脊髓背角P2Y1受体在大鼠骨癌痛形成中的作用

目的 评价脊髓背角P2Y1受体在大鼠骨癌痛形成中的作用.方法 鞘内置管成功的雌性SD大鼠90只,体重150～180 g,随机分为5组(n=18):假手术组(Ⅰ组)、骨癌痛组(Ⅱ组)、假手术+P2Y1受体特异性拮抗剂MRS 2179组(Ⅲ组)、骨癌痛+生理盐水组(Ⅳ组)和骨癌痛+MRS2179组(Ⅴ组).采用胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌细胞的方法制备骨癌痛模型.Ⅲ组和Ⅴ组术后第7～9天鞘内注射MRS2179 100 pmol/10μl,1次/d,Ⅳ组注射等体积生理盐水.于术前及术后第3、7、9、12、15、18天给药后测定机械痛阈,于术后第9天测定机械痛阈后处死6只大鼠,取L4～6脊髓背角,测定P2Y1受体和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)的表达.结果 与Ⅰ组和Ⅲ组比较,Ⅱ组、Ⅳ组和Ⅴ组术后第7～18天机械痛阈降低,P2Y1受体和p-ERK1/2表达上调(P＜0.01);与Ⅱ组和Ⅳ组比较,Ⅴ组术后第9～18天机械痛阈升高,P2Y1受体和p-ERK1/2表达下调(P＜0.01).结论 脊髓背角P2Y1受体参与了大鼠骨癌痛的形成,可能与ERK1/2的激活有关.     

脐动脉血清髓鞘碱性蛋白含量与新生儿脑损伤关系的初步研究

髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein，MBP)是中枢神经系统髓鞘膜主要成分之一，它在髓鞘形成和脑分化发育过程中起着重要作用。当脑组织广泛受损时，脑脊液或血清中都可检测到MBP，并已被认为是一项判断大脑器质性损伤及髓鞘破坏的特异性生化指标，在神经内外科及儿科领域中得到应用。本资料通过检测新生儿脐动脉血清MBP的含量，     

颅内动脉瘤性蛛网膜下腔出血患者脑脊液中NSE和MBP含量测定

神经元特异性烯醇化酶 (ＮＳＥ)和髓鞘碱性蛋白质 (ＭＢＰ)是脑损伤的标志物之一。有关动脉瘤性蛛网膜下腔出血(ＳＡＨ)后患者脑脊液 (ＣＳＦ)或血清中ＮＳＥ和ＭＢＰ含量与其病程的发展及预后关系的报道不多。我们对 2 8例动脉瘤性ＳＡＨ患者脑脊液中ＮＳＥ、ＭＢＰ含量进行了检测 ,现报道如下。资料与方法1.病例。选择 2 8例收入我科治疗并经ＣＴ、脑血管造影及术中证实的颅内动脉瘤破裂致ＳＡＨ的患者 ,其中男 17例 ,女 11例 ,年龄 45～ 6 6岁 ,平均 5 8 42岁。全部患者均于发病后 3ｄ内入院。其中颈内动脉瘤 13例 ,前交通动脉瘤 11例 ,…     

3种脂质体介导法转染大鼠小胶质细胞的比较研究

目的以LipofectamineTM2000为对照,研究GenEscort^TMⅠ和GenEscort^TMⅢ在大鼠小胶质细胞中的转染效率及毒性。方法分别采用LipofectamineTM2000、GenEscort^TMⅠ和GenEscort^TMⅢ为载体,转染绿色荧光蛋白（GFP）标记的siRNA进入大鼠小胶质细胞。计算转染效率。采用磺基罗丹明B法（SRB）分析转染试剂对细胞的毒性,并研究细胞传代次数、接种密度、脂质体与siRNA的比例及脂质体-siRNA复合物形成时间等对脂质体转染效率的影响。结果 2～3次细胞传代,接种密度为1×105（24孔板）、脂质体与siRNA比例为1∶2.5、脂质体-siRNA复合物形成时间分别为30 min或15 min,转染效率最高。3种不同脂质体介导的GFP-siRNA转染的大鼠小胶质细胞内均有GFP表达,其最佳转染比例下转染效率比较为LipofectamineTM2000组〉GenEscort^TMⅠ组〉GenEscort^TMⅢ组（P〈0.01）;3种转染剂的细胞毒性比较为Lipofectamine^TM2000组〉GenEscort^TMⅠ组〉GenEscort^TMⅢ组（P〈0.01）。结论阳离子脂质体GenEscort^TMⅠ比Lipofectamine^TM2000细胞毒性低,转染效率可,是一种更为理想的小胶质细胞基因转染载体。     

