乳猪肝细胞的聚集培养术

目的　建立乳猪肝细胞与非实质细胞大量聚集培养技术。探讨获取大量高活性乳猪肝细胞的培养方法。方法　采用磁力悬浮培养技术和装置进行聚集培养。观察聚集体的形态 ,受损伤程度和白蛋白分泌功能 ,氨转化功能。结果　一次培养肝细胞数可达 2× 10 10 ～ 5× 10 10 个 ,聚集体肝细胞结构完整 ,相互之间形成胆管样结构等肝组织特异结构 ,保持良好生物活性。结论　聚集培养技术将细胞接种浓度提高 5倍 ,一次可制备足够数量的肝细胞 ,较好地满足构建杂合型人工肝时对生物材料的要求     

溃疡性结肠炎小鼠模型肠粘膜中细胞因子的表达和核转录因子κB的激活

目的:建立小鼠溃疡性结肠炎动物模型并检测其肠粘膜中致炎细胞因子TNF-α、IL-1β的表达和NF-κB的激活。方法用5%葡聚糖硫酸钠(DSS)口饲法制备小鼠UC模型;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对UC小鼠肠粘膜中TNF-α、IL-1β的表达水平进行半定量测定;应用免疫电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测急性期和慢性期UC小鼠肠粘膜细胞NF-κB的激活。结果模型组肠粘膜中TNF-α、IL-1β的表达较正常对照组显著增加(P=0.009),NF-κB 的核内结合活性也显著增强。结论UC 的发生、发展过程伴随致炎细胞因子表达的升高,可以加剧炎症,致上皮细胞凋亡。该过程可能受NF-κB激活的调控。     

柞蚕抗菌肽对大鼠大肠癌的防治作用

目的观察柞蚕抗菌肽体外抗肿瘤作用及对大鼠大肠肿瘤发生的影响。方法采用MTT法检测柞蚕抗菌肽对人结肠癌细胞株LS-174T、人胃粘膜上皮细胞株GES-1的杀伤作用。以二甲肼(DMH)诱发的Wistar大鼠大肠肿瘤为模型,观察柞蚕抗菌肽对大鼠大肠肿瘤的防治作用;DMH诱癌及柞蚕抗菌肽灌胃均18周,第33周结束实验。结果柞蚕抗菌肽在体外对人结肠癌细胞株具有选择性杀伤作用;灌胃可明显降低大鼠大肠肿瘤发生率(65%,P<0.01),但大肠癌平均个数及肿瘤质量指数无显著性差异(P>0.05)。结论柞蚕抗菌肽对DMH诱导的大鼠大肠癌具有预防作用。     

线粒体DNA变异在大肠癌发病中的作用与机制研究

目前认为肿瘤的生物学特征不仅取决于核内遗传物质，而且与核外线粒体DNA的改变也可能有重要的关系。为研究线粒体DNA的变异在大肠癌发病中的作用与机制，本文对4株大肠癌细胞系和1株原代培养的正常肠上皮细胞的线粒体DNA的D-环区进行了对比研究。     

消化道息肉内镜治疗方法及疗效观察

消化道息肉是消化道黏膜层局部隆起性病变,可发生于食管、胃、小肠及结肠。随着内镜技术的发展和普及,消化道息肉的检出率在逐步提高,息肉的临床意义在于出血或可能癌变,因此积极治疗息肉对降低消化道癌症的发病率有重要的意义,目前内镜下治疗已成为消化道息肉治疗的首选方法。根据息肉的部位、大小、     

