四株中国狂犬病病毒核衣壳蛋白和糖蛋白抗原性分析

狂犬病病毒核蛋白（ＮＰ）单克隆抗体可以清楚地区分狂犬病病毒和狂犬病相关病毒。用抗狂犬病病毒单抗还可以在同一血清型内进一步的分组以及分析毒株传播的宿主动物和地理位置,从而有可能找到流行的线索。病毒间的差异同样表现在与病毒ＧＰ单抗的特异反应中。用特异性Ｇ...     

RPA-LFD技术快速检测结核分枝杆菌利福平耐药性的应用

目的 基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术结合侧向流动试纸条(LFD),建立可快速检测结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药的方法,并初步评价其临床应用价值.方法 采用比例法对182株结核分枝杆菌临床分离株进行利福平耐药性检测.建立RPA-LFD技术,检测182株菌株中利福平耐药决定区(RRDR)常见突变位点rpoB 531、...     

新疆巴楚地区2001年克里米亚-刚果出血热现场调查报告

新疆出血热 (ＸＨＦ) ,国际上称为克里米亚 -刚果出血热 (ＣｒｉｍｅａｎＣｏｎｇｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｆｅｖｅｒ) ,从 1964年在我国新疆发现至今在新疆地区时有流行发生。 2 0 0 1年 5 - 6月ＸＨＦ在我国新疆巴楚县再次严重流行 ,并且这次流行是自 1964年新疆出血热在我国首次发现至今流行最重、病例数最多的一次。为此 ,我们经现场调查 ,截止到 2 0 0 1年 6月 7日 ,已出现 5 1例病人 ,其中3例死亡。 5 1例病人中 ,有 4 5例发生在新疆出血热一直连续流行的红海乡。红海乡总人口有一千多 ,仅以红海乡人口来计算 ,发病率大约为 5 % ,病…     

PCR-RFLP技术用于脓肿分枝杆菌群鉴定的初步研究

目的 探讨PCR-RFLP分子鉴定技术对脓肿分枝杆菌群鉴定的应用价值.方法 收集2009-2010年在福建省肺科医院、北京市朝阳区疾病预防控制中心、北京解放军总医院抗酸染色阳性菌株46株.根据2004年分枝杆菌检验手册临床检验常分离菌鉴定程序,用DNA直接测序方法为对照,以hsp65(441 bp)和rpoB(380 bp)基因的特异片段为分子标识,采用PCR-RFLP对脓肿分枝杆菌群临床分离菌株进行菌种鉴定.结果 接种L-J、PNB和TCH培养基,鉴定为结核分枝杆菌30株,非结核分枝杆菌16株.其中10株非结核分枝杆菌的培养特性和主要生化反应同脓肿分枝杆菌( ATCC 19977)结果一致.经hsp65 PCR-RFLP鉴定,9株菌株的指纹图谱为235和200 bp( BstEⅡ)/145、70、60、55、50和40 bp(HaeⅢ),1株菌株的指纹图谱为235和200 bp(BstEⅡ)/200、70、60和50 bp(HaeⅢ).经rpoB PCR-RFLP鉴定,10株临床菌株的指纹图谱是105、95和80 bp(MspⅠ)/130、100 bp和90 bp( HaeⅢ).DNA测序分析,9株分离株与脓肿分枝杆菌群脓肿亚种hsp65和rpoB基因序列匹配度均为100％;1株分离株与脓肿分枝杆菌群马赛分枝杆菌亚种hsp65和rpoB基因序列匹配度均为100％.结论 PCR-RFLP是一种快速、有效鉴定脓肿分枝杆菌的方法,且hsp65 PCR-RFLP的鉴定效果优于rpoB PCR-RFLP.     

3D TOF MRA在永存颈动脉-椎基底动脉吻合诊断中的应用

目的 探讨3D TOF MRA在永存颈动脉-椎基底动脉吻合诊断中的应用。方法 选取我院行头颈部MRA检查的129例永存颈动脉-椎基底动脉吻合患者,分析其起源、路径、椎基底动脉发育状况及其他合并变异。结果 129例永存颈动脉-椎基底动脉吻合中：PTA 113例,左侧58例,右侧55例。Weon分型Ⅰ型69例,Ⅱ型14例,Ⅲ型12例,Ⅳ型11例,Ⅴ型7例,均为Ⅴa型。102例合并椎动脉发育不良或闭塞。PHA 10例,左侧3例,右侧7例,均合并对侧椎动脉发育不良。PIA 6例,左侧5例,I型1例,II型4例;双侧1例,为Ⅱ型;4例合并对侧椎动脉发育不良。结论 3D TOF MRA能明确诊断永存颈动脉-椎基底动脉吻合变异、分型,为临床手术提供可靠的形态学依据。     

结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列分型方法标准化操作程序的建立

目的 建立结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)的标准化方法,评价该方法的分型能力、应用价值.方法 选取15个位点,采用核酸提取、PCR和琼脂糖凝胶电泳等技术,结合BioNumeries(Version 5.0)软件,对中国54株结核分枝杆菌临床分离株进行分型.结果确定标准化的MLVA方法,包括细菌分离培养、核酸提取、PCR、琼脂糖凝胶电泳等实验步骤及标化参数的相关数据分析软件的使用.VNTR位点确定为ETRA、ETRB、ETRC、ETRD、ETRE、MIRU10、MIRU16、MIRU23、MIRU26、MIRU27、MIRU39、MIRU40、Mtub21、Mtub30和Mtub39.结论建立MLVA标准化技术方案,该方法操作简便,分型鉴定能力及实验室间结果可比性强,便于网络化,有利于结核病流行中追溯传染源,分析流行趋势.     