内源性脑源性神经生长因子在骨癌痛大鼠中的作用及其脊髓机制

目的 探讨脑源性神经牛长因子(BDNF)及其下游磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)在骨癌痛中的作用及其脊髓机制.方法 雌性SD大鼠60只,随机分为5组(n=12),Ⅰ组为模型对照组,Ⅱ组为骨痛痛组,Ⅲ组为模型对照组+BDNF中和抗体,Ⅳ组为骨痛痛组+IgG对照抗体;Ⅴ组为骨癌痛组+BDNF中和抗体.Ⅱ、Ⅳ和Ⅴ组于大鼠左胫骨上端注入Walker256 细胞,制备骨痛痛模型;模型对照组大鼠左胫骨上端注入Hank's液.造模后第7～9天,Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组鞘内分别注射BDNF中和抗体、IgG对照抗体和BDNF中和抗体15μg/10μl,1次/d,连续3 d.分别于术前及术后隔日开始测定大鼠Von-Frey阈值,并测定脊髓后角的BDNF和p-ERK1/2表达水平.结果 BDNF和p-ERK1/2在脊髓后角有共表达;术后第6～18天,与Ⅰ组比较,Ⅱ、Ⅳ组Von-Fray阈值显著下降;术后第9天,脊髓BDNF和p-ERK1/2的蛋白表达显著增加(均P<0.01);Ⅲ组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05);与Ⅱ、Ⅳ组比较,Ⅴ组Von-Frey阈值显著增高,脊髓BDNF和p-ERK1/2的蛋白表达显著减少(均P<0.01).结论 内源性BDNF可能通过其下游的p-ERK1/2信号转导途径参与了骨癌痛大鼠痛觉过敏的形成.

Abstract：

Objective To investigate the role of brain-derived neurotrophic factor(BDNF)in pain facilitation and spinal mechanisms in the rat model of bone cancer pain.Methods The bone cancer pain model was developed by inoculated Walker 256 mammary gland carcinoma cells into the tibia medullary cavity.Sixty SD female rats were divided into 5 groups(n=12 each)randomly;group Ⅰ:contrrol group (sham operation);group Ⅱ;model group;group Ⅲ:control group+anti-BDNF intrathecal(i.t.);group Ⅳ:modeI group+control IgG i.t.;group Ⅴ:model group+anti-BDNF i.t..Anti-BDNF or control IgG was injected i.t. during 7 to 9th day.Von-Frey threshold was measured one day before operation and every 2 days after operation.On the 9th day after threshold tested,rats were sacrificed after i.t. injection of either antiBDNF or control IgG,the lumbar 4-6 spinal cord was removed.The expression of the spihal BDNF and the phosphorylation of extracellular signal-regulated protein kinase1/2(p-ERK1/2)were detected by immunohistochemistry assay and Western-Blot.Co-expression pattern of BDNF and p-ERK1/2 were determined by double-labeling immunofluorescence.Results We demonstrated the coexistence of BDNF and p-ERK1/2 in the spinal cord of rats. From the 7 to 9th day after operation,von-Frey threshold in groups Ⅱ and Ⅳ was significantly lower than that in group Ⅰ and group Ⅴ(P<0.01),group Ⅴ was remarklv higher than that in group Ⅳ(P<0.01).'The spinal BDNF and p-ERK1/2 expression in group Ⅱ or Ⅳ were significantly increased compared with that in group Ⅰ or Ⅴ(P<0.01),intrathceal anti-BDNF was significantly suppressed BDNF and P-ERK1/2 expression(P<0.01).Conclusion BDNF and p-ERK1/2 was coexistence in the spinal cord of rats,and it maybe involved in the bone cancer pain.     

