rhIL-10对肿瘤坏死因子-α诱导的血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的 观察重组人白细胞介素-10(rhIL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法 体外培养NIH/3T3细胞,应用rhIL-10与TNF-α共同作用并设立对照进行比较,采用MTS/PES法确定NIH/3T3细胞的增殖状态。应用流式细胞仪测定细胞周期。结果 TNF-α对NIH/3T3细胞增殖具有明显的刺激作用。rhIL-10单独应用对NIH/3T3细胞生长没有影响。在TNF-α刺激下,一定剂量的rhIL-10可抑制NIH/3T3细胞的增殖。rhIL-10可使TNF-α作用下的NIH/3T3细胞大部分处于G₀/G₁期。结论 rhIL-10能明显抑制由TNF-α刺激的成纤维细胞增殖。     

巨噬细胞移动抑制因子经Rho途径促进人肺成纤维细胞Ⅲ型胶原合成

目的:观察重组巨噬细胞移动抑制因子(rMIF)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)的作用,探讨哮喘气道重塑的发生机制。方法:不同浓度的rMIF(25-100μg/L)分别作用于MRC-5细胞48 h,RT-PCR法检测III型胶原mRNA表达,Western blotting检测III型胶原蛋白合成;100μg/L rMIF刺激MRC-5细胞48 h,刺激前0.5 h加入Rho激酶特异性抑制剂Y27632,RT-PCR法检测III型胶原mRNA表达,Western blotting法检测III型胶原蛋白表达。结果:刺激MRC-5细胞48 h,rMIF可呈剂量依赖地诱导III型胶原mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)表达。Y27632预刺激后,显著抑制rMIF100μg/L诱导的III型胶原mRNA和蛋白表达(均P<0.01)。结论:MIF可能通过Rho途径刺激人肺成纤维细胞III型胶原合成,从而在哮喘气道重塑的发病机制中发挥重要作用。     

短期应用利尿剂对正常大鼠尿液水通道蛋白2排泄浓度的影响研究

目的观察短期应用常用利尿剂呋塞米、双氢克尿噻及安体舒通对正常大鼠尿液水通道蛋白-2（aquaporin-2）排泄浓度的影响。方法将30只健康SD大鼠随机分成4组：呋塞米组、安体舒通组、双氢克尿噻组和对照组。观测尿量、及尿渗量变化情况,应用酶联免疫吸附测定法（ELISA法）检测尿液AQP2浓度。结果用药前后比较,各利尿剂组大鼠尿量均显著增多（P〈0.05）,尿液中的AQP2浓度和排泄率均明显增加（P〈0.05）。但呋塞米组尿渗量低于对照组（P〈0.05）,而双氢克尿噻组尿渗量高于对照组（P〈0.05）。结论 3类利尿剂均可显著增加正常大鼠尿液AQP2蛋白的排泄。     

急性冠脉综合征患者高密度脂蛋白亚组分的抗炎、抗氧化功能研究

目的 评估急性冠脉综合征(ACS)患者高密度脂蛋白(HDL)亚组分(HDL2和HDL3)的抗炎、抗氧化功能,明确ACS患者HDL亚组分是否发生了失功能改变.方法 纳入2011年1月-2012年1月在南方医院心内科住院的ACS患者(ACS组)及同期体检的健康者(对照组)各40例.分别检测两组血脂4项、超敏C反应蛋白(hsCRP)、HDL亚组分对氧磷酶-1(PON1)活性、脂氢过氧化物(LOOH)水平及炎症指数.结果 ACS组血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平及hsCRP浓度均较对照组明显升高(P＜0.01).与对照组比较,ACS组HDL亚组分PON1活性均明显下降(P＜0.001),炎症指数及LOOH水平则均较对照组明显升高(P＜0.001);两组HDL3中LOOH水平均较HDL2中LOOH水平明显升高(P＜0.05或P＜0.001);对照组内HDL3炎症指数较HDL2明显升高(P＜0.001),而ACS组HDL2和HDL3炎症指数差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ACS患者HDL亚组分发生失功能改变,其抗氧化能力减弱,具有促炎作用;成熟的HDL2可能较未成熟的HDL3具有更强的抗炎、抗氧化功能,从而能发挥更好的心血管保护作用.     

