胆固醇结石患者胆道系统幽门螺杆菌研究

为探讨胆固醇结石病与幽门螺杆菌的关系。笔者对23例胆囊胆固醇结石患者及7例对照者进行C13呼气试验和血清幽门螺杆菌IgG抗体检测。胆汁和胆囊黏膜标本接种于微需氧和厌氧培养基培养。采用巢式多聚酶链反应(PCR)技术扩增幽门螺杆菌特异的Ure A基因。结果示胆固醇结石组C13呼气试验阳性5例，占21.74%（5/23），对照组1例，占14.29%（1/7），两组间差异无显著性（P>0.05）。胆固醇结石组血清幽门螺杆菌Ig G抗体平均含量(63.49±26.81)U/mL，高于对照组的(43.37 ± 32.99)U/mL，但差异无显著性（P>0.05）。两组幽门螺杆菌培养和PCR检测结果均为阴性。本研究未在胆固醇结石病标本中检测到幽门螺杆菌，两者的关系不能确定。     

肝脏X受体对小鼠胆汁脂质成分与胆固醇代谢基因表达的影响

目的 通过激活小鼠肝脏X受体,观察胆汁脂质成分变化与胆固醇代谢相关基因的表达情况,观察肝脏X受体在胆石病发生中的作用.方法 C57BL小鼠18只,分为2组,分别管饲肝脏X受体激动剂T0901317和安慰剂.分析胆汁脂质成分.实时定量PCR法测定肝脏与腹腔巨噬细胞的胆固醇代谢相关基因mRNA表达量.结果 实验组胆汁胆固醇摩尔百分比较对照组升高89%.实验组肝脏组织Abcg5、Abcg8、Abca1与Srebp1表达显著高于对照组:Abcg5为2.96±0.55比1.10±0.22(P＜0.01);Abcg8为0.86±0.16比0.29±0.07(P＜0.01);Abca1为8.45±1.06比5.51±0.84(P＜0.05);Srebp1为14.08±3.18比3.06±0.74(P＜0.01).腹腔巨噬细胞Abca1表达实验组高于对照组(27.66±7.18比8.39±3.65,P＜0.05).结论 肝脏X受体激活使胆固醇逆转运增强,肝脏摄取的过多胆固醇通过胆汁清除,导致胆汁胆固醇含量升高,提示肝脏X受体在胆石病发生中有重要作用.     

PDZK1对成石喂养小鼠肝脏SRB1调节作用的研究

目的 :研究成石饲料对小鼠肝脏脂质代谢相关基因表达的影响,以及PDZK1(PDZ domain-containing 1)的表达对B族Ⅰ型清道夫受体(scavenger receptor B type 1,SRB1)的调节作用。方法:以成石饲料喂养C57BL/6J雄性小鼠,观察肝脏基因表达的影响。分别构建小鼠PDZK1基因过表达慢病毒载体和Si RNA干扰腺病毒载体,并以成石饲料喂养C57BL/6J小鼠。分别采用实时定量PCR检测小鼠肝脏脂质代谢相关基因的m RNA表达,Western印迹法检测肝脏PDZK1及SRB1的蛋白质表达。结果:成石饲料喂养4周后,小鼠肝脏胆固醇合成关键酶3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A还原酶基因表达显著增加(P<0.01)、胆汁酸合成关键酶胆固醇7α-羟化酶基因表达显著下降(P<0.001);PDZK1基因的表达显著抑制,SRB1基因表达相应降低(P<0.001)。PDZK1过表达慢病毒载体经腹腔注射成石饲料喂养的小鼠,4周后肝脏PDZK1蛋白表达增加37%(P<0.01),SRB1在总蛋白的表达量未改变,但在膜蛋白中表达增加136%(P<0.05),SRB1在总蛋白中表达增加60%(P<0.05),但在膜蛋白中的表达则下降14%。结论:成石饲料影响小鼠肝脏脂质代谢相关基因的表达。SRB1表达降低可能与PDZK1的抑制有关。干预小鼠肝脏PDZK1的表达会影响SRB1在肝细胞膜上的表达。     

