颗粒酶B的表达纯化和鉴定

目的：克隆颗粒酶B(GraB)，构建GraB的原核表达载体，从而建立其原核表达体系，获得高效表达的重组GraB。方法：抽提人外周血淋巴细胞总RNA,进行RT-PCR克隆GraB cDNA，构建GraB原核表达载体，用限制性酶切和DNA测序进行鉴定；异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷（IPTG）诱导表达，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析表达产物。表达产物亲和层析纯化并用免疫印迹法鉴定，以GraB底物测定其活性。结果：表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中，具有良好的抗原性和特异性，并能作用于GraB特异性底物。结论：建立了GraB原核表达系统。     

双歧杆菌纯化粘附素对艰难梭菌粘附肠上皮细胞的竞争抑制作用

艰难梭菌对肠上皮细胞的粘附是其定植和感染的前提。以往的研究多集中于肠道正常菌群如双歧杆菌拮抗肠道致病菌粘附肠上皮细胞的研究，但由于活菌的制造和保存难度较大而使其应用受到一定程度的限制。本研究应用双歧杆菌纯化粘附素，采用粘附试验和流式细胞仪体外观察其对艰难梭菌粘附肠上皮Lovo细胞的竞争抑制作用。     

结肠用美沙拉秦壳聚糖胶囊的体外释药研究

 目的制备美沙拉秦(5-氨基水杨酸，5-ASA)结肠靶向给药胶囊，并评价其体外释药性能。方法将5-ASA装于壳聚糖胶囊中，再以邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)包裹胶囊，以紫外分光光度法测定其在pH1.2盐酸溶液及pH6.8磷酸缓冲液中的体外释放性能。将荧光素钠(FS)作为模型化合物在相同条件下进行实验，以激发波长470 nm，发射波长513 nm荧光检测其在模拟大肠液中的体外释放性能。用扫描电镜法评价壳聚糖胶囊在模拟大肠液中的降解作用。结果 载药壳聚糖胶囊在pH1.2盐酸溶液及pH6.8磷酸缓冲液中药物累积释放量6 h内不大于10%，而在模拟大肠液中，4 h释药基本完全。电镜扫描表明，在盲肠内容物中壳聚糖具有明显降解作用。结论 用HPMCP包膜的壳聚糖胶囊具有潜在的结肠靶向释药效果。     

血管内皮细胞生长因子对肝癌细胞同质性粘附能力的影响

目的研究血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth     

树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫抑制骨肉瘤术后复发和转移

树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ　ｃｅｌｌ,ＤＣ）在启动抗肿瘤免疫中起关键作用。初步临床实验显示,肿瘤抗原激活的ＤＣ在黑色素瘤患者中能诱导出有效的抗肿瘤免疫［１］。我们以体外经骨肉瘤细胞肿瘤抗原粗提物激活并经粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和白介素４（ＩＬ－４）联合刺激的骨肉瘤保肢术后患者外周血ＤＣ回输骨肉瘤患者,探讨ＤＣ在骨肉瘤患者体内诱导的抗肿瘤免疫能否抑制骨肉瘤复发和转移。１ 材料与方法１．１ 对象及材料 １９９６年１０月至１９９８年１２月病理确诊的ＥｎｎｅｋｉｎｇⅡＡ至Ｃ期骨肉瘤患者…     

银染PCR-SSCP方法检测大肠癌组织线粒体DNA的突变

目的: 研究大肠癌组织线粒体DNA的突变情况. 方法: 用银染PCR-SSCP技术结合测序的方法检测40例大肠癌组织及其癌旁正常组织的线粒体DNA D-环区的点突变情况. 结果: 40例大肠癌组织中检测到7例点突变改变,突变率为18%(7/40),在检测的9个突变位点,3个突变位点存在于Dukes D期的1例大肠癌中,其他6个突变位点分别存在于Dukes C期的6例大肠癌组织中,其中498位C→ T, 16298位C→T两个突变位点在检测到点突变的7例大肠癌组织中均检测到. 结论:大肠癌组织线粒体DNA D-环区存在一定程度的点突变,突变的发生可能与大肠癌的易感性和恶性程度有一定相关性, 但是否是大肠癌的发病机制尚有待进一步研究.     

