人源性大肠癌抗原基因噬菌体表达文库的构建及鉴定

目的构建人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库。方法从人大肠癌组织中提取总RNA,用RT-PCR合成cDNA第1链,用LD-PCR合成cDNA第2链,除去小于500 bp的小片段,与去磷酸化的λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库。转化E.coliXL1-Blue感受态细胞,滴定文库的滴度,确定文库容量大小;用ITPG诱导和X-gal显色测定重组率;用SfiⅠ酶切鉴定插入的cDNA片段大小。结果构建成含2.39×106 pfu/ml重组噬菌体的人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,重组率为97.5%,插入cDNA片段大小范围从600~4 000 bp,平均长约1 400 bp。结论成功构建高质量人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,适合于大批量筛选cDNA克隆的大肠癌相关抗原基因。     

慢性肝病中丙型肝炎病毒感染的研究

检测８４例慢性肝病和２７例其它消化系疾病的血清丙型肝炎抗体（抗ＨＣＶ），慢性肝病中阳性率为２０．２％，其它消化病中阳性率为３．７％，肝硬化（ＬＣ）和原发性肝癌（ＨＣＣ）患者中阳性率分别为２５．９％及２６．１％。在抗ＨＣＶ阳性和阴性慢性肝病患者之间转氨酶及胆红素水平无显著差异；乙肝病毒感染标志（ＨＢＶＭ）在抗ＨＣＶ阳性和阴性组间差异显著。     

TGFα对胃癌细胞周期的作用及tyrphostin 51对TGFα作用的抑制

目的探索TGFα对胃癌细胞周期的促进作用,以及PTK抑制剂对这种作用的抑制效应.方法利用细胞体外培养技术,观察TGFα对胃癌SGC7901细胞的促增殖作用;细胞经G1期同步化后,用流式细胞仪检测TGFα作用不同时间的细胞周期变化,用3H-TdR掺入法检测TGFα对细胞DNA合成的影响;加PTK抑制剂tyrphostin 51 处理后用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 TGFα对SGC7901具有明显的促增殖作用,细胞生长曲线上移;TGFα作用4、6 h后S期细胞和作用8、10 h后G2+M 期细胞均明显增加,作用5 h 后DNA合成也显著高于对照组.tyrphostin 51作用48 h后出现了细胞凋亡.结论 TGFα能够刺激胃癌SGC7901细胞生长,促进其细胞周期进程,而tyrphostin 51通过抑制TGFα受体的PTK活性,使细胞发生凋亡.     

大肠良恶性肿瘤患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ的检测

肿瘤坏死因子α(TNF-α)由巨噬细胞分泌,具有多种生物学活性,其种种活性的发挥有赖于细胞膜肿瘤坏死因子受体(TNFR)的介导.近年的研究证实正常人血清,尿液及肿瘤细胞培养上清中存在着可溶性的肿瘤坏死因子受体(sTN-FR).sTNFR有和sTNFRⅠsTNFRⅡ两种,分别来源于TNFRp55和TNFR p75的膜外段,并保持与TNF-α结合特性,在体内具有重要的生物学意义.尤其是在某些病理状态下,STN-FR水平可异常升高,卯慢性肾衰,实体瘤,慢性淋巴细胞白血病以及爱滋病患者等等.本文利用针对sTNFR Ⅰ不同位点的两种单抗建立了双单抗夹心ELISA,检测了66例正常成人及56例大肠良、恶性肿瘤患者血清sTNFRⅠ水平,结果显示正常成人血清sTNFR Ⅰ浓度为51.64±26.67U/ml,该浓度与年龄、性别无明显关系.56例病人经病理诊断9例为良性腺瘤和息肉等,其STNFRⅠ为57.36±56.23U/ml,与正常对照无显著差异.47例大肠癌患者按Dukes分期,A、B期病人     

幽门螺杆菌抗菌肽对消化道致病菌的杀伤作用

幽门螺杆菌 (Ｈｐ)可产生杀菌肽样抗菌多肽 (ｃｅｃｒｏｐｉｎ ｌｉｋｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｅｐ ｔｉｄｅ ,Ｈｐ ＣＡＢＰ)。这种来源于Ｈｐ核糖体蛋白Ｌ1(ｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ1,ｒｐＬ1)的Ｎ 端肽 ,在结构与功能的许多方面与杀菌肽 (Ｃｅｃｒｏｐｉｎｓ)相似。我们通过研究Ｈｐ源杀菌肽样抗菌肽Ｈｐ( 2 2 0 )对消化道常见致病菌的杀伤作用 ,探讨Ｈｐ产生抗菌肽的临床及流行病学意义。Ｈｐ( 2 2 0 )按ＨｐＲｐＬ1Ｎ 端第 2至第2 0位多肽序列人工合成。采用琼脂扩散法检测Ｈｐ( 2 2 0 )对消化道常见致病菌的抗菌…     

