实验性肾炎病理改变及姜黄素对其防治作用研究

为探讨姜黄素对大鼠肾毒血清肾炎的防治作用 ,为其在临床治疗肾小球肾炎提供实验依据 ,将雄性SD大鼠随机分成3组 ,正常对照组 :从尾静脉注射0.5ml生理盐水 ,每天1次 ,连用2d ;模型组 :从尾静脉注射兔抗鼠肾毒血清0.5ml/d ,连用2d ;姜黄素组 :于尾静脉注射兔抗鼠肾毒血清0.5ml/d ,连用2d ,同时腹腔注射姜黄素50mg/(kg·d)。3组大鼠分别于第3、7、14、28d处死 ,测定各批次大鼠24h尿蛋白、血生化指标 ,并观察肾脏病理组织学改变。结果显示 ,姜黄素组24h尿蛋白明显低于模型组 (P<0.01) ,血肌酐和胆固醇于4周时比模型组低 (P<0.05) ;半定量分析显示姜黄素组肾小球细胞数明显低于模型组 (P<0.01) ,间质炎细胞浸润程度亦较模型组明显减轻 (P<0.01) ;2周后肾小管间质损伤指数姜黄素组明显好于模型组 (P<0.05)。提示姜黄素能明显减轻肾毒血清肾炎所致蛋白尿 ,同时降低血肌酐及胆固醇 ,抑制小球内细胞增殖 ,减轻小管间质损伤及炎细胞浸润 ,具有肾脏保护作用。     

尿蛋白组学在儿童微小病变型肾病综合征中的初步研究

目的研究儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术。方法冷丙酮萃取肾病综合征患儿尿蛋白，去除白蛋白等高丰度蛋白，以固相IPG pH梯度等电聚焦为第一向，SDS均一胶（10．00％）的垂直电泳为第二向，银染后PDQuest软件进行分析，质谱分析。结果成功地得到儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白双向电泳图谱。PDQuest7．3软件进行图像分析，检测到400个蛋白点。正常尿蛋白检测到112个蛋白点。肾病综合征与正常尿蛋白图谱相比差异蛋白表达明显的有20个，质谱鉴定出5个蛋白，分别是Alpha-1-antitrypsin、PITPNB、Zn-alpha-2-glycoprotein、Haptoglobin和Alpha-1B-glycoprotein。结论用尿蛋白组学对儿童微小病变型肾病综合征的尿液进行研究是可行的。     

熊脱氧胆酸减轻内质网应激介导的胰岛β细胞凋亡的机制

目的 探讨熊脱氧胆酸( Ursodeoxycholic acid,UDCA)通过减轻内质网应激保护链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的作用.方法 链脲佐菌素(50 mg/kg)一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型(n=40),并将14只造模成功大鼠按随机数字表法随机分为糖尿病组7只,UDCA组7只,另取正常对照组10只.自造模成功第10天开始以UDCA(40 mg·kg-1·d-1)给大鼠灌胃30 d.饲养期间观察大鼠血搪.处死后留取大鼠血清和组织标本,测定空腹胰岛素,TUNEL检测胰岛β细胞凋亡的形态学改变.胰腺组织总RNA采用定制基因芯片对89条凋亡相关基因的表达进行检测,以RT-PCR和Western印迹法验证相关基因的表达.结果 糖尿病大鼠血糖在给予UDCA治疗后逐渐下降,但仍然未降到正常水平.糖尿病大鼠空腹胰岛素降低,给予UDCA治疗后空腹胰岛素水平有所增加.TUNEL显示糖尿病组大鼠予UDCA治疗后减少了由链脲佐菌素引起的胰岛β细胞凋亡(P＜0.01).在89条基因中,糖尿病组上调基因42条,下调基因46条.UDCA可以逆转部分基因的影响.与对照组相比,糖尿病组大鼠Bax、Caspase-3、Bip、CHOPmRNA和CHOP蛋白显著上调(P＜0.05),而抗凋亡蛋白Bcl-2 mRNA显著下调(P＜0.05),给予UDCA治疗后这些参数均有明显改善(P＜0.05).结论 熊脱氧胆酸可能通过减轻内质网应激达到保护链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的作用.     

