m6A去甲基化酶在白血病中的研究进展

N6-甲基腺苷嘌呤甲基化是最常见的RNA化学修饰, 去甲基化酶可对已经发生甲基化修饰的碱基进行去甲基化进而影响细胞mRNA的稳定性。去甲基化酶在白血病中异常高表达, 通过调控下游靶基因转录本的稳定性发挥致癌作用。因此, 开发靶向去甲基化酶的分子抑制剂, 可为白血病的治疗提供新方向。     

儿童白血病BMSCs及VLA-4抗体联合VP-16对白血病细胞凋亡的影响

目的研究儿童白血病(急性淋巴细胞白血病和急性髓系白血病)骨髓基质细胞(BMSCs)、缓慢抗原-4(VLA-4)抗体及VLA-4抗体联合化疗药物足叶乙甙(VP-16)对儿童白血病细胞凋亡的影响,探索儿童白血病新的治疗方法。方法分离培养儿童白血病骨髓单个核细胞,根据组别加入VLA-4抗体和VP-16,采用流式细胞仪检测不同组别白血病细胞的凋亡率。结果对照组与BMSCs组、骨髓基质上清组比较,其白血病细胞早期凋亡率均有显著增高,P<0.05,而BM-SCs组与骨髓基质上清组比较,白血病细胞早期凋亡率无显著差异。抗体组、BMSCs组和骨髓基质上清组白血病细胞凋亡率分别为[12 h:(10.16±1.29)%,24 h:(13.72±1.72)%]、[12 h:(4.99±1.66)%,24 h:(5.54±1.53)%][12 h:(6.06±1.77)%,24 h:(6.62±1.8)%],抗体组与BM-SCs组和骨髓基质上清组比较,其早期凋亡率均显著增加,P<0.05;抗体加药物组白血病细胞早期凋亡率最高,为[12 h:(26.79±1.29)%,24 h:(20.81±1.39)%],与其他任何一组比较,差异显著,P<0.05;除BMSCs组和骨髓基质上清组,其他四个组12 h与24 h的白血病细胞早期凋亡率有显著差异,P<0.05。结论白血病患儿的BMSCs可以保护白血病细胞免于失巢凋亡和药物诱导的凋亡,VLA-4抗体可增强VP-16诱导的白血病细胞的凋亡敏感性。     

骨髓基质细胞对白血病细胞保护作用的研究进展

白血病骨髓基质细胞与其分泌的细胞因子、细胞外基质构成的骨髓微环境在机体造血发育、血液病发生、恶性血液病细胞凋亡等生理病理过程中发挥着重要作用.该文综述了白血病患者骨髓基质细胞与白血病细胞耐药、抗凋亡特性的关系及其机制的相关研究进展.     

红细胞内钙浓度作为心衰诊断指标的评价

红细胞内钙浓度作为心衰诊断指标的评价贾秀红，刘豫阳，沈惟堂（上海医科大学儿科医院内科）近年来，钙与心力衰竭关系日益受到重视。心衰病人红细胞内钙浓度异常升高［１］。作者试测红细胞内钙浓度作为心衰的诊断指标，探讨其临床价值。对象与方法心衰组为临床诊断和心...     

Apollon反义寡核苷酸对K562细胞增殖、凋亡和耐药的影响

目的 探讨Apollon反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对白血病细胞K562增殖、凋亡及耐药的影响.方法 设计合成特异性的Apollon硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(missense oligonucleotide,MSODN),脂质体介导转染K562细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测K562细胞增殖,Annexin V-FITC法检测细胞的凋亡,并用MTT法检测K562细胞对依托泊苷、长春新碱及联合用ASODN的耐药性.结果 Apollon ASODN对K562细胞的生长抑制作用随浓度和时间增加而增加.Apollon ASODN在终浓度为600nmoL/L作用K562细胞时,能明显抑制其增殖,K562细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),联合用药组对细胞的半数抑制浓度低于单药组.结论 Apollon ASODN可下调Apollon基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞的凋亡,Apollon ASODN与依托泊苷和长春新碱联合作用可降低细胞生存率,降低细胞耐药性.     