双歧杆菌对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜内细胞因子表达和NF-κB激活的影响

目的　建立小鼠溃疡性结肠炎 (UC)动物模型 ;应用双歧杆菌活制剂 ,观察其对UC发生、发展的影响 ,并检测其对TNF α、IL 1β的表达和NF κB活性的影响。方法　用 5%葡聚糖硫酸钠(DSS)口饲法制备小鼠UC模型 ;给小鼠口服双歧杆菌 (Bifidobacterium ,Bf)活菌 ,观察UC的症状和组织学变化 ;采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测UC小鼠肠黏膜内TNF α、IL 1β的表达水平进行半定量测定 ;应用免疫电泳迁移率改变分析 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)法检测UC小鼠肠黏膜细胞NF κB的激活。结果　应用双歧杆菌制剂后 ,UC的症状、组织损害均较模型组明显减轻。同时TNF α、IL 1β的表达较单纯模型组降低 (P <0 .0 5) ,NF κB的核结合活性也降低 ,但较正常对照组仍明显增加。结论　生态制剂Bf对UC的发生有预防作用 ,可能是通过抑制NF κB的核结合活性 ,进而降低致炎细胞因子的表达完成的     

幽门螺杆菌感染患者胃黏膜组织学炎症评价依据及诊断标准的探讨

目的 探讨幽门螺杆菌（Hp)相关性胃黏膜炎症的病变特征及炎症程度的组织学评价标准。方法 2134例胃活检组织学病理检查病例,包括胃窦、胃体、胃角取材。Hp检测按快速尿素酶试验及组织学甲杠胺蓝或免疫组化染色,HE组织学切片染色用于组织炎症及炎症活动度的评价。结果Hp感染主要引起胃黏膜上皮细胞的病变,正常胃黏膜腺上皮内无炎细胞浸润,重度炎症有上皮层炎细胞的聚集破坏。黏膜炎症分级反映了Hp感染状况且不受活检部位、组织取材标本小、包埋切片方向的影响。在Hp感染阳性组,重度活动性炎症者占39．6％,而在阴性组仅为0．4％,二者差异有显著意义。Hp胃黏膜定植量与黏膜炎症程度有明显的相关性。结论 本研究提出的胃黏膜炎症分级方法十分简便,标准容易掌握,反映了Hp的定植情况及其致病的生物学特性。     

大鼠肝细胞的大量分离方法

我们建立了大量分离肝细胞的一种新方法。以该方法分离肝细胞,其数量与活率显著高于直接法和 Seglen 灌流法,且具有流程短,操作简便,胶原酶用量少,不需要特殊设备等优点。     

分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路在抑制血管内皮细胞生长因子诱导肝癌转移的实验研究

目的　研究血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)诱导肝癌转移时 p38分裂原激活蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase,MAPK)信号传导通路的作用。 方法　运用Bodyenchamber膜侵袭培养系统 ,应用 p38MAPK信号传导通路特异性阻断剂SB 2 0 35 80 ,观察其对VEGF诱导肝癌细胞转移抑制作用。结果　 5ng/mlVEGF培养 5h ,向下室浸润肝癌细胞数为 16×10 4 /ml,高于对照组 1.2 5× 10 4 /ml,P <0 .0 1。预先用 5 μMSB 2 0 35 80 ,可阻断 95 %VEGF诱导肝癌转移能力。结论　VEGF通过 p38MAPK信号传导通路诱导肝癌细胞转移 ,阻断p38MAPK信号传导通路 ,可抑制VEGF诱导的肝癌细胞转移。     

TGFa对胃癌细胞周期的促进作用

目的：探索TGFa对胃癌细胞周期的促进作用，为进一步从多个环节阻断其白分泌、旁分泌环路及胞内信号传导通路奠定基础。方法：利用细胞体外培养技术，观察TGFa对胃癌SGC7901细胞的促增殖作用；细胞经C1期同步化后．用流式细胞仪检测TGFa作用不同时间的细胞周期变化，用^3H-TdR接入法检测TGFa对细胞DNA合成的影响。结果：TGFa对胃癌SGC7901具有明显的促增殖作用．细胞生长曲线上移；TGFa作用4．6h的S期细胞和作用8、10h的G2^ M期细胞均明显增加；作用5h的DNA合成也显高于对照组。结论：TGFa能够刺激胃癌SGC7901细胞生长，明显促进其细胞周期进程，