乙肝基因疫苗系列质粒的构建及其在真核细胞中的表达

目的　构建一系列乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白的真核细胞表达质粒 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法　采用常规 PCR法扩增 S、前 S2 - S、前 S1 -前 S2 - S片断 ,利用重叠 PCR法扩增出前 S1 - S片断后 ,分别插入 Rc/ CMV及 p SG5 U TPL/ Flag载体质粒中 ,并在其 ATG起始密码前加入 KOZAK序列后转染 SP2 / 0细胞 ,Western- Blot杂交检测所表达蛋白 ,并用核酸自动分析仪分析所插入片断的核酸序列。结果　插入片断的核苷酸序列与相应的大、中、小蛋白和前 S1 - S蛋白的编码基因一致 ,Western- Blot杂交检测出了相应的目的蛋白。结论　获得了 8个能高效表达乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白和前 S1 - S蛋白的真核细胞表达质粒。     

福州地区HBsAg-/HBVDNA+献血者乙肝病毒S区MHR变异特征分析

目的 分析福州地区HBsAg-/HBV DNA+献血者HBV的基因型及主要亲水区(MHR),尤其是其中"a"决定簇区氨基酸的变异情况,为进一步研究隐匿性乙肝病毒感染的发生机制提供参考.方法 对收集的2013年7月—2014年10月福州地区献血者的90874名献血者血液标本进行HBsAg ELISA与单人份核酸检测,对筛查出的HBsAg-/HBV DNA+标本,进行HBV DNA的提取和S区基因的扩增和测序.测序结果进行进化分型,分析MHR中氨基酸序列的变异情况.选取15例前期研究所得的HBsAg+/HBV DNA+标本的测序结果作为对照,比较两类标本在"a"决定簇区蛋白序列变异上的差异.结果 16份测序结果中B基因型15份,C基因型1份.15例标本中13例在MHR内共发生了33次氨基酸的变异,其中25次集中在"a"决定簇区,HBsAg-/HBV DNA+标该组"a"决定簇区的变异率要高于HBsAg+/HBV DNA+标该组.变异的形式主要为单个的氨基酸的点替换,另有7例标本在124位与125位氨基酸间发生了9个碱基的非移码插入,造成该位点间"TNR"3个氨基酸的插入.结论 福州地区献血者HBsAg-/HBV DNA+血液标本中HBV的基因型以B型为主,MHR的氨基酸变异主要集中在"a"决定簇区,有本地区的地域特点.研究中新发现的3个氨基酸"TNR"的插入变异,可能影响HBsAg的检出.     

肝富集转录因子在HBV基因转录与复制中的作用研究

目的观察各种肝富集转录因子对乙型肝炎病毒（HBV）基因转录和病毒复制水平的影响,探讨其在HBV嗜肝性机理中的作用。方法用复制型HBV重组质粒pHBV4．1与肝富集转录因子HNF1、HNF3、HNF4、HNF6、C／EBP或RXRa／PPARa的表达质粒,分别共转染非肝源细胞株NIH3T3、HeLa、293T、SWl353、CV-1和COSl。用Northern吸印杂交检测HBV3．5kb、2．4／2．1kb、0．7kb mRNA的转录情况,Southern吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果用pHBV4．1转染NIH3T3细胞后,在没有肝富集转录因子表达质粒共转染时未能检出3．5kb HBV RNA转录,也无HBV DNA复制;当用肝富集转录因子共转染时,HNF4和RXRα／PPARα的表达能够激活3．5kb HBV RNA转录和HBV DNA复制,而HNF1、HNF3、HNF6和C／EBP未能激活HBV复制。在HeLa、293T、SW1353、CV-1和COS1细胞中,HNF4、RXRα／PPARα对HBV的转录和复制也具激活作用。进一步用突变型HBV重组质粒研究发现,C启动子HNF4结合位点的突变明显减弱了HNF4和RXRα／PPARα对HBV复制的激活作用。结论肝富集转录因子HNF4和RXRα／PPARα可支持HBV在非肝源细胞中的转录与复制;肝特异性基因转录是HBV嗜肝性的决定因素之一。     

5600例血清标本乙肝病毒DNA定量与免疫学标志物检测的对比分析

目的探讨乙肝病毒(HBV)感染血清学标志物常见模式与HBVDNA拷贝数之间的相关关系。方法对5600例血清标本进行HBVDNA荧光定量测定(FQ-PCR)和乙肝病毒感染血清学标志物(HBVm)测定。结果在2010例大三阳(即HBsAg、HBeAg、抗HBc均阳性)的标本中,检出HBVDNA阳性者有1796例,平均拷贝数为3.73×107/mL;在1790例小三阳(即HBsAg、抗HBe、抗HBc均阳性)的标本中,HBVDNA阳性者为301例,平均拷贝数为1.21×106/mL;在793例HBsAg、HBcAb阳性的标本中,HBVDNA阳性235例,平均拷贝数6.27×106/mL;而在278例HBVm全阴性的标本中,仍有3例检出HBVDNA阳性,平均拷贝数为1.63×104/mL。结论在各种HBVm模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高;在HBsAg、抗-HBc阳性的血清中存在中等水平的HBV复制;而血清中未检出HBVm者并不能排除HBV感染。     

