大肠杆菌高效表达的HCVE2蛋白在丙型肝炎检测中应用

为探讨大肠杆菌高效表达的HCV E2蛋白在丙型肝炎诊断中应用价值,采用了238份HCVRNA阳性血清标本进行了E2抗体和抗HCV测定,方法采用ELA,和PCR法.结果有164份E2抗体阳性,占68.9%,卡方检验P＞0.05;用抗HCV检测与E2抗体测定方法比较,两种方法无显著性区别（P＞0.05）;在HCV RNA阳性,抗HCV阴性的血清中,有半数可测出E2抗体的阳性.提示在大肠杆菌中高效表达了可溶性的HCV E2蛋白,纯化后可进行E2抗体测定,且E2抗体阳性数与HCVRNA,抗HCV阳性数无显著性差别,E2抗体可以检出一部分抗HCV检测不能检出的HCV感染者.     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞诱导特异性T淋巴细胞应答

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(Dc)是否诱导特异性T细胞应答。方法(1)将研究对象分为慢性乙型肝炎患者组、急性乙型肝炎痊愈组、健康志愿者组,分离各组研究对象的外周血单个核细胞(PBMC),细胞内细胞因子染色方法检测其对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异表位多肽乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)18-27的记忆性免疫应答;(2)培养慢性乙型肝炎患者DC,将负载有乙型肝炎抗原表位多肽的DC诱导特异的T细胞应答。采用细胞内细胞因子染色方法检测诱导的T细胞分泌的细胞因子,乳酸脱氢酶释放法测定诱导的T细胞杀伤活性。结果(1)急性乙型肝炎患者PBMC对HBcAg 18-27 CTL特异表位多肽存在记忆的免疫应答,其分泌干扰素-γ的CD8+T细胞占CD8+T细胞总数的(4.3±2.5)％,分泌白细胞介素-2的占总细胞数的(4.8±2.2)％,分泌肿瘤坏死因子-α占总细胞数的(4.6±2.3)％。而慢性乙型肝炎患者和健康志愿者对其记忆应答很低,与急性乙型肝炎患者比较差异有显著性,t值为2.508-3.305,P<0.05。(2)用多肽共孵育过的慢性乙型肝炎患者DC多次诱导的T细胞慢性乙型肝炎患者组,加肽孵育的靶细胞比例为30:1、10:1、3:1时,其杀伤率分别为(57.0±20.3)％、(49.5±20.2)％、(21.8±12.9)％,均高于对照组,表明慢性乙型肝炎患者DC可以诱导特异的T     

大肠癌发生中DNA与AgNOR蛋白量变的相关性研究

对９例正常大肠粘膜、４５例大肠腺瘤和２７例腺癌的组织切片进行Ｆｅｕｌｇｅｎ－ＡｇＮＯＲ结合染色，并用图象分析仪对其进行ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ蛋白定量检测。结果显示，随正常大肠粘膜经腺瘤到癌，其ＤＮＡ与ＡｇＮＯＲ蛋白含量逐渐增加，腺瘤组和腺癌组的ＤＮＡ与ＡｇＮＯＲ蛋白的含量之间有极显著的相关性。但无论是ＤＮＡ含量或ＡｇＮＯＲ蛋白含量，在正常组与腺瘤组和腺瘤组与腺癌组之间，都有较大的重叠范围和较多的重叠例数，而从ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ蛋白含量两者的相关性角度来判断，可使正常组与腺瘤组和腺瘤组与腺癌组的重叠范围明显减小，重叠例数明显减少。因此认为，用同细胞ＤＮＡ和ＡｇＮＯＲ蛋白含量相关性区分大肠良恶性病变，可使判断更为准确。     

药物性肝炎组织病理学和临床特性研究

目的研究药物性肝炎的临床特性和组织病理学检查的意义。方法对2004年4月至2007年4月在地坛医院住院而经肝脏组织病理学诊断的药物性肝炎进行回顾性分析,本组病例中不包括临床诊断为药物性肝炎而无肝组织病理学诊断者,收集患者的临床资料,包括肝病病史、药物过敏史、服药史和生化检查等,对其进行描述性分析。结果48例患者在经组织病理学诊断为药物性肝炎,仅有5例患者在入院时诊断为药物性肝炎,6例有药物过敏史,仅4例服用明确有肝损伤药物史。但37例有服药史,服药时间多为1w到3m。诊断为慢性药物性肝炎3例,其他为急性药物性肝炎。2例合并有慢性乙型肝炎。结论详细的药物使用史和肝脏组织学检查对药物性肝病的诊断非常重要。     