外源性结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质合成的作用

目的:探讨外源性结缔组织生长因子(CTGF)在人肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质合成中的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞HK2分为三组:对照组;CT-GF小剂量组(终浓度为2.5 μg/L);CTGF大剂量组(终浓度为20 μg/L).用倒置显微镜观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTr)法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测HK2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),纤连蛋白(FN)和胶原ⅠαmRNA水平的变化;免疫组织化学方法观察HK2细胞FN和胶原Ⅰ的表达.结果:CTGF刺激使HK2细胞由椭圆形变为梭形,同时促进HK2细胞增殖.不同浓度的CTGF作用于HK2细胞48 h后,α-SMA和FN mRNA水平显著升高(P＜0.05),E-钙黏蛋白mRNA的表达显著下降(P＜0.05);大剂量CTGF刺激HK2细胞48 h后胶原ⅠαmRNA水平显著升高(P＜0.05).小剂量CTGF组HK2细胞胞质FN表达水平显著增加(P＜0.05),大剂量CTGF组HK2细胞胞质表达FN和胶原Ⅰ均显著增加(P＜0.05).结论:CTGF在体外能够诱导人肾小管上皮细胞转分化,并促进FN的合成,大剂量的CTGF可以增加其胶原Ⅰ的合成.     

儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组的双向电泳及PDQuest图像初步分析

目的:建立儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳及相关技术.方法:冷丙酮萃取肾病综合征患儿尿蛋白,去除白蛋白等高丰度蛋白、除盐,以固相IPG pH梯度等电聚焦为第一向,均一SDS胶聚丙烯酰胺凝胶(T=10%)为第二向,银染后PDQuest软件进行分析.结果: 成功得到儿童微小病变型肾病综合征尿蛋白双向电泳图谱.尿蛋白用17 cm,pH3-10L(线性)的IPG胶条进行二维电泳时上样量100 μg,60 000 Vh的等电聚焦是恰当的.PDQuest7.3软件进行图像分析,检测到400个蛋白点.结论:用尿蛋白组学对儿童微小病变型肾病综合征的尿液进行研究是可行的.为今后从更高的水平来寻找肾脏疾病的功能蛋白和特异性蛋白质,阐明肾脏疾病发生发展的网络机制等后续研究提供了可能性.     

熊脱氧胆酸对糖尿病大鼠胰岛β细胞凋亡的保护作用

目的:探讨熊脱氧胆酸(UDCA)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病(DM)大鼠胰岛β细胞抗氧化及抗凋亡的保护作用.方法:STZ 50 mg/kg一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型(n=40),并将成功制备的糖尿病大鼠(血糖持续1周≥16.7 mmol/L,n=14)随机分为两组:DM组7只.UDCA组7只.另外取正常对照组10只.自造模成功第10天开始UDCA组以UDCA(40 ms/kg)给大鼠灌胃30天,对照组予等量生理盐水,其间观察各组大鼠的体重、血糖,处死后留取血清和组织标本,测定血清一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA),胰腺组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)及观察胰岛β细胞凋亡的形态学改变.结果:糖尿病大鼠在给予UDCA治疗后血糖浓度逐渐下降,但仍然未降到正常水平;糖尿病大鼠予UDCA治疗后减少了由STZ引起的胰岛β细胞的凋亡(P<0.01);血清MDA、NO水平在糖尿病组大鼠显著增加,而胰腺组织匀浆SOD活性则降低;给予UDCA治疗后这些参数均有明显改善.结论:UDCA可以清除STZ产生的NO和氧自由基,保护胰岛β细胞,使其不发生过度凋亡,从而降低血糖.     

板层蛋白在病理肾组织中的分布及其mRNA的表达

目的 研究板层蛋白在肾小球疾病时质或量的改变,探讨它们在肾脏中的生理功能和病理学意义。方法 本研究以板层蛋白α1,α2,β1,β2,γ1结构链为观察对象,用免疫组织化学和原位杂交技术研究它们在48例肾小球疾病病理肾活检组织中的表达和分布是否发生质或量的改变。结果LNα1,α2,β1和γ1的mRNA在伴系膜增生的肾小球内表达有不同程度的增加,增生的系膜细胞是主要的细胞来源。在肾小球系膜增殖节段和硬化病灶附近伴有LNα1和γ1的蛋白增多和LNα2,β1蛋白的异常表达,而LNβ2链在相应节段的系膜区和GBM表达出现不同程度的下降。结论在系膜增生的肾小球疾病中,增生的系膜细胞是肾小球内板层蛋白量的积聚和异常合成的重要细胞来源。在肾小球疾病中,板层蛋白的合成出现量和质的变化,这可能是肾小球疾病进展和恶化的物质基础。     