温阳中药复方肝之福对肝纤维化大鼠的抗脂质过氧化作用

目的观察温阳中药复方肝之福在实验性大鼠肝纤维化形成中的防治作用,并探讨其疗效机制。方法Wistar大鼠45只,随机分为对照组、肝之福组、秋水仙碱组和模型组。除对照组外,其余3组均采用sc CCl4及饮用100 ml.L-1乙醇的方法制备大鼠肝纤维化模型。在造模的同时,肝之福组ig肝之福,秋水仙碱组ig秋水仙碱,模型组则ig等量生理盐水,每日1次,共30 d。实验结束后,分别采血测定肝功能,取肝组织检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,并根据炎症活动度及纤维化半定量计分系统(SSS)评分,观察预防用药组与模型组的病理组织学变化。结果与模型对照组相比,肝之福组的肝功能明显改善,MDA含量由16.31±6.03 nmol.mg-1减少到8.84±2.08 nmol.mg-1(P<0.01);而SOD活性则由86.33±17.74 U.mg-1升高至122.01±19.12 U.mg-1(P<0.01);同时,SSS评分炎症活动度及肝纤维化程度明显改善。经比较,肝之福抗肝纤维化的疗效与秋水仙碱相当。结论肝之福可保护肝脏,预防或缓解肝纤维化的形成。抗脂质过氧化是其可能的作用机制。     

慢性HBV感染自然史各期肝组织HBcAg演变规律的探讨

目的：通过观察肝组织HBcAg分布在慢性HBV感染自然史各期的演变,进一步揭示HBV感染过程中免疫状态的规律。方法按照《慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）》描述的慢型乙型肝炎自然史分期的血清学特征,将慢性HBV感染者分为免疫耐受期、免疫清除期、非活动或低（非）复制期以及再活动期。分别统计慢性HBV感染各个阶段肝组织HBcAg分布的情况。结果共纳入637例患者,其中男性501例（78.6%）,女性136例（21.4%）。处于免疫耐受期患者101例,免疫清除期248例,非活动或低（非）复制期119例,再活动期169例。各阶段患者肝组织HBcAg分布差异均具有统计学意义（χ2=347.975,P ＜0.0001）。免疫耐受期肝组织HBcAg分布以核型与混合型为主（89.1%）;免疫清除期以混合型与浆型为主（74.6%）;非活动或低（非）复制期以阴性为主（89.1%）;再活动期以浆型与阴性为主（73.4%）。结论在慢型乙型肝炎自然史过程中,肝组织HBcAg经过了以核型为主→浆型为主→阴性→浆型为主的规律性变化。HBcAg的分布特征是HBV自然史阶段中机体免疫功能与病毒之间相互作用的重要标志。     

质子泵抑制剂预防脑出血并发cushing溃疡

ｃｕｓｈｉｎｇ溃疡系中枢神经系统疾病（如颅脑损伤，脑血管意外等）的病程中发生的溃疡，临床以呕血、便血为主要表现，这种并发症严重影响了患者的健康，我们通过应用质子泵抑制剂来预防严重脑出血患者并发ｃｕｓｈｉｎｇ溃疡起到良好效果，现报道如下：１临床资料１．１对象：近二年因脑出血住院病人８７例，所有病例均有颅内高压临床表现，并经头脑ＣＴ检查证实，患者在住院后二周内无死亡，其中年龄最小４２岁，最大８２岁，平均年龄 ６９岁，意识障碍 ６７例占 ７７．０１％，脑疝形成１２例，占１３．７９％，脑干出血９例，出血破…     

乙型肝炎与肾移植

我国乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带率约10％,而肾功能衰竭患者由于自身免疫力的降低且经常做血液透析,其HBV的感染率更高。HBsAg阳性患者应不应该进行肾移植?如何在HBsAg阳性人群中选择合适的病例进行肾移植?如何预防术     

计算机多相个性测量诊断系统在药物滥用者中的应用研究

采用计算机多相个性测量诊断系统（ＣＭＣＩＳ），对４６例男性药物滥用者进行测查结果发现受试者Ｈｓ，Ｐｄ，Ｐａ，Ｐｔ，Ｓｃ，Ｍａ均显著高于中国男性常模。五项研究量表中ＭＡＳ、Ｄｙ、Ｃｎ显著高于中国常模，Ｄｏ、Ｒｅ显著低于中国常模，提示吸毒人群具有某些特殊个性心理特点。     

中医药管理专业学生素质教育浅谈

提高大学生的综合素质,是大学教育培养目标的重要内容,也是面向21世纪教育、教学改革的重要目标。如何认识和实施素质教育,培养出适应21世纪科学技术迅猛发展、社会高度进步的中医药管理人才,是我们每一位从事中医药管理教育工作者的首要任务。