45个可变数目串联重复序列位点用于中国结核分枝杆菌基因型鉴定的分辨力评价

目的 评价结核分枝杆菌基因组中串联重复序列(VNTR)位点在中国结核分枝杆菌临床分离株的分型鉴定的分辨力.方法 参考http://minisatellites.u_psud.fr/网站记载的位点选取其中VNTR位点,参照H37Rv结核分枝杆菌标准株全基因序列,利用DNAStar软件设计引物,采用PCR分别对中国结核分枝杆菌临床分离株和H37Rv标准株的VNTR位点进行检测,根据PCR凝胶电泳图片中各菌株相应位点扩增产物的大小,确定重复单元的重复次数.计算Hunter-Gaston指数来分析各位点的分辨能力,及各位点合并分辨力.结果 共检测135株中国结核分枝杆菌临床分离株和H37Rv标准株的45个VNTR位点.结果显示45个VNTR位点对136株菌的分辨力各不相同,Hunter-Gaston指数最大者为0.814(0.797～0.830),最小者为0.015(0.001～0.028),＞0.5的有13个位点.位点的合并分辨力分析显示,随着位点数量增加,分辨力增强,如Qub11-b和Qub18两个位点合并分析,Hunter-Gaston指数为0.936,分组数为44组;Qub11-b、Qub18、Mtub21、Rv2372、MIRU26、Qub26、Qub4156c、Qub11-a和Qub15等9个位点合并分析,Hunter-Gaston指数已经达到1,组数为136组,表示已达到最大分辨力,即株水平分型.结论 不同VNTR位点具有不同的分辨力.其分型分辨力,多位点联合明显好于单位点.Qub11-b等9个位点的合并分型能力较好,这些位点有利于结核分枝杆菌的分型研究.     

卡介菌及其衍生制品鉴别实验用BCG DNA国家参考品的研制

目的建立BCG DNA定性用国家参考品,供BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用。方法以紫外分光法检测260nm和280nm的吸光度值,比较A260/280的比值,考量国家参考品BCG DNA的纯度指标;以多重PCR法检测BCG DNA特异性缺失区RD1区是否存在,验证所制备的BCG DNA可作为定性用国家参考品,组织3家实验室对该参考品进行验证;并在不同时间,观察其稳定性。结果所制备的BCG DNA A260/286=1.96〉1.8;BCG DNA国家参考品经多重PCR扩增BCG缺失区RD1的产物为约200bp DNA片段,与卡介菌巴斯德株DNA结果相同,3家实验室的验证结果一致,该制品经37℃4周,4℃3个月、6个月、12个月放置后,PCR结果不变。结论该BCG DNA制品纯度高,稳定,可作为BCG DNA定性用国家参考品,在卡介苗相关制品的质量控制中,做为BCG菌株、卡介菌多糖核酸注射液等卡介菌衍生制品鉴别实验用的国家参考品。     

小儿发育性髋关节脱位69例围手术期的护理

目的为了能够达到较好的手术疗效,提高护理质量,对小儿发育性髋关节脱位(DDH)患儿围手术期实施护理干预。方法对唐山市第二医院小儿骨科手术治疗的DDH患儿69例患儿临床资料进行汇总分析。结果在围手术期实施护理干预,达到了最佳护理效果。结论并在整体护理理念的指导下,将护理程序融入以人为本的理念,保证了手术治疗效果,缩短了住院时间。同时制定适合的锻炼计划,循序渐进,达到真正的康复。     

甘肃省２２８株临床分离结核分枝杆菌ＤＮＡ 分型初步研究

摘要：目的　了解目前甘肃结核分枝杆菌流行株的基因型特征，并评价两种基因分型方法的应用价值。方法　收集甘肃省结核分枝杆菌临床分离菌株，分别采用多位点数目可变串联重复序列分析（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｌｏｃｕｓｖａｒｉａｂｌｅｎｕｍｂｅｒｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔａｎａｌｙｓｉｓ，ＭＬＶＡ）和间隔区寡核苷酸分型（ｓｐａｃｅｒｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｔｙｐｉｎｇ ，Ｓｐｏｌｉｇｏｔｙｐｉｎｇ）技术进行基因分型，用ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ软件进行聚类分析后，进行结果综合分析、比对。结果　利用ＭＬＶＡ 分型方法，２２８ 株结核分枝杆菌被分为４ 大基因群，７ 个主要基因型；Ｓｐｏｌｉｇｏｔｙｐｉｎｇ 可将２２８株结核分枝杆菌分为４个基因群，８个主要基因型，其中最大的基因型为北京家族基因型。两种方法在基因型分型方面经卡方检验差异无统计学意义（χ２＝０．０６，P＞０．０５）。结论　两种方法对结核分枝杆菌的分型效果良好，重复性高，操作简便，可试用于大规模分子流行病学调查。北京家族是甘肃最主要的流行基因群。