试剂盒为参比,重组抗原IgG ELISA检测上述标本的敏感性、特异性和符合率分别为98．1％、94．1％和97．8％,IgM ELISA分别为84．6％、99．7％和99．1％;与细胞工程抗原相比,重组抗原诊断试剂的特异性高而敏感性略低。结论 自制HHV7 IgG和IgM ELISA检测试剂敏感特异,可用于临床HHV7感染的诊断及流行病学调查。     

培养基的不同储存条件对细菌检测结果的影响

营养琼脂培养基是日常工作中最常用的细菌计数用培养基,按照国家标准[1],营养琼脂培养基配制后宜新鲜使用或保存于冰箱冷藏室48 h内使用,而在实际工作中较难做到。为此,我们用不同温度和时间来存放配制好的营养琼脂培养基,并观察各种存放条件对细菌检测效果的影响,现将结果报道如下。1材料与方法1.1材料营养琼脂培养基干粉购自杭州天和微生物试剂有限公司;实验用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌由本室分离鉴定,用半固体培养基保存于4℃冰箱。1.2方法[2]按常规法配制倾注的营养琼脂培养基用密封筒包装,分别于冰箱冷藏室(4℃)、恒温箱(18~22℃)及室…     

中药农业与中药资源可持续发展

对我国中药农业和中药资源产业的发展历史、现状和存在的问题进行了系统分析,在此基础上提出了我国中药农业和中药资源可持续发展的科技战略,并提出了实施和发展这一战略的关键技术研究和工程建设措施。     

我院某外科地佐辛注射液使用合理性分析

目的：了解我院某外科地佐辛注射液的临床使用情况,分析用药合理性,以促进临床合理用药。方法：通过HIS、PASS系统回顾性分析我院某外科2020年6月–2021年5月使用地佐辛注射液的住院患者信息,收集其用药量、疗程等资料,分析用药合理性。结果：2020年6月–2021年5月,某外科使用地佐辛注射液金额为1 023 960元,占全院地佐辛总金额的62.95%;地佐辛注射液用药频次1131例次（35.82%）;在抽查的300份病历中,仅66例患者存在合并用药现象,单纯使用地佐辛镇痛的比例高达78.00%,且无人进行疼痛评分;免费患者为主要用药人群（53.00%）,其消耗量占某外科总消耗量的66.32%,人均消耗地佐辛量为51.76 mg,远超过同期医保患者人均消耗地佐辛量（28.97 mg）。结论：我院某外科地佐辛注射液的使用存在不合理现象,医院需加强对该药临床使用的监管,规范临床医生处方,使患者得到安全、有效、舒适及满意的镇痛治疗。     

布洛芬混悬液致急性荨麻疹伴血管神经性水肿1例

1例5岁4个月女性患儿,因急性咽炎发热服用布洛芬混悬液。首次服药2 h后,患儿出现双眼睑及四肢关节轻微浮肿、局部少量皮疹。家长自行为其涂抹青草药膏,1 h后患儿浮肿及皮疹基本消退。当晚患儿因发热再次口服布洛芬混悬液,服药1 h后患儿全身瘙痒并出现风团样皮疹,双眼睑及四肢关节处出现浮肿,下嘴唇发红并肿胀,再次涂抹药膏后症状未见缓解,并逐渐加重,遂入我院急诊科就诊。经临床诊断,考虑为布洛芬混悬液所致急性荨麻疹伴血管神经性水肿,立即给予地塞米松磷酸钠注射液静脉滴注,苯海拉明注射液肌注、氯雷他定片口服治疗。1 h后,患儿全身皮疹及四肢关节处肿胀逐渐消退,双眼睑及下嘴唇肿胀明显减轻。次日,患儿上述症状完全消失。     

射频治疗仪导入透明质酸修护生物膜治疗Ⅰ、Ⅱ型玫瑰痤疮疗效观察

目的:探讨射频治疗仪导入透明质酸修护生物膜治疗Ⅰ、Ⅱ型玫瑰痤疮的临床疗效及安全性.方法:我科门诊2019-10～2020-08就诊的Ⅰ型及Ⅱ型玫瑰痤疮患者76例,随机分为治疗组39例和对照组37例.两组均给予多西环素及透明质酸修护生物膜治疗;另外治疗组给予射频治疗仪导入透明质酸生物膜治疗.多西环素口服50 mg/d;透...