荧光染料SYBR GreenⅠ及EB在定量PCR中敏感性比较

目的比较荧光染料SYBR Green I及EB在定量PCR诊断中检测DNA的敏感性.方法分别用琼脂糖凝胶电泳SYBR Green I染色及EB染色,检测26例21-三体综合征患者及20例正常人DNA PCR扩增产物,并进行光密度分析比较.结果SYBR Green I染色于24个循环PCR产物带型清楚,可准确定量检测;EB染色则在28个循环才能进行定量分析.结论荧光染料SYBR Green I染色较EB染色测量DNA敏感、快捷,在定量PCR技术中值得推广应用.     

唐氏综合征高危孕妇筛查出3例小Y染色体核型

唐氏综合征(Down's Sydrome,DS)又称先天愚型,是一种发生于胎儿的遗传性疾病.我们利用时间分辨荧光免疫分析法及AFP、Free-β-HCG试剂盒对1 773例孕妇进行DS及胎儿某种严重缺陷产前筛查,在筛查的同时,检出3例小Y的胎儿,现报告如下.     

恶性淋巴瘤病人外周血细胞原位PCR方法

目的 探讨、建立外周血间期细胞原位PCR方法。方法 用Dig-dUTP标记引物，用外周血淋巴细胞进行直接法原位PCR方法检测15例恶性淋巴瘤患者。结果 阳性12例，阴性3例，正常对照无一例阳性。结论 细胞悬液直接法原位PCR操作简单、结果可靠、敏感性高。     

儿童肺炎衣原体呼吸道感染的研究

目的 了解儿童呼吸道感染患者急性肺炎衣原体感染的情况及临床表现。方法：１４９例急性呼吸道感染患者,５６例健康儿童,取静脉血,用微蜈荧光试验检测肺炎衣原体ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体,其中８８例呼吸道感染患者,５６例健康儿童,取咽拭子标本,应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测肺炎衣原体ＤＮＡ。结果：本组患者肺炎衣原体ＩｇＧ抗体的阳性率为２６％,对照组为５％（Ｐ〈０．００１）,其中２４例（１６％）有肺炎衣原体急性感染     

多巴胺D4受体基因多态性与注意缺陷多动障碍的关联研究

目的研究多巴胺D4受体(DRD4)基因第3外显子48bp可变数串联重复序列多态性(VNTR)与注意缺陷多动障碍(ADHD)的易患性是否存在相关。方法采用聚合酶链式反应(PCR)技术,检测ADHD患者及其父母和正常对照者DRD4基因48 bpVNTR,分析其基因型和等位基因频率,运用病例对照研究和核心家系的关联分析(TDT、HHRR)方法分别进行分析。结果在广西地区汉族309人中,DRD4基因第3外显子48 bpVNTR存在6种等位基因、8种基因型。在广西地区汉族35例ADHD患儿中,发现3种DRD4等位基因,4种基因型。病例-对照关联分析结果表明:DRD4基因第3外显子48 bpVNTR与ADHD无关(χ2=6.126,df=5,P=0.294)。核心家系的关联分析表明2*等位基因(χ2=0.129,P>0.005)、4*等位基因(χ2=0.129,P>0.05)与ADHD的易患性无关。病例对照分析,表明DRD42*等位基因(χ2=0.43,P>0.05)、4*等位基因(χ2=0.20,P>0.05)与ADHD不存在连锁不平衡。结论在中国广西地区汉族人群中存在DRD4×7等位基因。中国广西地区汉族人群中DRD4基因第3外显子48 bpVNTR的基因频率分布以DRD4×4最常见,与国内外报道的亚洲人群中的频率分布一致。在广西地区,DRD4基因第3外显子48 bpVNTR多态性与ADHD的易患性无相关。     

产前筛查唐氏综合征时查出1例9qh+和2例inv(9)

唐氏综合征(Down's syndrome,DS)又称先天愚型,是一种发生于胎儿的遗传性疾病.我们用PE公司的设备和试剂盒对1 773例孕妇进行唐氏综合征产前筛查,检出1例9号染色体长臂次缢痕增加、2例9号染色体臂间倒位的胎儿,报道如下.     