人源性大肠癌抗原基因噬菌体表达文库的构建及鉴定

目的构建人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库。方法从人大肠癌组织中提取总RNA,用RT-PCR合成cDNA第1链,用LD-PCR合成cDNA第2链,除去小于500 bp的小片段,与去磷酸化的λTriplEx2噬菌体左、右臂连接,体外包装,构建成cDNA噬菌体表达文库。转化E.coliXL1-Blue感受态细胞,滴定文库的滴度,确定文库容量大小;用ITPG诱导和X-gal显色测定重组率;用SfiⅠ酶切鉴定插入的cDNA片段大小。结果构建成含2.39×106 pfu/ml重组噬菌体的人大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,重组率为97.5%,插入cDNA片段大小范围从600~4 000 bp,平均长约1 400 bp。结论成功构建高质量人源性大肠癌抗原基因cDNA噬菌体表达文库,适合于大批量筛选cDNA克隆的大肠癌相关抗原基因。     

慢性肝病中丙型肝炎病毒感染的研究

检测８４例慢性肝病和２７例其它消化系疾病的血清丙型肝炎抗体（抗ＨＣＶ），慢性肝病中阳性率为２０．２％，其它消化病中阳性率为３．７％，肝硬化（ＬＣ）和原发性肝癌（ＨＣＣ）患者中阳性率分别为２５．９％及２６．１％。在抗ＨＣＶ阳性和阴性慢性肝病患者之间转氨酶及胆红素水平无显著差异；乙肝病毒感染标志（ＨＢＶＭ）在抗ＨＣＶ阳性和阴性组间差异显著。     

TGFα对胃癌细胞周期的作用及tyrphostin 51对TGFα作用的抑制

目的探索TGFα对胃癌细胞周期的促进作用,以及PTK抑制剂对这种作用的抑制效应.方法利用细胞体外培养技术,观察TGFα对胃癌SGC7901细胞的促增殖作用;细胞经G1期同步化后,用流式细胞仪检测TGFα作用不同时间的细胞周期变化,用3H-TdR掺入法检测TGFα对细胞DNA合成的影响;加PTK抑制剂tyrphostin 51 处理后用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 TGFα对SGC7901具有明显的促增殖作用,细胞生长曲线上移;TGFα作用4、6 h后S期细胞和作用8、10 h后G2+M 期细胞均明显增加,作用5 h 后DNA合成也显著高于对照组.tyrphostin 51作用48 h后出现了细胞凋亡.结论 TGFα能够刺激胃癌SGC7901细胞生长,促进其细胞周期进程,而tyrphostin 51通过抑制TGFα受体的PTK活性,使细胞发生凋亡.     

大肠良恶性肿瘤患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅰ的检测

肿瘤坏死因子α(TNF-α)由巨噬细胞分泌,具有多种生物学活性,其种种活性的发挥有赖于细胞膜肿瘤坏死因子受体(TNFR)的介导.近年的研究证实正常人血清,尿液及肿瘤细胞培养上清中存在着可溶性的肿瘤坏死因子受体(sTN-FR).sTNFR有和sTNFRⅠsTNFRⅡ两种,分别来源于TNFRp55和TNFR p75的膜外段,并保持与TNF-α结合特性,在体内具有重要的生物学意义.尤其是在某些病理状态下,STN-FR水平可异常升高,卯慢性肾衰,实体瘤,慢性淋巴细胞白血病以及爱滋病患者等等.本文利用针对sTNFR Ⅰ不同位点的两种单抗建立了双单抗夹心ELISA,检测了66例正常成人及56例大肠良、恶性肿瘤患者血清sTNFRⅠ水平,结果显示正常成人血清sTNFR Ⅰ浓度为51.64±26.67U/ml,该浓度与年龄、性别无明显关系.56例病人经病理诊断9例为良性腺瘤和息肉等,其STNFRⅠ为57.36±56.23U/ml,与正常对照无显著差异.47例大肠癌患者按Dukes分期,A、B期病人     

大鼠肝细胞的大量分离方法

我们建立了大量分离肝细胞的一种新方法。以该方法分离肝细胞,其数量与活率显著高于直接法和 Seglen 灌流法,且具有流程短,操作简便,胶原酶用量少,不需要特殊设备等优点。