复苏因子E-DNA疫苗对BALB/C小鼠免疫效应的研究

目的:探索复苏因子E(RpfE)-DNA疫苗的小鼠免疫效果.方法:利用真核表达栽体PCDNA3.1构建PCDNA3.1-RpfE重组质粒.将SPF级BALB/C小鼠随机分为5组,即空质粒组、RpfE质粒组、BCG组、生理盐水组、空白对照组,于0、3、6周先后3次免疫小鼠,在第3次免疫后3周,心脏取血ELISA方法检测血清RpfE IgG抗体效价、干扰素γ(IFNγ)水平;并行脾淋巴细胞培养,以RpfE蛋白刺激淋巴细胞,CCK-8法检测淋巴细胞增殖指数、ELISA方法检测上清诱导IFNγ和白介素12(IL-12)产生水平,乳酸脱氢酶试验检测小鼠脾细胞毒性T淋巴(CTL)杀伤效应.结果:(1)RpfE质粒组小鼠血清中RpfE抗体水平明显高于其他各组(P<0.001);RpfE质粒组IFNγ水平明显高于空质粒组、生理盐水组、空白对照组和BCG组(P<0101或P<0.05).(2)RpfE质粒组具有较强的刺激淋巴细胞增殖作用,CCK-8实验表明其增殖指数高于其他各组(P<0.05);上清ELISA检测表明IFNγ和IL-12产生水平也高于其他各组(P<0.05).(3)RpfE质粒组脾淋巴细胞特异性CTL杀伤性与其他各组比较有统计学意义(P<0.05).结论:RpfE-DNA疫苗可诱导小鼠的免疫应答,具有良好的体液和细胞免疫原性.     

酶联免疫斑点检测斑点形成细胞在结核潜伏感染诊断中的价值

=0.003).结论 ESAT-6-ELISPOT与结核菌素试验比较,ESAT-6/CFP-10融合蛋白-ELISPOT有可能根据SFC的数量来鉴别结核潜伏感染和活动性结核病,成为诊断结核潜伏感染的更加准确的方法.     

肺癌组织中抗氧化酶及氧化代谢物变化的定量分析

背景与目的 抗氧化酶与肿瘤的关系逐渐受到重视.通过对113例原发性肺癌患者手术切除肿瘤组织和肿瘤远端正常肺组织的抗氧化酶和氧化代谢物及SOD mRNA及其蛋白表达量的测定,观察肺癌组织氧化/抗氧化状态的特点,为补充或完善肺癌发生和发展机制提供一定的依据.方法 应用比色法测定肺癌组织抗氧化酶活性和氧化代谢物[包括:总超氧化物歧化酶(TSOD) (包括MnSOD和CuZnSOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)]的含量,采用半定量PCR和Western Blot法测定患者组织中MnSOD和CuZnSOD的mRNA和蛋白表达量.结果 ①与肿瘤远端正常肺组织相比,肺癌组织中的TSOD、CuZnSOD、GPx活性增高,H2O2、MDA降低(P＜0.05或P＜0.01);②肺腺癌组织中的氧化代谢物H2O2、MDA高于肺鳞癌组织(P＜0.05或P＜0.01);③与肿瘤远端正常肺组织相比,肺癌组织中MnSOD mRNA和蛋白表达量降低,CuZnSOD mRNA和蛋白表达量增高(P＜0.01).结论 肺癌组织存在着氧化/抗氧化失衡.SOD的异常表达水平均出现细胞异常生长,提示氧化/抗氧化失衡与肺癌的发生和发展存在一定的关系.     

结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR检测体系的建立和应用

目的 建立结核分枝杆菌IS6110和IS1081微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测体系,并用于不同类型临床样本的检测.方法 常规提取13株结核分枝杆菌和14株非结核分枝杆菌临床分离株DNA,9例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和4例其他肺部疾病患者痰DNA,12例结核分枝杆菌阳性肺结核患者和7例健康者血浆DNA.设计合成IS6110和IS1081扩增引物和检测探针,建立ddPCR检测体系.应用该体系检测分枝杆菌、痰和血浆3种DNA样本中靶标拷贝数,进行统计学分析.结果 建立了能同时检测IS6110和IS1081的ddPCR体系,该体系检测2个靶标的线性范围分别为0.5～8 733和0.2～2 893拷贝/μl反应体系.该体系具有较好的重复性(r＞0.95),以非结核分枝杆菌为对照检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异度均为100％.在痰和血浆DNA样本检测中,2个靶标拷贝数在肺结核组均显著高于对照组.结论 结核分枝杆菌特异性核酸的ddPCR体系,可用于肺结核患者临床分离株、痰和血浆样本的微量核酸检测,对提高结核病病原学诊断能力有重要意义.     