靶向HOXA9基因RNAi慢病毒载体增加人急性单核细胞白血病U937细胞的药物敏感性

目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,HOXA9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响。方法:应用蛋白质印迹法从4条针对HOXA9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒HOXA9/GV118RNAi-LV#2。实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD)。HOXA9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测HOXA9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测HOXA9蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测DNR作用后各组细胞中MDR-1mRNA的表达。结果:KD组细胞中HOXA9mRNA的沉默效率在55%以上,HOXA9蛋白的表达量明显减少。VCR及DNR作用KD组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值明显降低(P<0.01),药物敏感性明显增强;VCR和DNR作用后,KD组细胞的凋亡率明显增加(P<0.01);DNR作用后,KD组U937细胞中MDR-1mRNA的表达水平明显下调(P<0.01)。结论:靶向HOXA9基因的RNAi慢病毒可稳定沉默HOXA9基因的表达,在一定程度上提高U937细胞对化疗药物的敏感性。     

Survivin反义寡核苷酸诱导K562细胞株凋亡的实验研究

目的 探讨Survivin反义寡核苷酸对K562细胞株凋亡的影响.方法 将K562细胞分为四组:反义组、无义组、脂质体组及空白对照组,通过脂质体将Survivin反义寡核苷酸转染入各组K562细胞,用免疫组化法测定转染前后K562细胞Survivin基因及Caspase-3的表达差异,用Tunel及Annexin V-FITC测定各组细胞的凋亡率.结果 Survivin基因在K562细胞高表达,转染反义核苷酸后其表达下降,转染Survivin基因反义核苷酸后Caspase-3的表达较其它各组升高,K562细胞生长受抑,细胞凋亡率升高.结论 Survivin反义寡核苷酸能够下调Survivin基因的表达,促进白血病细胞株K562的凋亡.     

以眼眶绿色瘤为首发症状的急性髓系白血病1例

绿色瘤(chloroma)又叫髓样肉瘤(myeloid sar-coma)或粒细胞性肉瘤(granulocytic sarcoma ) ,是一种非常少见的肿瘤 ,也可伴随骨髓异常增生综合征(myelodysplastic syndrome ,MDS )、骨髓增殖性疾病(myeloproliferative disease )或急性髓系白血病(acute myeloid leukemia ,AML)而发生 ,由于髓系肿瘤细胞对局部组织的浸润而形成 ,多侵犯皮肤、软组织、淋巴结和胃肠道 ,因切面呈绿色而得名.绿色瘤可发生在各个年龄段 ,以儿童多见 ,大约30％AM L患儿发生绿色瘤.绿色瘤最常发生的部位是眼眶 ,眼眶绿色瘤是髓样白血病的一种表现 ,因其发病率低 ,报道较少见 ,现报道1例.     

川芎嗪注射液对Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制

目的 探讨川芎嗪注射液对人类急性淋巴细胞白血病(ALL) Jurkat细胞株增殖与凋亡的影响,并进一步研究其相关分子机制.方法 用质量浓度分别为0、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mg/ml的川芎嗪注射液作用Jurkat细胞24、48、72 h后,CCK-8法检测细胞增殖的变化;质量浓度为0、0.50、1.00、1.50 mg/ml川芎嗪注射液处理Jurkat细胞48 h后,流式细胞术检测细胞周期与凋亡的变化,Western blot检测细胞Aurora-B及Survivin蛋白的表达.结果 与未经川芎嗪注射液处理细胞组(对照组)相比,不同浓度川芎嗪注射液能有效抑制Jurkat细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性(P＜0.05),24、48及72 h的IC50分别为(1.33±0.16)、(0.91±0.10)、(0.67±0.11)mg/ml.质量浓度0.5、1.0、1.5 mng/ml的川芎嗪注射液作用Jurkat细胞48 h后,与对照组相比,G2/M期细胞比例增高,S期细胞比例降低,细胞凋亡率升高,并呈剂量依赖性(P＜0.05);Western blot结果显示,川芎嗪注射液以浓度依赖方式下调Aurora-B和Survivin蛋白表达(P＜0.05).结论 川芎嗪注射液在体外能有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调Aurora-B、Survivin蛋白的表达相关.     

靶向沉默同源盒A10基因对白血病NB4细胞的影响

目的 探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(shRNA)靶向沉默同源盒A10(HOXA10)基因对白血病NB4细胞增殖、凋亡和耐药的影响.方法 将NB4细胞分为干扰(lenti-shHOXA10)组、阴性对照组和未处理组,用慢病毒感染NB4细胞5d后进行相关实验.运用流式细胞仪测定慢病毒对NB4细胞的感染效率.实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)测定慢病毒干扰载体对HOXA 10基因的沉默作用;MTF法检测细胞的增殖抑制情况.流式细胞术检测3组细胞凋亡率的变化,Western blot方法测定干扰HOXA10基因对多药耐药1(MDR-1)蛋白的影响.结果 慢病毒对NB4细胞的感染率达90％左右.干扰组HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平均较对照组下降,干扰组细胞抑制率和凋亡率分别为(52.12±4.02)％、(30.0±2.7)％,与阴性对照组和未处理组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示干扰HOXA 10基因的表达能降低MDR-1基因的表达水平,逆转白血病细胞耐药.结论 慢病毒载体靶向干扰HOXA10基因的表达,能有效抑制NB4细胞增殖和促进其凋亡,逆转白血病细胞耐药.HOXA10基因有望成为逆转白血病耐药的新靶点.