人卵巢癌微血管内皮细胞的培养及体外管腔样结构形成的观察

目的建立人卵巢癌微血管内皮细胞(ovarian carcinoma-derived microvascular endothelial cells,ODMECs)免疫磁珠分选体系并观察ODMECs体外二维管腔样结构(tubule-like structure,TLS)的形成。方法利用结合有CD31抗体的MACS MicroBeads免疫磁珠分选系统分离纯化ODMECs。通过形态学、生化和表型特征对所获得的ODMECs进行鉴定;并检测其摄取乙酰化低密度脂蛋白(acetylated-low-density lipoprotein,DIL-acLDL)和结合凝集素Ⅰ(UEA-Ⅰ)的能力,观察其在体外培养体系中二维管腔样结构的形成。结果所获ODMECs流式分析细胞纯度可达99.6%,具有卵石征、接触抑制,表达CD31、CD105、FⅧ-Rag;具有结合UEA-Ⅰ和摄取DIL-acLDL的能力;培养过程中观测到ODMECs可形成二维管腔样结构。结论成功建立了人ODMECs的免疫磁珠分离培养方法,并观察到ODMECs具有体外二维管腔样结构。     

丙型肝炎病毒E2蛋白作为酵母双杂交体系"饵"载体的构建及表达

目的 :用丙型肝炎 (丙肝 )病毒 (hepatitisCvirus,HCV)胞膜蛋白 2 (envelopeprotein 2 ,E2 )胞外区片段 ,构建酵母双杂交体系中“饵”载体 ,明确其在酵母细胞中的表达 ,排除自身激活作用 ,验证其能否用于酵母双杂交体系筛选cDNA文库。方法 :设计引物 ,从本室构建的含中国株Ⅲ型HCVE2片段的载体上 ,扩增出不包含C末端跨膜区的E2片段E2 6 6 1,经EcoRI和PstI双酶切后 ,克隆到酵母双杂交的“饵”载体pAS2 1质粒上 ,构建成载体pAS2 1 E2 6 6 1。阳性克隆经EcoRI和PstI双酶切鉴定后 ,转入酵母中 ,用酵母蛋白抽提物作Western杂交 ,证实其表达 ;滤膜印记杂交验证其有无自身激活作用。结果 :所构建的载体 pAS2 1 E2 6 6 1双酶切后 ,片段大小正确 ;转入酵母后 ,提取酵母质粒 ,PCR扩增出预期大小的片段 ,Western杂交出现阳性条带 ;滤膜杂交 ,转有 pAS2 1 E2 6 6 1和阴性对照pLAM5 ' 1的酵母菌落没有激活报告基因 ,而GAL4全长的阳性对照菌落变为蓝色。结论 :含有HCVE2 6 6 1的“饵”载体构建正确 ,在酵母细胞中能表达出E2蛋白 ,并且没有自身激活报告基因的功能 ,能够应用于酵母双杂交体系。     

CORRELATIONSHIP BETWEEN CELLULAR DNA AND AgNOR PROTEIN CONTENT IN THE DEVELOPING COURSE OF COLORECTAL ADENOCARCINOMA

谢尧，屈汉廷ＣＯＲＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＢＥＴＷＥＥＮＣＥＬＬＵＬＡＲＤＮＡＡＮＤＡｇＮＯＲＰＲＯＴＥＩＮＣＯＮＴＥＮＴＩＮＴＨＥＤＥＶＥＬＯＰＩＮＧＣＯＵＲＳＥＯＦＣＯＬＯＲＥＣＴＡＬＡＤＥＮＯＣＡＲＣＩＮＯＭＡ￥ＸｉｅＹａｏ；ＱｕＨａｎｔｉｎｇ...     

探讨护理干预对类风湿性关节炎患者疼痛程度的影响

目的:分析对类风湿性关节炎患者实施护理干预对疼痛程度的影响.方法:遴选我院2019年7月-2020年7月接受治疗的96例类风湿性关节炎患者作为探究对象,研究前应用数字双盲法实施分组,组名称为试验组、对照组,分别纳入48例.对照组实施基础护理,试验组实施护理干预,对比两组疼痛情况与护理满意度.结果:对比对照组得知,试验组...     

慢性HBV感染者调节性T细胞水平及Foxp3与CD127表达关系的研究

目的 探讨慢性HBV感染者外周血中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（RegulatoryT,Treg）的水平,并研究其两种细胞标志--CD127分子的低表达与Foxp3转录因子表达之间的关系.方法 采集34例免疫耐受期、26例免疫清除期和31例非活动或低（非）复制期慢性HBV感染者的外周全血,用流式细胞术分析CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋CD127^（low）T细胞的频率.结果 在慢性HBV感染者外周血中,免疫耐受组CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋CD127^（low）T细胞的频率均比非活动或低（非）复制组高（Z=-2.693,P=0.007和t=3.251,P=0.002）;且病毒阳性组（免疫耐受组＋免疫清除组）比非活动或低（非）复制组高（t=2.266,P=0.026和t=3.208,P=0.002）;ALT异常组（免疫清除组）与ALT正常组（免疫耐受组＋非活动或低（非）复制组）之间的比较差异无统计学意义（P〉0.05）.91例病例外周血中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋CD127^（low）T细胞之间的表达有一致性,但两者频率的差异有统计学意义（Z=-4.718,P〈0.001）.结论 调节性T细胞在慢性HBV感染者病毒高复制组中明显升高.CD4^＋CD25^＋T细胞中CD127分子的低表达与Foxp3转录因子的表达有一致性,但前者代表Treg的频率明显高于后者.