结核分枝杆菌复苏因子对结核性胸腔积液中结核分枝杆菌生长促进作用的探索

目的探讨结核分枝杆菌复苏因子（resuscitationpromotingfactor,Rpf）对结核性胸腔积液中病原菌生长的促进作用,以期提高临床标本体外培养阳性率,缩短培养时间。方法选择2012年10月至2013年10月期间北京胸科医院62例结核性胸膜炎患者,抽取胸腔积液经过离心处理后分别接种于改良罗氏培养基,以及含高、低浓度Rpf的MiddleBrook7H11固体培养基（简称“7H11培养基”）和生理盐水7H11培养基（生理盐水阴性对照组）中,每隔3d观察菌落形成情况,阳性者行抗酸染色（AFB）、PCR扩增试验及DNA测序进行菌种鉴定,观察比较高、低浓度Rpf对Mtb的促进生长作用。利用统计软件SPSS17．0进行统计学分析。Rpf培养组与改良罗氏培养组,以及Rpf培养组与生理盐水阴性对照组Mtb培养阳性率比较采用配对计数资料的x2检验;不同浓度Rpf培养组与生理盐水阴性对照组可视菌落平均时间（d）和阳性菌落数量比较采用配对样本t检验。以P〈0．05为差异有统计学意义。结果（1）结核性胸腔积液改良罗氏培养组中的Mtb培养阳性率为16．1％（10／62）,含Rpf的7H11培养基中的Mtb培养阳性率为43．5％（27／62）,两者比较差异具有统计学意义（x2=12．84,P〈0．01）;（2）含高、低浓度Rpf7H11培养基的可视菌落形成时间各为（20．92±0．58）d和（21．69±0．50）d,两组间差异无统计学意义（t=0．085,P〉0．05）,但显著快于生理盐水对照组（不含Rpf）的（38．08±0．94）d（t值分别为10．19、9．91,P值均GO．001）;（3）含高、低浓度Rpf的7H11培养基菌落形成单位数各为（34．12±4．06）×10^2和（37．27±5．63）×10^2,两组间差异无统计学意义（t=0．45,P〉0．05）,但显著多于生理盐水对照组（3．77±0．88）×10^2（t值分别为5．88、7．30,P值均〈0．001）。结论接种结核性胸腔积液后,含Rpf的7H11培养基较改良罗氏培养基可提高Mtb的培养阳性率,并缩短培养时间。     

血管内皮生长因子-C和血管内皮生长因子-D在非小细胞肺癌中的表达与淋巴结转移关系的研究

目的对血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、血管内皮生长因子-D(VEGF-D)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达进行研究,探讨VEGF-C、VEGF-D在NSCLC淋巴管生成和淋巴结早期转移中的作用。方法收集NSCLC患者术后肺组织标本52例,应用半定量逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测肺癌组织VEGF-C、VEGF-DmRNA的表达量。结果 (1)VEGF-CmRNA的表达水平在淋巴结转移阳性组的肺癌组织中较淋巴结转移阴性组的肺癌组织中增高(P<0.001),(2)VEGF-DmRNA的表达水平在淋巴结转移阳性组的肺癌组织中与淋巴结转移阴性组的肺癌组织中无差别。(3)VEGF-C/VEGF-D在淋巴结转移阳性组的肺癌组织较淋巴结转移阴性组的肺癌组织的值为高(P<0.05)。结论 VEGF-CmRNA的表达水平,VEGF-C/VEGF-D比值与肺癌淋巴结转移密切相关,VEGF-C可能成为判断淋巴结转移的一个重要指标。     

成人脊柱结核术后并发急性肾损伤的影响因素分析

目的 探讨术前肾功能正常的成年脊柱结核患者行椎体结核病灶清除术后发生急性肾功能损伤(acute kidney injury, AKI)的危险因素。方法 采用回顾性病例对照研究方法,搜集2009—2018年首都医科大学附属北京胸科医院收治的年龄≥18岁、术前肾功能正常,且行脊柱结核手术(后路病灶清除+椎间植骨融合+内固定术)治疗的成人脊柱结核患者2535例,参照排除标准最终纳入2068例。依据全球改善肾脏病预后组织(kidney disease improving global outcomes,KDIGO)指南,最终以术后发生AKI的31例患者作为并发AKI组,以未发生AKI的62例患者(与AKI组按1∶2匹配同期、同手术部位及同手术方式的患者)作为对照组。采用单因素和多因素logistic 回归分析两组患者的临床资料[年龄、性别、体质量指数(BMI),术前高血压、糖尿病、心脏病、吸烟史、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、抗结核药物治疗时间、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血红蛋白(Hb)、尿酸、白蛋白、C-反应蛋白(CRP)、估算的肾小球滤过率(eGFR),以及术中ASA分级、麻醉方式、有无高血压、有无低血压、手术时间、术中用药、胶体量、氯化钠注射液补液量、输血量、失血量、尿量,术后肺部感染、住院时间、院内死亡例数]与术后发生AKI的相关性。结果 单因素分析结果显示,并发AKI组患者年龄≥60岁[64.52%(20/31)]、BMI>25[58.06%(18/31)]、术前高血压病史[54.84%(17/31)]、高尿酸血症[87.10%(27/31)]、贫血[54.84%(17/31)]、术中失血量≥600ml[64.52%(20/31)]等方面明显高于对照组[分别为41.94%(26/62)、30.65%(19/62)、29.03%(18/62)、67.74%(42/62)、19.35%(12/62)、35.48%(22/62)](χ²值分别为4.216、5.864、6.486、4.043、12.126、7.034,P值分别为0.040、0.011、0.015、0.044、0.001、0.008);而术前eGFR≥90ml·min^-1·(1.73m²)^-1 [67.74%(21/31) ]、术中使用右美托咪定[41.94%(13/31)]明显低于对照组[分别为87.10%(54/62)、64.52%(40/62)](χ²值分别为4.960、4.299, P值分别为0.026、0.038)。多因素logistic回归分析结果显示,术前BMI>25 [Wald χ²=4.916,P=0.027,OR(95%CI):4.391 (1.187~16.238)]、高尿酸血症[Wald χ²=4.412,P=0.036,OR(95%CI):5.896 (1.126~30.874)]、贫血[Wald χ²=9.396,P=0.002,OR(95%CI):8.173 (2.133~31.314)]、eGFR≥90ml·min^-1·(1.73m²)^-1 [Wald χ²=4.283,P=0.039,OR(95%CI):0.213(0.049~0.921)]是术后发生AKI的影响因素。结论 术前肾功能正常的脊柱结核患者行椎体结核病灶清除术,术前BMI>25、并发高尿酸血症和贫血是术后发生AKI的危险因素,而术前高eGFR水平是保护性因素。     