TAE术前后外周血肝癌播散细胞的变化及随访观察

目的研究原发性肝癌患者 TAE 术前后外周血中微转移变化情况,并评价 AFP mRNA 的预后诊断价值。方法应用巢式 RT-PCR 方法,检测32例肝癌患者 TAE 术前后外周血中 AFP mRNA 的表达,并对其预后进行随访观察。结果 32例 TAE 患者术前 AFP mRNA 阳性21例,阳性率为65.6％;术后 AFP mRNA 阳性23例,阳性率为71.9％。其中21例术前阳性者依然全部阳性,未发现有转阴性;11例阴性患者中有2例转为阳性。随访观察发现 AFP mRNA 阳性患者肝内、肝外转移发生率和 AFP mRNA 阴性患者差异显著(p<0.01)。结论 TAE 可能促使原发性肝癌发生血道播散。检测肝癌患者外周血中的 AFP mRNA,是一种灵敏预后诊断方法。     

逆转录病毒载体LN．ALBTRS．TK体外靶向表达研究

逆转录HSV—TK载体用于肝癌的转基因治疗已在动物实验证明有良好效果．但目前尚无满意的靶向表达载体可供使用,本研究采用PCR、Southern blot及Northern blot等方法．对本室构建的逆转录载体LN．ALBTRS．TK在体外对多种靶细胞进行转染和表达的检测．结果表明：LN．ALBTRS．TK能转染多种肿瘤细胞．包括肝癌细胞及非肝癌细胞．并在表达白蛋白的肝癌细胞中可检测到mRNA的转录和HSV—TK的表达产物,而在不表达白蛋白的非肝癌细胞中无HSV—TK的mRNA转录和HSV—TK的蛋白产物表达。这一结果表明：LN．ALBTRS．TK逆转录载体能正确的在期望的细胞中靶向表达．具备一定的组织特异性。     

姜黄素和儿茶素联用对二甲基肼诱导的大鼠大肠癌变过程中环氧合酶2表达的影响

目的 探讨姜黄素和儿茶素联用对二甲基肼(DMH)诱导的大鼠大肠隐窝异常病灶(aberrantcryptfoci,ACF)的数量及其对大鼠大肠组织环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响。方法 利用DMH诱导大鼠大肠癌模型,研究姜黄素、儿茶素单独及联合应用对诱癌初期大鼠大肠ACF数量和对大鼠大肠癌发生的影响。同时应用RT-PCR方法检测了姜黄素和儿茶素对大鼠大肠癌变早期肠粘膜和癌瘤形成后肿瘤组织COX-2mRNA表达的影响。结果 与阳性对照组相比,姜黄素和儿茶素和两者联用均可以显著抑制DMH诱导的大鼠ACF的数量和大鼠大肠癌的发生,两者联用的抑制作用明显高于两药单独应用。DMH可以诱导大鼠大肠组织COX-2mRNA的表达。姜黄素和儿茶素联用对抑制诱癌早期大鼠肠粘膜COX-2mRNA的表达有协同作用,但对大肠癌形成后肿瘤组织COX-2mRNA的表达无明显抑制作用。结论 姜黄素和儿茶素联合应用对抑制DMH诱导的大鼠大肠癌的形成有协同作用,这种作用可能主要是通过抑制诱癌早期ACF的数量和COX-2mRNA的表达实现的。     

放大内镜及实体显微镜对结肠肿瘤性病变检查的意义

目的 探讨如何通过放大内镜和实体显微镜观察分析大肠息肉腺管开口类型,从而发现早期大肠癌及癌前病变。方法 2001年8月-2002年2月结肠镜检查139例大肠病变。采用内镜下黏膜染色技术,结合放大内镜、实体显微镜观察腺管开口分型(pit pattem)并与病理诊断对照。结果 139例患者中发现大肠息肉124例,进展期癌9例,LST型病变5例。5例LST的直径为10-50mm,其中ⅢL型1个,Ⅳ型4个。本组采用放大内镜与病理、实体显微镜诊断的符合率高。结论 大肠腺管开口对于判断肿瘤性、非肿瘤性病变以及早期大肠癌具有重要意义,如发现有V型腺管开口则高度提示早期癌的可能。