SerpinB5能促进胃癌细胞株的恶性倾向

目的 了解SerpinB5在胃癌细胞株中的表达水平,探讨SerpinB5在胃癌发生发展中的作用.方法 实时定量PCR检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞株中SerpinB5的表达水平;化学合成小片断干扰RNA(siRNA)下调胃癌细胞株SerpinB5的表达;实时定量PCR及免疫印迹检测干扰前后SerpinB5 mRNA及蛋白质表达的变化;MTT 法、软琼脂克隆形成实验和体外Matrigel侵袭实验观察SerpinB5减敲后胃癌细胞株生物学行为的改变.结果 SerpinB5在胃癌细胞株中的表达水平显著升高;经SerpinB5特异的siRNAmix作用后,SerpinB5 mRNA及蛋白质表达明显下降;减敲SerpinB5后,胃癌细胞株HTB103的生长能力、克隆形成能力和侵袭能力均显著降低.结论 SerpinB5的表达水平在胃癌细胞株中显著升高;SerpinB5在胃癌的发生发展中起促进作用.     

胃癌蛋白质组学研究中双向凝胶电泳技术的优化

目曲优化应用于胃癌蛋白质组学研究的双向凝胶电泳技术。方法利用双向凝胶电泳技术分离正常胃黏膜和胃癌组织中的蛋白质。比较不同蛋白提取方法（机械匀浆＋TCA沉淀法，碾磨＋丙酮／TCA沉淀法）、不同最高聚焦电压、不同样本上样量以及不同pH值范围固相pH梯度胶条对双向凝胶电泳结果的影响。结果机械匀浆＋TCA沉淀法得到的蛋白质点较多，但电泳图谱中出现大量横纹，对电泳图后期分析的干扰相对严重；碾磨＋丙酮／TCA沉淀法则能达到最高聚焦电压，上样量少，使用pH5-8固相pH梯度胶条获得可分辨的蛋白质点数最多且效果较好。结论对胃癌组织、正常胃黏膜组织的全蛋白抽提方法和电泳条件进行了优化。     

肝脏X受体α对肝细胞HepG2胆固醇代谢基因表达的调控

目的:研究肝细胞X受体α(liver X receptorα,LXRα)基因对HepG2肝细胞胆固醇代谢相关基因表达的调控作用。方法:将特异性LXRα小片段干扰RNA(siRNA)经脂质体Lipofectamine 2000介导转染人HepG2肝细胞,同时行HepG2肝细胞LXRα的激动(T0901317)实验,采用实时定量PCR方法分别测定干扰和激动前后的LXRα以及胆固醇代谢相关基因ATP结合盒(ABC)G5、ABCG8、ABCA1 mRNA的表达。结果:LXRαsiRNA干扰24h后,HepG2实验组LXRα mRNA相对表达量显著低于阴性对照组(P0.05)。HepG2加入激动剂(T0901317)48h后,实验组ABCG8和ABCA1基因表达均显著升高(P0.05)。结论:RNA干扰使HepG2肝细胞LXRα表达受抑制,继而有使靶基因ABCG5、ABCG8、ABCA1表达降低趋势;人工合成配体T0901317与LXRα结合,使其活性增加,上调了ABCG8、ABCA1和ABCG5 mRNA的表达。提示LXRα可调控HepG2肝细胞的胆固醇代谢基因。     

右旋氨基酸氧化酶在胃癌和正常胃黏膜细胞中的表达

目的:研究右旋氨基酸氧化酶(DAO)在胃癌和正常胃黏膜细胞中的表达. 方法:以裸鼠肝、肾组织为对照,采用定量PCR法,检测7株胃癌细胞和胃黏膜细胞株GES-1中DAO的表达.用RT-PCR法检测46份新鲜胃癌组织和正常胃黏膜组织标本中DAO的表达. 结果:DAO在裸鼠肝和肾组织中有表达,在肾组织中表达量较高;7株胃癌细胞和正常胃黏膜细胞株GES-1中均无DAO表达;除1份胃癌组织标本中DAO有表达外,其余胃癌组织和正常胃黏膜组织中均无DAO表达. 结论:胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中均无DAO表达,右旋甲硫氨酸替代左旋甲硫氨酸用于胃癌的营养治疗,可避免甲硫氨酸饥饿对肝、肾等重要器官的不利影响.     