广西地区地中海贫血基因 Hb Westmead 突变情况及其临床、地域和民族分布特点

目的：检测广西地区地中海贫血基因Hb Westmead突变情况,并分析其临床、地域及民族分布特点。方法采用Gap-PCR法、反向斑点杂交法检测11523例门诊患者的Hb Westmead基因型,记录Hb Westmead基因突变患者的籍贯和民族等资料。根据基因型检测结果,采用血细胞自动分析仪对αα／αWSα、-SEA／αWSα基因型患者和随机选择的无Hb Westmead基因突变的200例正常人群进行血常规检测。结果11523例患者中,检出Hb Westmead基因突变患者281例（2．44％）,其中αα／αWSα基因型（即杂合子）193例（68．68％）、-SEA／αWSα基因型（即Hb H病）49例（17．44％）、-α3．7／αWSα基因型23例（8．19％）、-α4．2／αWSα基因型10例（3．56％）、αCSα／αWSα基因型6例（2．13％）。281例Hb Westmead 基因突变患者中,分布在南宁46例、百色51例、崇左27例、河池38例、其余地区119例;分布在壮族196例,汉族79例,瑶族、苗族等6例。 Hb H病患者、Hb Westmead杂合子患者、正常人群的血红蛋白（ Hb）、红细胞体积（ MCV）均依次升高,P均＜0．05。结论广西地区有较高的地中海贫血患者Hb Westmead突变基因携带率,主要以杂合子的形式存在;多见于壮族,主要分布在广西中部及西南地区。 Hb West-mead杂合子、Hb H病患者的Hb和MCV均降低,Hb H病患者降低更明显。     

荧光SYBR GreenⅠ染色及银染方法在定量聚合酶链反应诊断21-三体综合征中的比较

目的 比较SYBR GreenⅠ染色及银染方法在定量聚合酶链反应(Q-PCR)诊断21-三体综合征(21-三体)中的优劣。方法 PCR扩增26例21-三体及20例正常人DNA，分别用琼脂糖电泳-SYBR GreenⅠ染色及聚丙烯酰胺凝胶-银染方法检测，进行光密度定量分析及比较。同时以细胞遗传学核型分析作对照。结果 两种方法检测DNA均于24个PCR循环时显带清晰；定量分析结果同核型分析结果一致；SYBR GreenⅠ染色历时30min，而银染则历时4～5h。结论 在Q-PCR中SYBR GreenⅠ染色敏感度同银染，较银染更简单、省时、经济。     

荧光染料进行定量PCR诊断Down’s综合征的比较

Down’s综合征(DS)是一种最常见的染色体病,以先天智力低下为主要症状,主要是由体细胞21号染色体三体或部分三体所致。近几年荧光定量PCR技术已应用于诊断DS。我们分别用SYBRGreenI和EB为染料进行荧光定量PCR,检测了26例临床上确诊为DS患者和20例正常人,对两种荧光染料进行比较。     

应用荧光定量PCR产前诊断21三体综合征

目的　建立荧光定量PCR技术产前检测 2 1三体综合征。方法　采用PCR方法同时扩增位于 2 1号染色体上的人肝型磷酸果糖激酶基因 (humanliver typephosphofructokinasegene ,PFKL CH2 1 )和位于 1号染色体上的人肌型磷酸果糖激酶基因(humanmuscle typephosphofructkinasegene ,PFKM CH1 ) ,使用SYBRGreenⅠ荧光染料处理产物、琼脂糖电泳后在凝胶成像系统进行分析 ,得出扩增产物的荧光强度对比值。用此方法检测 2 0例 2 1三体综合征患儿和 2 1例正常人外周血及 1 1例孕妇绒毛或脐带血。结果　 2 6例 2 1三体综合征患儿PFKL CH2 1 /PFKM CH1 扩增产物的荧光强度对比值为 1 5 98± 0 1 78,而正常人PFKL CH2 1 /PFKM CH1 扩增产物的荧光强度对比值为 1 0 0 0± 0 0 5 0 ,两者间差别有显著意义。 1 0例孕妇绒毛或脐带血细胞DNA的PFKL -CH2 1 /PFKM -CH1 扩增产物的荧光强度对比值均在 1 0 0± 0 1 0之间 (正常人 x± 2SD) ,1例为 1 5 8,与染色体核型分析结果相符合。结论　SYBRGreenⅠ荧光定量PCR技术产前检测 2 1三体综合征具有准确、快速、安全、实用等特点 ,有较高的临床使用价值。