骨癌痛大鼠脊髓背角T细胞死亡相关基因8表达的变化

目的 探讨骨癌痛大鼠脊髓背角T细胞死亡相关基因8(TDAG8)表达的变化.方法 雌性未交配SD大鼠224只,体重150～ 180 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组:正常对照组(Ⅰ组,n＝64)、生理盐水组(Ⅱ组,n＝64)和骨癌痛组(Ⅲ组,n＝96).采用左侧胫骨骨髓腔内接种Walker256乳腺癌肿瘤细胞的方法建立骨癌痛模型.Ⅲ组于接种前1天(基础状态)及接种后第1、3、6、9、12、15、18天、Ⅰ组和Ⅱ组于相应时点取8只大鼠,测定左后肢机械缩足阈值(MWT).Ⅲ组于接种前1天(基础状态)及接种后第6、9、12、15、18天各处死16只,Ⅰ组和Ⅱ组相应于接种后第18天处死16只,取L4～6脊髓,免疫组化染色法测定脊髓背角TDAG8阳性细胞计数,实时定量PCR法检测脊髓TDAG8 mRNA的表达.结果 与Ⅰ组及基础值相比,Ⅲ组接种后第6～ 18天MWT降低,脊髓背角TD-AG8阳性细胞计数升高,脊髓TDAG8 mRNA表达上调(P<0.01),Ⅱ组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 骨癌痛大鼠脊髓TDAG8表达上调,该变化可能是骨癌痛形成的机制.     

动脉瘤性蛛网膜下腔出血并发脑血管痉挛患者血清血管内皮生长因子表达的变化

目的:探讨动脉瘤性蛛网膜下腔出血(SAH)并发脑血管痉挛(CVS)与血清血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系.方法:27例动脉瘤性SAH患者为试验组(SAH组),再依据是否并发不同程度CVS分为:无CVS亚组(11例),轻度CVS亚组(9例)、中度CVS亚组(4例)和重度CVS亚组(3例);另设10名健康体检者为对照组.采用ELISA法检测血清VEGF水平.结果:SAH各时间点各组血清VEGF水平为①SAH组发病第1天起即明显高于对照组;②无CVS组不增高.SAH后第1、3、5、7天时血清VEGF水平为①轻度CVS组与中度CVS组相同时间点比较,差异无统计学意义;②重度CVS组明显高于轻度和中度CVS组.SAH后出现脑梗死患者血清VEGF水平明显高于未出现脑梗死患者.结论:SAH后出现CVS患者和出现脑梗死的患者血清VEGF水平明显增高,血清VEGF水平能反映脑血管痉挛的程度.     

替莫唑胺诱导的人脑胶质瘤耐药细胞系的建立及其耐药性逆转

目的建立对替莫唑胺(temozolomide,TMZ)耐药的胶质瘤细胞系并探讨其逆转方式。方法通过体外分步诱导法使人脑胶质瘤U251细胞对TMZ产生耐药性;利用细胞集落形成实验检测U251/TR的耐药指数;采用MTT法检测O6-BG对TMZ的细胞毒反转效应。结果历经6个月建立了对TMZ耐药的U251/TR,在0.25~16μg/mlTMZ培养液中,其细胞形成相对率是未诱导组U251细胞的4~11倍;U251/TR对TMZ的耐药指数约为4;MGMT抑制剂O6-BG可明显增加TMZ对耐药系的细胞毒作用。结论通过分步诱导法在体外建立了一株对TMZ耐药的细胞系,其耐药性可被O6-BG成功地逆转成药敏细胞。     

抗癌药敏感性测试的实验研究与临床初步应用

以~3H～TdR掺入量作为观察9种市售抗癌药和本室制备的抗人脑胶质瘤免疫导向药的敏感性和毒副作用指标,对荷瘤裸小鼠进行实验研究,结果认为市售抗癌药可分为高效低毒、有效有毒和无效有毒三类,免疫导向药具有高效低毒的特点。在此基础上对临床患者进行了初步药敏试验。     

NKCF检测在疾病诊断中的应用

报告用MIT比色法观察了恶性肿瘤、SLE、哮喘等疾病患者的NKCF活性,并与经PHA刺激的淋巴细胞~3H—TdR 掺入量(cpm)和刺激指数(SI)对比。结果;(1)三类恶性肿瘤患者的NKCF 活性比正常值明显降低,而他们的淋巴细胞cpm 和SI 则与正常值无显著差异;(2)SLE 组NKCF 活性显著下降,而淋巴细胞cpm 和SI 有所上升;(3)哮喘患者的NKCF 活性无明显改变,而淋巴细胞cpm 和SI 升高。结果表明,NKCF 活性检测对恶性肿瘤和SLE 有辅助诊断价值。