丝氨酸/苏氨酸激酶15基因沉默诱导胃癌细胞凋亡

目的 观察丝氨酸／苏氨酸激酶15基因（STK15）沉默后对胃癌细胞MKN45凋亡的诱导作用，阐述STK15基因对胃癌细胞生存的关键作用。方法 化学合成小片断干扰RNA（siRNA）抑制MKN45细胞STK15基因的表达；实时定量PCR及Western印迹检测STK15mRNA及蛋白质表达的变化；流式细胞仪检测MKN45周期分布及凋亡的变化；Hoechest染色观察凋亡形态变化，Western印迹检测pro-caspase3水平的变化。结果 经靶向STK15的siRNA作用48h后，STK15siRNAmRNA及蛋白质表达明显下降；较多MKN45细胞呈现岛期细胞DNA含量（P〈0．05）；细胞凋亡率较对照组明显上升（P〈0．05）；伴随pro—caspase3水平下降。结论 抑制STK15基因表达通过caspase3途径导致MKN45细胞凋亡，STK15基因对胃癌细胞增殖及存活起着关键作用。     

小片断干扰RNA抑制保罗样激酶1基因的表达诱导胃癌细胞凋亡

目的 观察抑制保罗样激酶基因（polo like kinasel，plkl）表达对胃癌细胞——MKN45凋亡的诱导，探讨plk1基因对胃癌细胞增殖及生存力的作用。方法 化学合成小片断干扰RNA（siRNA）阻断MKN45细胞plkl基因的表达；实时定量PCR及Western blot检测干扰前后plk1 mRNA及蛋白质表达的变化；免疫荧光及激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管改变，流式细胞仪检测MKN45细胞周期及凋亡的变化；Western blot检测pro-caspase3水平的变化。结果 经靶向plk1的siRNA作用后，plk1 siRNA mRNA及蛋白质表达明显下降；MKN45细胞纺锤体结构变得模糊，失去完整性；较多MKN45细胞呈现G2期细胞DNA含量（P〈0．05）；MKN45细胞在48、72h凋亡率较对照组明显上升（P〈0．05）；伴随pro-caspase3水平在72h出现下降。结论 抑制plk1基因表达可导致MKN45细胞凋亡，凋亡机制可能通过caspase3途径；plk1基因对胃癌细胞增殖及存活起着至关重要的作用。     

胆囊黏膜ABCG5和ABCG8基因在胆固醇结石病中的作用

目的探讨ABCG5和ABCG8基因在胆囊黏膜中的表达与胆固醇结石病的关系。方法采集28例胆囊胆固醇结石病患者和10例无胆石对照的胆囊黏膜和胆汁、胆石。测定胆汁胆固醇、胆汁酸和磷脂含量;Real-time PCR测定胆囊黏膜中ABCG5和ABCG8的表达量。结果胆石组中胆固醇摩尔百分比和饱和指数均较对照组显著升高(P<0.01);ABCG5和ABCG8的表达呈显著正相关(r=0.55,P<0.01),胆石组中ABCG5和ABCG8的mRNA表达分别是对照组的2.8倍(P<0.01)和1.9倍(P<0.05)。结论胆固醇结石病患者的胆囊黏膜ABCG5和ABCG8基因表达增高,限制了胆囊上皮对胆固醇的吸收,使胆汁过饱和状态得以维持。