γ-干扰素诱导蛋白-10 mRNA检测试验对不同年龄人群结核病的辅助诊断价值

目的:探讨γ-干扰素诱导蛋白-10(interferon gamma-induced protein 10,IP-10) mRNA检测技术对不同年龄组结核病患者的辅助诊断价值。方法:前瞻性纳入2018年3月至2022年7月在首都医科大学附属北京胸科医院、河南省传染病医院和深圳市第三人民医院收治、且完成IP-10 mRNA检测的疑似结核病患者1590例。剔除诊断不明确200例,共1390例纳入分析。根据诊断结果分为确诊结核病组(475例)、临床诊断结核病组(518例)、非结核病组(397例)。按照年龄将入组患者分为中青年组(18～59岁)1062例和老年组(60～95岁)328例。在不同年龄组中,以临床诊断结果为标准,分析IP-10 mRNA检测对结核病的诊断效能。结果:中青年组IP-10 mRNA检测的敏感度和特异度分别为90.2%(721/799,95%CI:87.9%～92.1%)和68.8%(170/247, 95%CI:62.6%～74.4%),老年组IP-10 mRNA检测的敏感度和特异度分别为87.8%(159/181,95%CI:82.0%～92.0%)和54.7%(76...     

活动性肺结核患者外周血CD4+ T淋巴细胞的label-free蛋白组学初步分析

目的 应用非标记label-free蛋白质组学方法筛选出活动性肺结核患者外周血CD4⁺ T淋巴细胞差异表达蛋白质,为阐明结核病的发病机制和早期诊断提供理论依据。方法 收集分离9例活动性肺结核患者和9例健康人外周血CD4⁺ T淋巴细胞,应用label-free非标记蛋白组学<方法检测外周血CD4⁺ T淋巴细胞蛋白质谱,筛选出差异表达蛋白质。并用基因本体论（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）生物信息学分析软件对差异表达蛋白质进行分析。结果 活动性肺结核与健康人外周血CD4⁺ T淋巴细胞中的蛋白质组分布的基本框架很相似,但可发现二者之间有38个明显差异表达的蛋白点,其中有26种蛋白质在肺结核组中表达上调（差异倍数>1.5,P<0.05）,12种蛋白质在肺结核组中表达下调（差异倍数<0.67,P<0.05）。GO分析结果表明,大部分的差异蛋白质主要定位于胞内区域,结核感染相关差异蛋白质功能体现在结合、调控以及代谢过程中。KEGG分析表明,磷酸戊糖途径、cGMP/PKG信号通路、磷脂酰肌醇信号系统等与结核分枝杆菌感染密切相关。结论 对活动性肺结核患者外周血CD4⁺ T淋巴的比较蛋白质组学研究一共鉴定出38种差异蛋白质,他们可能在肺结核发病过程中起着重要作用,也可能可做为诊断结核病的潜在生物学标志物。     

miR99a-5-p在结核分枝杆菌感染宿主巨噬细胞中的免疫调控作用

目的:初步探讨结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)感染THP-1细胞内特异miRNA在宿主抗结核免疫中的作用。方法:提取MTB感染及未感染THP-1细胞RNA,基于Illumina NovaSeq6000二代测序平台检测THP-1细胞内miRNA表达谱。采集4名健康受试者6 ml外周血并分离人原代巨噬细胞。应用实时荧光PCR(qRT-PCR)技术验证MTB感染THP-1细胞内特异miRNA并检测人原代巨噬细胞中靶标miRNA的表达水平。构建miRNA过表达载体,经慢病毒转染THP-1巨噬细胞获得稳定的过表达细胞株,使用qRT-PCR检测H37Rv感染的miRNA过表达细胞及对照空载体细胞中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)及γ-干扰素(IFN-γ)表达水平。结果:从16个二代测序结果表达差异明显的miRNA分子中选取既往未作研究且差异最为明显的miR-99a-5p(P=0.021)作为研究靶基因。通过qRT-PCR在THP-1细胞及原代巨噬细胞中验证,发现miR-99a-5p在THP-1感染组和原代巨噬细胞内的表达量(分别为0.482±0.148和...     

