胆囊黏膜ABCG5和ABCG8与胆囊胆固醇息肉关系的研究

目的:研究胆囊黏膜ABCG5和ABCG8的基因表达与胆囊胆固醇息肉发病的关系.方法:收集63例因胆囊疾患而行腹腔镜胆囊切除术患者的胆石、胆汁及部分胆囊黏膜组织,其中胆囊胆固醇息肉32例,胆囊胆固醇结石18例,对照13例(胆囊腺瘤6例,非胆固醇胆囊结石7例),分别测定胆石胆固醇含量,胆汁胆固醇、胆汁酸、磷脂的浓度,实时定量PCR检测胆囊黏膜ABCG5和ABCG8的mRNA表达.结果:胆固醇息肉组胆汁胆固醇饱和指数较对照组明显增高(P<0.01),结石组胆囊黏膜ABCG5和ABCG8的表达量较息肉组和对照组显著增高,息肉组和对照组ABCG5和ABCG8的表达量差异无统计学意义(P>0.05).结论:胆囊黏膜ABCG5/ABCG8 mRNA的相对低水平表达,可能是导致胆囊胆固醇息肉发病的重要因素之一.     

STK15和ki67基因在胃癌组织中的表达研究

目的研究丝氨酸/苏氨酸激酶15 (STK15)基因在胃癌组织中的表达,及其与临床病理指标以及ki67表达的关系.方法采用免疫组化检测STK15和ki67在89例胃癌组织中的表达.结果 STK15在胃癌组织中的表达阳性率为34.83%(31/89),显著高于邻近的非癌组织的4.49%(12/89)(P<0.01);STK15基因过表达与分化型胃癌及其侵润深度密切相关(P<0.05),而与ki67的表达无相关性.结论 STK15基因可能在胃癌发生、发展中起相应作用,其过表达程度可作为胃癌的某些生物学行为新的判定指标.     

保罗样激酶1mRNA及蛋白质在胃癌中的表达意义

目的 探讨保罗样激酶1（plk1）在胃癌组织中mRNA及蛋白质的表达，并探讨其表达水平与临床病理指标的关系。方法 采用实时定量多聚酶链反应及免疫印迹（Western blot）分别检测了60例胃癌患者新鲜切除胃癌组织及其对应正常胃粘膜组织中plk1 mRNA及蛋白质的表达。结果胃癌组织中plk1 mRNA及蛋白质水平均明显高于正常组织（P〈0．05，P〈0．01）；并且其水平与胃癌的分化程度和浸润深度有关（P〈0．05）；蛋白质表达水平与胃癌的分化有关（P〈0．05）。结论 plk1的过表达可能在胃癌发生发展中起促进作用；其表达程度可望作为胃癌的某些生物学行为新的判定指标。     

低分化胃癌患者血清中相关标志物的筛查和鉴定

目的 初步探讨蛋白质组技术在血清研究中的应用，建立低分化胃癌患者血清和健康者血清双向凝胶电泳图谱；筛查并鉴定低分化胃癌患者血清和健康者血清中的差异表达蛋白质，期望从中发现有意义的胃癌分子标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离低分化胃癌患者血清和健康者血清总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的血清双向凝胶电泳图谱；鉴定得到6个仅在胃癌组血清中表达的蛋白质和4个仅在对照组血清中表达的蛋白质。结论 在低分化胃癌患者血清与健康者血清中存在差异表达蛋白质，利用蛋白质组学这一高通量的筛查技术可望从中发现与低分化胃癌相关的标志物。     

胆囊胆固醇息肉和胆囊结石发病关系的研究

目的 探讨胆囊胆固醇息肉和胆囊结石的发生关系.方法 选择2008年4～9月上海交通大学医学院附属瑞金医院外科微创中心行腹腔镜胆囊切除术病人62例,分别收集病人的胆石、胆汁及胆囊壁全层组织,其中胆固醇息肉31例,胆固醇胆囊结石18例,对照组13例.入院后上午餐前及餐后1h行B超胆囊三径测量,计算胆囊排空率对比显示胆囊功能.测定结石胆固醇含量及胆汁胆固醇、磷脂、胆汁酸浓度,胆囊壁组织做病理检查.结果 胆固醇息肉组病人平均胆囊排空率为(47.3±18.6)%.较健康成人平均胆囊排空率(71.7±8.1)%明显降低,其差异有统计学意义(P<0.01),而胆固醇息肉组和胆固醇结石组病人平均胆囊排空率(47.6±23.7)%比较,差异无统计学意义.胆固醇息肉组胆汁胆固醇饱和指数为(1.0±0.2),较对照组胆固醇饱和指教(0.6±0.3)明显增高,其差异有统计学意义(P<0.01),而胆固醇息肉组和胆固醇结石组胆固醇饱和指数(1.0±0.2)比较,差异无统计学意义.31例胆固醇息肉病人中,合并胆囊结石13例,结石发病率为41.9%.结论 胆囊胆固醇息肉的存在可以促使胆囊结石形成.     