结核性与恶性胸腔积液中微小核糖核酸内参基因筛选的初步研究

目的 探讨应用实时荧光定量PCR检测胸腔积液中微小核糖核酸(miRNA)表达量的适宜内参基因。方法 搜集2016年9月至2018年12月在首都医科大学附属北京胸科医院确诊治疗的47例结核性胸膜炎患者和31例并发胸腔积液的癌症患者作为研究对象。采用实时荧光定量PCR(SYBR Green引物法)和熔解曲线法分析所有患者胸腔积液标本中纳入研究的U6、Cel-miR-39、miR-16、miR-20a、miR-192、miR-1268、miR-4281共7个miRNA内参基因的表达量[循环阈值(Ct值)]和引物扩增效率,其中Ct值越低,表示基因表达量越高,越适合用于相对定量检测;引物扩增效率介于90%~110%之间,则可以用于后续胸腔积液中miRNA的检测,而平滑且单峰的熔解曲线则表示扩增产物的特异度良好。通过geNorm软件(M值)、NormFinder软件(稳定值)和BestKeeper软件(标准差和变异系数)来分析各内参基因的稳定性,其中M<1.5、稳定值及标准差和变异系数数值越小,内参基因越稳定。同时,分析标本检测的重复性,以及标本不同处理方法对miRNA检测结果的影响。结果 78份标本中,检测miR-1268、Cel-miR-39、miR-16的Ct值较低,分别为19.16±4.40、24.17±0.73、24.52±1.65;扩增效率分别为90%、101%、110%,可以用于后续胸腔积液miRNA检测;且7种内参基因的熔解曲线均平滑且单峰,特异度均较好。geNorm、NormFinder和BestKeeper软件分析Cel-miR-39的M值、稳定值、标准差和变异系数均为最低(分别为0.994、0.674、0.73和3.02%)。7个内参基因在标本重复检测中的稳定性均较好,且在标本采集后1h、2h、4h及反复冻融2次后的miRNA表达量与采样后立即处理的表达量未见差异。结论 Cel-miR-39稳定性好,表达丰度适中,适宜作为实时荧光定量PCR技术定量检测胸腔积液中miRNA表达量的内参基因。     

γ-干扰素诱导蛋白-10mRNA检测技术对结核病辅助诊断的价值

目的:评估以γ-干扰素诱导蛋白-10(interferon gamma-induced protein 10,IP-10)为靶标的检测技术(IP-10.TB)在结核病辅助诊断中的价值,并对比分析该检测技术与全血γ-干扰素释放试验(Quantiferon-TB Gold InTube, QFT-GIT)检测技术的一致性。方法:于2021年11月至2022年7月,在首都医科大学附属北京胸科医院连续性、前瞻性纳入疑似结核病患者作为研究对象,最终纳入158例。根据研究对象的临床表现、常规生化检测、结核病病原学检测、影像学检测和(或)病理学检测结果,将其分为确诊结核病组(88例)、临床诊断结核病组(29例)和非结核病组(41例)。所有研究对象同时行外周血IP-10.TB检测和QFT-GIT检测,采用受试者工作特征曲线分析两种检测技术的诊断价值,两种检测技术的一致性分析采用Kappa检验。结果:158例研究对象中,IP-10.TB检测不确定结果7例(4.4%),QFT-GIT检测不确定结果5例(3.2%),两者比较差异无统计学意义(χ²=0.346,P=0.556)。在146...