CEA基因沉默对基因工程腺病毒(H101)杀伤食管癌EC9706细胞的影响

目的: 研究癌胚抗原(CEA)特异性基因沉默对基因工程腺病毒(H101)杀伤食管癌EC9706细胞作用的影响,以探讨影响H101敏感性的内在因素。 方法: 利用RNA干扰技术,构建针对人食管癌EC9706细胞的CEA siRNA载体,通过基因转染,在EC9706细胞中建立稳定的CEA基因沉默体系(干扰1组及干扰2组),并以空载体转染和未进行转染的EC9706细胞作对照,用H101在体外进行细胞毒性实验。 结果: 在此实验任何病毒浓度下,干扰2组与空载体组和对照组比较,生存率明显下降,有统计学意义(P<0.05);而干扰1组在低病毒浓度(≤1vp/cell)下,与空载体组和对照组比较,生存率下降,有统计学意义(P<0.05),当病毒浓度>1vp/cell时,无统计学意义(P>0.05)。 结论: 提示CEA在H1001感染并杀伤肿瘤细胞过程中可能起一定作用,为进一步从基因水平探讨CEA的作用机制和提高溶瘤腺病毒的治疗效果打下基础。     

CEA慢病毒载体的制备及其在树突状细胞中的表达鉴定

目的 构建人癌胚抗原(CEA)慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达CEA的树突状细胞(DC).方法 以人CEA的测序质粒为模板,PCR扩增CEA全长,装入pLentiGFP转移质粒,经过测序证实其序列与标准序列完全一致.将pLentiGFP-CEA、包装质粒p△8.2和pVSV-G用LipofectamineTM2000共同转染293T细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染树突状细胞,并进行RT-PCR和Western blot检验CEA在细胞中的表达.结果 DC细胞病毒感染48h后荧光显微镜观察CEA慢病毒载体在细胞中高效表达,PCR扩增可得到人CEA的2009 bp基因片段,与预期大小一致,Western blot显示CEA在感染DC中表达.结论 成功构建了CEA慢病毒表达载体,重组慢病毒感染DC细胞后表达出有活性的CEA蛋白,为进一步从分子水平探讨CEA的功能奠定了基础.     

人舌癌Tca8113核外体对树突状细胞诱导CTL杀伤活性的影响

目的:探讨人舌癌Tca8113细胞核外体(exosomes)体外诱导外周血来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)对CTL杀伤活性的影响。方法:抽取健康成人外周血,分离单核细胞,经贴壁获得树突状细胞前体细胞,在体外先后加入GM-CSF、rhIL-4、LPS和/或exosomes诱导培养9d,获得成熟DC;而未贴壁细胞经rhlL-2诱导培养,获得T淋巴细胞。设置舌癌Tca8113组和对照EC9706组,每组再根据效应细胞不同分为A组:Tca8113细胞核外体致敏的DC与T淋巴细胞共培养组;B组:未经致敏DC与T细胞共培养组;C组:单纯T细胞组。结果:A、B、C组效应细胞对Tca8113细胞株的杀伤活性分别为(78.56±2.26)%、(50.34±6.21)%、(26.47±3.52)%。A与B组、A与C组比较差异有统计学意义(P<0.05),A组效应细胞对EC9706杀伤活性为(51.18±5.31)%,与对Tca8113的杀伤活性相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人舌癌Tca8113核外体能增强DC-CTL效应细胞对舌鳞癌Tca8113细胞株特异性的杀伤活性。     

指状青霉诱发大鼠细胞DNA突变效应研究

目的：研究指状青霉（Penicillium digitatum)的致突变效应。方法：采用E.coli ND－160菌株,大鼠肺及肝原代细胞非程序DNA合成（UDS）试验和E.coli K12infA基因突变试验及infA基因序列测定和分析。结果：指状青霉提取物：①可明显地诱发E.coli ND－160菌株回复突变;②可明显诱导大鼠肝原代细胞UDS（P＜0．05）,极显著诱导肺原代细胞UDS（P＜0．01）;③可诱导E.cli K12 infA基因DNA序列中5个碱基位点突变,且其中1个位点的突变还可导致编码相应氨基酸的变异。结论：指状青霉对原核细胞和真核细胞DNA均有明显的致突变性。     

体外震波碎石和中药为主综合排石治疗胆囊结石的疗效观察

采用体外震波碎石和中药为主综合排石治疗胆囊结石患者500例。结石粉碎率达96.8％。1、3、6、12个月的结石消失率分别为31.9％、38.6％、44.1％和59.8％。认为应用震波碎石和中药为主综合排石的方法,充分发挥中药的利胆、理气、健脾和胃、抗菌消炎等调理作用,促进被粉碎的结石排入肠道,提高了临床治疗效果。     

治疗胃病新药ト一ワ散

由日本东和药品公司生产的治疗胃病新药散,于1994年7月上市。组成:1包中含硅酸铝酸镁400mg,碳酸钙200mg,丁香末10mg,桂皮末74.5mg,黄连末50mg,甘草末118mg,碳酸氢钠300mg,淀粉酶100mg,茴香末20mg,生姜末24.5mg,山椒     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结果：成功地将重组野性型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ８６０３中，在ｇｐｔ选择培养基中培养两周后，分离生长出阳性细胞克隆；经ＰＣＲ证实外源性ｐ５３基因在瘤细胞内稳定存在并可随瘤细胞分裂而传给子代；当向培养液中加入１μｍｏｌ／Ｌ地塞松（Ｄｅｘ）后，８ｈ即可用免疫组化方法检测到ｐ５３蛋白的表达并可观察到瘤细胞出现凋亡的一系列形态学改变，转染后的瘤细胞凋亡率高达９０％。结论：当人骨肉瘤细胞株中重组野生型ｐ５３基因诱导过表达时，瘤细胞呈现凋亡，本实验为骨肉瘤的基因治疗提供了理论依据。     

非智力因素的内容与教育方法探讨

非智力因素的内容与教育方法探讨大庆卫生学校（１６３３１２）赵国华赵国强李英霞大庆市卫生局（１６３３１２）陈敏娜王雅珍大庆油田总医院（１６３３１２）赵云灵富娆１非智力因素及教育的内容非智力因素的内容很广泛，大致可分为四部分：其一是个性特征系统，包括气质...