结核分枝杆菌Rpf-DNA疫苗对Mtb感染小鼠免疫保护作用的研究

目的 评价Mtb复苏因子DNA疫苗（resuscitation-promoting factor DNA,Rpf-DNA）对Mtb感染宿主的免疫保护作用。 方法 构建复苏因子D(Rpf D-DNA)和复苏因子E(Rpf E-DNA)质粒疫苗,180只BALB/c小鼠（4周龄）分为6组,每组30只,分别用空质粒、Rpf D-DNA质粒、Rpf E-DNA质粒、BCG、生理盐水免疫,H37Rv标准株气溶胶感染。检测血清复苏因子（Rpf）抗体、IFN-γ;RpfD、E刺激淋巴细胞后进行淋巴细胞增殖、细胞杀伤实验;检测细胞上清IFN-γ、IL-12、IL-2;对肺组织进行病理学检测和细菌负荷（CFU）计数。 结果 （1）疫苗免疫组血清Rpf D、Rpf E抗体水平：Rpf D组0.32±0.1,Rpf E组0.39±0.1,BCG组0.02±0.01,空质粒组0.01±0.0,生理盐水组0.09±0.04,空白对照组0.03±0.01,RpfD组与RpfE组抗体水平与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D：45.6,43.2,45.1,45.7;Rpf E：51.6,53.6,51.0,52.2;P值均<0.01。血清IFN-γ：Rpf D组（43.9±24.8）pg/ml,Rpf E组（45.9±21.0）pg/ml,BCG组（21.0±11.0）pg/ml,空质粒组（7.9±4.9）pg/ml,生理盐水组（4.7±2.1）pg/ml,空白对照组（5.8±4.7）pg/ml,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组比较差异有统计学意义（F值分别为Rpf D：10.2;Rpf E：12.4;P值均<0.05）, 与空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有显著统计学意义,F值分别为Rpf D：15.6,17.8,17.3;Rpf E：17.5,21.1,20.7;P值均<0.01。（2）淋巴细胞增殖实验CCK-8：Rpf D组176.0±4.2,Rpf E组183.0±4.3,BCG组101.0±1.1,空质粒组100.0±6.8,生理盐水组104.0±8.4,空白对照组116.0±2.2,RpfD、RpfE质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：9.5,10.1,10.0,9.0;Rpf E：11.2,12.9,11.7,10.3;P值均<0.05。细胞杀伤实验：Rpf D组32.0±3.2,Rpf E组30.0±4.2,BCG组16.0±5.9,空质粒组3.3±1.5,生理盐水组6.7±0.5,空白对照组7.3±3.5,Rpf D、Rpf E质粒组与BCG组、空质粒组、生理盐水组、空白对照组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：8.8,14.5,13.7,11.9;Rpf E：8.1,12.5,11.6,11.1;P值均<0.05。（3）Rpf D、Rpf E蛋白各自刺激淋巴细胞后上清细胞因子检测：IL-2：Rpf D组9.5±2.4,Rpf E组9.2±1.2,BCG组2.4±2.1,空质粒组1.2±0.3,生理盐水组1.8±1.0,空白对照组1.5±0.7,Rpf D、Rpf E质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：12.5,14.6,13.5,13.9;Rpf E：12.0,13.6,13.1,13.2;P值均<0.05。IFN-γ：Rpf D组22.2±5.7,Rpf E组28.7±14.4,BCG组16.1±10.1,空质粒组9.8±1.6,生理盐水组13.2±2.1,空白对照组15.7±2.9,RpfD、RpfE质粒组与其他各组比较差异有统计学意义,F值分别为Rpf D：7.8,12.6,8.7,8.3;Rpf E：11.3,16.4,14.7,14.2;P值均<0.05。 结论 实验表明复苏因子疫苗能诱导Mtb感染小鼠产生体液免疫和细胞免疫,有希望成为结核病候选疫苗之一。     

结核感染T细胞酶联免疫斑点试验与结核抗体检测在骨关节结核辅助诊断中的价值

目的 探讨与评价结核感染T细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)与结核抗体检测在骨关节结核中的辅助诊断价值.方法 将2011年7月至2013年10月在北京胸科医院骨科住院并手术诊治的骨关节疾病患者156例,经细菌学和组织病理学确诊后分为骨关节结核患者92例和非结核骨关节疾病患者64例,对所有患者应用T-SPOT.TB试剂盒检测结核分枝杆菌特异性抗原早期分泌抗原靶-6(ESAT-6)和培养滤液蛋白-10 (CFP-10)刺激后外周血中分泌γ干扰素的特异性T细胞的数量,同时对两组患者行血清结核分枝杆菌特异性抗体检测.采用SPSS 17.0进行统计学分析,x2检验比较两种检测方法诊断骨关节结核的敏感度和特异度,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 T-SPOT.TB检测在诊断骨关节结核中的敏感度为93.5％ (86/92),特异度为78.1％(50/60);结核抗体检测的敏感度、特异度分别为64.1％(59/92)、81.3％(52/64).T-SPOT.TB检测的敏感度高于结核抗体检测(x2=23.72,P＜0.01).结论 T-SPOT.TB检测方法在辅助骨关节结核快速诊断方面具有重要的应用价值.     

VEGF-D在非小细胞肺癌中的表达与淋巴结转移关系的研究

目的:对VEGF-D在NSCLC肺癌组织及淋巴结组织中的表达进行研究,探讨VEGF-D在NSCLC淋巴管生成和淋巴结早期转移中的作用。方法:收集非小细胞肺癌患者术后肺组织标本52例,采用半定量RT-PCR的方法对NSCLC肺癌组织中及淋巴结组织中的VEGF-D mRNA的表达进行检测。结果:(1)VEGF-D mRNA在淋巴结转移阳性组的阳性淋巴结组织中的表达水平较淋巴结转移阴性组中阴性淋巴结中的表达水平降低(P<0.05)。(2)在淋巴结转移阳性组中VEGF-D mRNA在阳性淋巴结与阴性淋巴结中的表达水平无显著区别(P>0.05)。结论:VEGF-D mRNA的表达水平与肺癌淋巴结转移有显著的相关性,在预测肺癌的淋巴结转移,完善分子分期,指导临床治疗上有重要意义。