抗血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体检测循环抗原及/或免疫复合物的实验研究

本文报告用单克隆抗体检测血吸虫感染兔血清中循环抗原及/或免疫复合物的实验结果.以血吸虫成虫盐水浸液抗原ACSE免疫BALB/c小鼠,取其脾脏与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得抗成虫表膜的单克隆抗体8SE_4。此抗体经DE_(52)柱层析提纯后制成HRP-8SE_4结合物.血清样本与HRP-8SE_4作用后加入PEG(mw·6000)沉淀免疫复合物,然后加入底物OPD显色,于492nm读数,OD值即反映血循环中抗原及/或免疫复合物的量。实验结果表明5只重感染兔(接种尾蚴15O0～2000条)于感染后6wk可见OD值明显升高,达到感染前的1.9～4.5倍。5只轻感染兔接种尾蚴10～500条亦于感染6wk后OD值明显上升,至感染后8wk达高峰,此后至11wk剖杀时仍维持在较高水平.5轻感染兔检虫数为4～326条,未见虫荷与检测结果有明显相关。本实验结果提示感染兔血清中有循环表膜抗原及/或其复合物存在。至于检测该抗原能否用于考核治疗效果,有待进一步研究。     

二种快速ELISA用于检测囊虫病患者血清特异性抗体的实验观察

用快速ＩｇＧ－ＥＬＩＳＡ和快速ＳＰＡ－ＥＬＩＳＡ检测囊虫病人血清抗体，其阳性率分别为９０．００％和９４．２９％，两虫之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。两法假阴性率分别为１．４３％和２．８６％，对包虫病人血清出现较强交叉反应，对肝吸虫、肺吸虫病人血清出现一定程度的交叉反应，而对血吸虫病人、绦虫病人血清未出现交叉反应。若两种方法同时使用可提高敏感性。两种方法均较简便，在包虫病非流行区可作为较好的流行病学调查筛检方法，亦可用于临床     

血吸虫病兔疫诊断研究进展

血吸虫病免疫诊断自本世纪50年代以来有了很大发展.可以说,所用抗原涉及血吸虫生活史中各个时期;所用方法包括了补体结合、间接血凝、胶乳凝集、凝胶电泳(或扩散)、间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、放射免疫测定以及环卵沉淀试验等.免疫诊断的依据长期来主要为检测特异抗体.由于抗体在宿主体内长期持续存在,甚至经过有效治疗后粪便中已找不到虫卵,抗体仍长期不能消失,因此不能用于区分活动性感染和既往感染,也无法反映治疗的效果.而检测循环抗原则可弥补上述之不足.因此许多学者对之竞相研究,特别是引入单克隆抗体技术,使得检测的敏感度和特异性都有显著提高.     

细粒棘球蚴实验感染鼠体液免疫动态的初步结果

采用胶乳凝集试验(LA)、酶联免疫电转移印斑试验(EITB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、斑点-ELISA试验(Dot-ELISA)以及免疫荧光试验(IFA)5种免疫血清学方法,对细粒棘球蚴实验感染鼠的抗体进行了动态观察,结果表明这5种检测方法均能检出抗体,其中以Dot-ELISA及IFA最敏感,于感染后2周即有部分鼠测到抗体。ELISA、EITB和LA出现阳性反应的时间依次为4周、2月和3月。感染8月及1年的病鼠全部阳性,而对照鼠则全部阴性。     

棘球蚴特异性抗原的蛋白质印迹分析

目的　寻找细粒棘球蚴 (Eg)和多房棘球蚴 (Em)特异性抗原组分用于免疫诊断。　方法　对Eg、Em的囊液、原头节、囊壁角质层、囊壁生发层及犬泡状带绦虫、犬豆状带绦虫、羊细颈囊尾蚴、猪囊尾蚴等 4种异源性绦虫 ,共14种粗抗原进行免疫学分析。采用蛋白质印迹试验 (Western blotting)、Genesnap和Genetool分析软件比较分析不同抗原蛋白条带分别与囊型棘球蚴病 (CE)及泡型棘球蚴病 (AE)患者血清反应的差异。　结果　 14种粗抗原中与CE、AE患者血清发生交叉反应的 11条蛋白条带相对分子质量 (Mr)为 130000、100000、94000、80000、75000、66000、62000、52000、38000、32000及 24000 ;与CE患者血清有特异性反应的 5条蛋白条带Mr为 41000、40000、22000、160 00和12000 ;与AE患者血清具有特异性反应的 8条蛋白条带Mr为 120000、109000、86000、59000、43000、28000、20000及 18000。　结论　确定了Eg和Em共有的交叉反应性抗原和具有进一步研究价值的特异性抗原组分 ,为进一步分离和鉴定具有诊断价值的特异性抗原提供了基础资料     