板层蛋白在儿童系膜增生性肾小球肾炎肾活检组织中的表达

目的:观察板层蛋白(laminin,LN)在儿童系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)肾活检肾组织中表达的质或量的改变及其意义。方法:以板层蛋白α_1、α_2、β_1、β_2、γ_1结构链为观察对象,用免疫组化和原位杂交技术观察它们在18例系膜增生性肾小球肾炎肾活检组织和6例正常成熟肾组织中的表达和分布。结果:①LNα_1;、LNγ_1在肾小球系膜增殖节段蛋白表达增强;LNα_2、LNβ_1在部分增殖的肾小球系膜区出现节段性异常表达;LNβ_2链在增生的系膜区和肾小球基膜(GBM)表达出现不同程度的下降。②LNα_1、α_2、β_1、和γ_1的mRNA在系膜增生的肾小球内表达有不同程度的增加,但轻度、中度和重度系膜增生的组间无明显差异。结论:①在系膜增生性肾小球肾炎中板层蛋白的表达既有量的改变也有质的变化,增生的系膜细胞是肾小球内板层蛋白量的积聚和异常合成的重要细胞来源。②板层蛋白各分子链分布的改变可能是肾小球功能异常的病理基础。     

阿霉素肾病大鼠肾组织中核因子-κB活化与肾小管间质损害的关系

目的 :探讨阿霉素肾病大鼠肾组织中核因子 - κB(NF- κB)活化及其与蛋白尿、肾小管间质损害和趋化因子表达之间的关系。方法 :阿霉素肾病模型采用尾静脉注射阿霉素 (6 m g/kg)制备。应用免疫组化和图像分析系统观察肾皮质区小管间质损害程度、NF- κB活化及单核细胞趋化蛋白 - 1(MCP- 1)表达。结果 :阿霉素肾病大鼠出现大量蛋白尿及明显的皮质区肾小管间质损害。肾皮质区 NF- κB活化及 MCP- 1表达显著增强 ,且与蛋白尿及肾小管间质损害程度显著相关。结论 :NF- κB活化介导了非免疫性慢性肾小球肾炎时皮质区肾小管间质损害及诱导趋化因子的产生。     

醛固酮通过PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路促进系膜细胞增殖

目的 探讨氧化应激依赖的表皮生长因子受体（EGFR）活化在醛固酮（ALDO）诱导的磷酸肌醇-3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路活化及系膜细胞增殖中的作用。 方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用3H-胸腺嘧啶（3H-TdR）掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖;荧光探针2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸检测细胞内活性氧（ROS）的产生;Western印迹法检测EGFR、PI3K、Akt、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和核糖体蛋白p70S6激酶1（p70S6K1）磷酸化。 结果 （1）ALDO可呈时间依赖性和剂量依赖性的方式促进肾小球系膜细胞ROS产生,100 nmol/L ALDO刺激3 min,ROS产生即显著增加,刺激60 min达到高峰;1、10和100 nmol/L ALDO刺激60 min,ROS产生分别是对照组的1.50、1.70和2.14倍。抗氧化剂乙酰半胱氨酸（NAC）能阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖。（2）ALDO可呈时间依赖性和剂量依赖性的方式诱导肾小球系膜细胞EGFR磷酸化,100 nmol/L ALDO刺激5 min,EGFR磷酸化显著增强,刺激60 min达到高峰;1、10和100 nmol/L ALDO刺激60 min,EGFR磷酸化分别是对照组的2.29、3.55和5.25倍。NAC和盐皮质激素受体（MR）阻断剂依普利酮能显著抑制ALDO诱导的EGFR磷酸化,而EGFR特异性抑制剂AG1478能完全阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖。（3）100 nmol/L ALDO刺激60 min能显著增加PI3K、Akt、mTOR和p70S6K1磷酸化,其增加倍数分别为对照组的4.35、5.38、3.85和3.57倍,应用NAC和AG1478能阻断ALDO诱导的PI3K、Akt、mTOR和p70S6K1磷酸化。（4）PI3K抑制剂LY294002、Akt抑制剂以及mTOR抑制剂雷帕霉素能显著抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖,其抑制率达到50%~55%。 结论 ALDO通过氧化应激依赖的EGFR磷酸化促进肾小球系膜细胞PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路活化及细胞增殖。