Megalin基因在胆固醇结石病患者胆囊黏膜中的表达及调控

目的 探讨Megalin基因在胆囊黏膜中的表达和调控与胆固醇结石病的关系.方法 采集29例胆囊胆同醇结石病患者和12例无胆石对照患者的胆囊黏膜、囊壁、胆汁、胆石.测定胆石、胆汁脂质,实时PCR检测胆囊黏膜Megalin、Cubilin基因的表达.在胆囊癌细胞株GBC-SD培养液中,分别给予核受体激动剂T0901317、9-顺维甲酸、鹅脱氧胆酸,检测Megalin、Cubilin基因的差异表达.结果 胆汁胆固醇摩尔百分比和饱和指数显著高于对照组[(7.98±0.44)t001%比(4.87±0.39)mol%,P<0.01],胆石组中Megalin的mRNA表达(17.27%±3.15%)显著高于对照组(5.84%4±1.25%,P<0.05).Cubilin的表达在两组间差异没有统计学意义.体外给予法尼醇X受体(FXR)的激动剂鹅脱氧胆酸能够诱导Megalin表达的显著上调.结论 胆固醇结石病的胆囊黏膜Mcgalin基因表达增强,有利于胆囊对胆固醇的吸收;Megalin的表达可能受到法尼醇X受体的调控.     

Sulfone通过转录因子Elk1调节人结肠癌细胞XAF1表达的研究

背景:Sulfone是一个高效的结肠肿瘤化学预防制剂,具有抗肿瘤功能,但其具体作用机制尚未完全明确。目的:探讨Sulfone在转录水平调节X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)表达的作用机制。方法:以Sulfone干预人结肠癌细胞株HCT116,以蛋白质印迹法检测磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、XAF1和ERK1/2表达;构建稳定转染pLuc-291质粒以及pLuc-291-18T、pLuc-291-70T、pLuc-291-IRFm质粒的HCT116细胞(分别为转录因子Elk1、c-ETS、IRF结合序列点突变),以荧光素酶报告基因检测Sulfone对XAF1启动子转录活性的调节作用;以染色质免疫沉淀法检测Elk1-XAF1的DNA结合活性;以实时定量PCR检测Elk1 siRNA对XAF1 mRNA表达的影响。结果:Sulfone可显著抑制pERK1/2表达,显著上调XAF1表达。XAF1启动子Elk1结合序列点突变能显著增加Sulfone诱导的XAF1启动子转录活性,而c-ETS和IRF结合序列点突变对Sulfone诱导的XAF1启动子转录活性无明显影响。XAF1启动子区域存在Elk1的特异性结合序列。以Elk1 siRNA抑制Elk1表达能显著增高XAF1mRNA表达。结论:Sulfone通过抑制ERK1/2信号通路下游转录因子Elk1活性,在转录水平上调人结肠癌细胞XAF1表达。     

抗体偶联药物维迪西妥单抗对HER-2不同表达水平胃癌细胞抑制效应的体外研究

目的 评估抗体偶联药物维迪西妥单抗(RC48)对不同HER-2蛋白表达水平胃癌细胞的体外抑制效应。方法 使用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting技术结合细胞免疫荧光共聚焦显微镜，检测胃癌细胞系(NCI-N87、MKN45、MKN7、HGC27、MGC803)HER-2表达情况及细胞定位。随后对上述不同HER-2表达程度的细胞系分别经不同浓度RC48处理，CCK-8技术检测杀伤效应并计算半数抑制浓度(IC₅₀),采用qRT-PCR和Western blotting技术检测胃癌细胞经RC48处理后，不同胃癌细胞株的HER-2 mRNA及蛋白质表达情况。结果 所检测的胃癌细胞系中，NCI-N87细胞的HER-2表达量最高，其余细胞系均呈HER-2低表达，荧光共聚焦显示HER-2蛋白主要为细胞膜定位。RC48在体外可明显抑制HER-2强阳性胃癌细胞(NCI-N87)增殖，48 h及72 h的IC₅₀分别为0.32μg/ml及2.359e^-010μg/ml,该效应呈现明显的剂量依赖性和时间依赖性；...     

胆囊结石病人成纤维细胞生长因子-19的血浆含量及胆囊黏膜表达特点

目的:检测胆囊结石病人成纤维生长因子-19(fibroblast growth factor-19,FGF-19)的血浆含量及其在胆囊黏膜的表达量,探讨FGF-19与胆囊舒张收缩功能的关系。方法:对27例胆囊结石病人(男9例,女18例,平均年龄48.5岁),采用实时定量PCR法检测胆囊黏膜FGF-19 mRNA的表达量。采用酶联免疫吸附法测定空腹及脂餐后1.5 h、3.0 h血浆FGF-19的含量。B超检查胆囊收缩功能。结果:按脂餐后1.5 h胆囊排空率(ejection fraction,EF)将胆石病人分为胆囊收缩正常组(EF>60%,n=5),收缩减弱组[EF(30~60)%,n=15]和未收缩组(EF<0.05。结论:部分胆石病人存在胆囊收缩和舒张功能障碍。血浆FGF-19含量变化可反映胆囊收缩和舒张功能异常。     

胃癌中高表达的miR-21对胃癌细胞生物学行为的影响

目的:研究miR-21在胃癌中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:通过实时荧光定量PCR检测30例胃癌手术切除组织和周围正常组织中以及10株胃癌细胞中miR-21的表达情况。通过CCK8法、Annexin-Ⅴ+PI、流式细胞仪检测、划痕实验,观察过表达miR-21对胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移等生物学行为的影响。结果:定量real-time PCR结果显示miR-21在胃癌组织中高表达(P0.05),miR-21过表达细胞株增殖能力增强,与阴性对照组和空白对照组对比差别具有统计学意义(P<0.01),miR-21转染细胞划痕愈合速度较对照组快。结论:miR-21在胃癌中呈高表达,过表达miR-21可以促进BGC-823胃癌细胞的增殖能力和迁移能力,但对凋亡和细胞周期影响不明显。