抑制血吸虫排卵对实施感染兔循环表膜抗原检测的…

目的：了解循环表膜抗原阳反应与血吸虫雌虫排卵的关系。方法：用新西兰兔１５只，各经肤接种日本血吸虫尾幼２５０条，于感染后不同时间口服丙烯基硫脲，对比感染前、后逐周血中用斑点－ＥＬＩＳＡ法测出的循环表膜抗原。结果：第一组兔感洒１９天后开始口服丙烯基硫脲２９５－５９０ｍｇ／ｄ，每周连续喂药３天直至感染后第８ｗｋ，循环表膜抗原始终为阴性。第二组兔于第４６５天起服同剂量，感染后６ｗｋ时斑点－ＥＬＩＳＡ呈阳性     

日本血吸虫成虫RNA CHOMCZYNSKI法快速分离纯化

应用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法抽提日本血吸虫成虫RNA,能够在数小时内抽提出完整的成虫RNA。此法对于分离数量很少的寄生虫材料中的RNA尤为有效。通过对日本血吸虫成虫RNA变性琼脂糖凝胶电泳分析,发现其核糖体大亚基RNA(L-rRNA)体内切口(in vivo nick)现象的存在。并随核糖体小亚基RNA(S-rRNA)一道电泳迁移。反映了L-rRNA的后转录加工。     

我国4省、自治区细粒棘球绦虫DNA限制性片段长度多态性分析

运用 DNA探针pHD5、pEG18、pSM889 结合 Southern blot 杂交技术对采自我国新疆、青海、甘肃和宁夏等地的羊源细粒棘球蚴与采自青海、甘肃的牦牛源细粒棘球蚴进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析。结果表明我国这些省、自治区采集的羊源细粒棘球蚴彼此之间未见有明显而稳定的杂交条带差异,属于同一虫株。青海和甘肃两省牦牛源细粒棘球蚴彼此之间也未见明显而稳定杂交条带差异,据杂交图谱判断似与羊源细粒棘球蚴属同一虫株。     

几种猪囊尾蚴抗原用于EITB法诊断囊尾蚴病的观察

本研究对囊液10000g和100000g离心后的上清、头节抗原、全囊抗原及头节尿素溶解性抗原等5种抗原进行SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳。考马斯亮蓝染色依次出现10、10、13、14和5条显色带，银染结果依次出现20、20、21、21和13条显色带。分子量范围为＜6.6kDa－＞116kDa。选择囊液100000g（以下简称囊液）、全囊和头节尿素等3种抗原对105份各类血清进行酶联免疫电转移印斑（EITB）检测。结果囊尾蚴病患者血清与3种抗原反应可出现1－13条反应带，分子量范围6.6kDa－＞116kDa。如以≤21.5kDa条带作为判断标准，则囊液抗原、全囊抗原和头节尿素抗原的阳性率依次为54％、48％及58％，假阳性率依次为6％、10％及0％。头节尿素抗原对血吸虫、华支睾吸虫和肺吸虫病患者血清未出现交叉反应，10例包虫病患者血清中有2例出现交叉反应。     

中国与日本不同地域品系日本血吸虫蛋白组分的SDS-PAGE和EITB分析

目的： 补充观察我国浙江、江西、台湾省和日本山梨的日本血吸虫成虫的蛋白组分, 以及上述４ 地和安徽、湖北、四川、云南省血吸虫与广西省钉螺和日本钉螺抗血清的反应性。方法： 采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳 （ＳＤＳ－ＰＡＧＥ） 和酶联免疫电转移印迹 （ＥＩＴＢ） 分析。结果与结论： 浙江、江西、台湾省和日本的血吸虫隔离群雄虫及雌虫抗原经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后, 以考马斯亮蓝染色结果分别可见７～１７ 条（江西省和日本的血吸虫雄虫条带显色很淡） 及１～６ 条显色带;银染结果分别可见１４～２３条及４～１９ 条（台湾省的血吸虫雌虫仅见１条极淡的）显色带。台湾省血吸虫雄虫与浙江省血吸虫雄虫谱型相似, 但在８１ ｋＤａ以上组分有所不同, 江西省血吸虫雄虫５４ｋＤａ 条带明显, 日本的血吸虫雄虫不仅条带少, 谱型也与浙江、江西及台湾省的血吸虫各异。ＥＩＴＢ结果： 所试血吸虫成虫与广西省钉螺和日本的钉螺抗血清均产生反应, 证明存在交叉反应抗原组分。所试血吸虫成虫与广西省钉螺和日本的钉螺间存在共同抗原组分。