地塞米松对哮喘小鼠肺组织中TWEAK及其受体Fn14表达的调节作用

目的:探讨地塞米松对哮喘小鼠模型肺组织中肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(TWEAK)及受体成纤维细胞生长因子诱导的早期反应蛋白14 (Fn4)表达的调节作用.方法:采用卵清蛋白致敏方法建立经典哮喘模型.将36只雌性BALB/c小鼠,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组12只.HE染色评估各组小鼠气道炎症程度;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14mRNA表达水平;采用免疫组化方法检测各组肺组织TWEAK、Fn14蛋白表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织TWEAK、Fn14 mRNA水平高于对照组(P＜0.01),地塞米松组TWEAK、Fn14 mRNA水平低于哮喘组(P＜0.01).TWEAK、Fn14蛋白的表达水平哮喘组较对照组明显升高(P＜0.01),地塞米松组表达量较哮喘组明显降低(P＜0.01).结论:地塞米松可抑制哮喘小鼠肺组织中TWEAK及Fn14表达,从而减少气道炎症反应.     

晚期糖基化终产物对心肌细胞p57、p27、p21及hhLIM蛋白表达的影响

目的　探讨晚期糖基化终产物 (advancedglycationendproducts ,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞p5 7、p2 7、p2 1及hhLIM蛋白表达的影响。方法　采用酶消化法体外培养乳鼠心肌细胞 ,实验前换用含 1%胎牛血清的DMEM培养液饥饿培养 2 4h。应用Western蛋白印迹法检测不同浓度AGEs(5 0mg L、10 0mg L)对心肌细胞刺激 12、2 4、4 8h后细胞中p5 7、p2 7、p2 1及hhLIM蛋白表达情况。结果　不同浓度的AGEs刺激心肌细胞 12h均可使p2 7蛋白表达增加 ,以 5 0mg L浓度作用更为明显 ,刺激 2 4、4 8h无影响。AGEs对p5 7蛋白的表达呈动态变化 :刺激 12h时表达下降 ,2 4、4 8h呈增加趋势。p2 1蛋白在心肌细胞表达较弱 ,AGEs对其表达无显著影响。AGEs增加hhLIM蛋白的表达 ,以 5 0mg L浓度作用 12h最为显著。结论　AGEs通过增加心肌细胞细胞周期素依赖性激酶抑制因子p5 7和p2 7蛋白及hhLIM蛋白的表达 ,参与心室重塑的发生和发展。     

血管内皮细胞中ABCA1的表达及其在动脉粥样硬化发生中的意义

目的 以人的血管内皮细胞ECV304为靶点，研究Ox-LDL和8-Br-cAMP对ATP-结合盒转运子Al(ABCAl)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)基因mRNA和蛋白质表达的影响，阐明ABCAI基因在动脉粥样硬化(AS)形成中的可能机制。方法 复苏培养血管内皮细胞，无血清培养基培养静止12h后．分别加入Ox-LDL(30ng／m1)、8-Br-cAMP(0．5mmol／L)刺激3、6、12、24h，设未加刺激同时孵育24h的细胞为阴性对照组，以RT-PCR和Westem蛋白印迹法检测ABCA1、ICAM-1及MCP-1 mRNA和蛋白质表达量。结果 血管内皮细胞ECV304在给予Ox-LDL刺激后，ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平均增高，ICAM-1的高峰时间在12h，其余高峰时间在6h；在8-Br-cAMP的刺激下，ABCAl、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平也增高。高峰时间均在6h。结论 公认的致AS因素Ox-LDL可通过引起血管内皮细胞ECV304中炎性细胞因子ICAM-1、MCP-1 mRNA及蛋白质水平增加，参与AS的形成，同时抗AS基因ABCA1在Ox-LDL刺激下代偿增加，具有AS保护作用。cAMP不仅可增加ABCA1的表达，而且可增加ICAM-1、MCP-1表达。     

冠心病与T细胞增殖反应的相关性

目的研究冠心病斑块稳定性与T细胞增殖反应的关系。方法冠心病患者81例,依据病情分为急性心肌梗死组(AMI组,20例)、不稳定性心绞痛组(UAP组,34例)和稳定性心绞痛组(SAP组,27例),另选非冠心病患者22例作为对照组。测定各组T细胞对植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的增殖反应,C反应蛋白(CRP)对AMI组和UAP组T细胞oxLDL增殖反应的影响。结果AMI组和UAP组T细胞对5μg/ml PHA的增殖反应高于SAP组和对照组(P<0.05),T细胞对5μg/mloxLDL及1μg/ml oxLDL的增殖反应高于SAP组和对照组(P<0.05),T细胞对10μg/ml oxLDL、5μg/mloxLDL、1μg/ml oxLDL的增殖反应均高于对同浓度LDL的增殖反应(P<0.01),10μg/ml CRP使AMI组和UAP组的T细胞对5μg/ml oxLDL的增殖反应升高(P<0.01)。结论T细胞介导的细胞免疫在导致斑块的不稳定中可能起着重要的作用,而CRP可能通过调节对特异性抗原oxLDL的细胞免疫发挥其促炎作用。     

脱氢表雄酮对大鼠增龄过程中动脉一氧化氮信号途径的影响

目的 观察大鼠动脉一氧化氮（NO）信号途径的增龄性变化及脱氢表雄酮（DHEA）的干预作用。方法 实验用Wistar大鼠，分3组：18月龄组；DHEA干预组（18月龄，12月龄时开始在喂养基础饲料中添加DHEA1mg·kg^-1·d^-1）；12月龄组。每组各6只。取胸主动脉，western blot法测一氧化氮合酶（eNOS）蛋白，Griess法测定NO含量，放射免疫法测环磷酸鸟苷（cGMP）含量，比色法测超氧化物歧化酶（SOD）的活性和丙二醛（MDA）含量。结果 18月龄鼠组与12月龄鼠组比较主动脉中（1）eNOS的蛋白表达（0．58±0．07）降低，（2）SOD的活性（（179±20）对（253±25）U·mg pro^-1]降低，MDA含量（（6．89±0．54）对（4．88±0．27）mol／mg pro]升高，（3）NO含量（（3．42±0．68）对（4．80±0．65）nmol／mg pro]和cGMP含量（（8．46±0．46）对（10．00±0．50）pmol／mg pro]降低，均为P〈0．01。给予DHEA干预的18月龄鼠组上述变化均明显改善。结论 随着增龄，大鼠动脉eNOS表达降低，抗氧化功能减弱，血管平滑肌对NO反应性明显减弱，血管发生了老化。DHEA能改善大鼠动脉因增龄引起NO信号途径的变化，延缓血管老化的进展。     

W nt／β-连环蛋白信号通路在诱导气道平滑肌细胞外基质蛋白沉积中的作用

目的探讨Wnt／β‐连环蛋白信号通路在TGF‐β1诱导人气道平滑肌细胞（HASMC）细胞外基质（ECM ）蛋白沉积中的作用。方法将原代培养的 HASMC用于实验。用Western blot的方法来分析蛋白表达量,用实时荧光定量PCR的方法来分析ECM蛋白的基因表达。结果用TGF‐β1刺激体外培养的 HASMC ,可以引起胶原蛋白Ⅰα1（P＜0．01）及ECM 蛋白mRNA （包括胶原蛋白Ⅰα1、纤连蛋白、多功能蛋白聚糖、层粘连蛋白α2及核心蛋白多糖）表达增加（P＜0．01）。TGF‐β1可以引起β‐连环蛋白（P＜0．05）及其mRNA表达显著增加（P＜0．01）。TGF‐β1通过抑制糖原合酶激酶3（GSK3）β活化（P＜0．01）而引起非磷酸化的β‐连环蛋白表达增加（P＜0．01）。此外,用Wnt信号通路药理学抑制剂PKF115‐584可以明显抑制TGF‐β1诱导的胶原蛋白Ⅰα1（P＜0．01）及ECM蛋白（包括胶原蛋白Ⅰα1、纤连蛋白及多功能蛋白聚糖）的基因表达（P＜0．01）。结论 HASMC中Wnt／β‐连环蛋白信号通路的活化,参与了TGF‐β1诱导的ECM蛋白沉积。