核仁素对小鼠糖尿病性心肌病心肌肥大与纤维化发生的影响

目的:阐明核仁素在小鼠糖尿病性心肌病中的作用。方法:前期研究中我们采用了心肌特异性过表达核仁素转基因小鼠制备了Ⅱ型糖尿病性心肌病模型;实验分为野生型对照组、转基因对照组、野生型糖尿病组及转基因糖尿病组。采用麦胚凝集素(wheat germ agglutinin,WGA)荧光染色检测小鼠心肌肥大情况;采用Masson三色染色检测小鼠纤维化情况;采用Power Lab system检测小鼠心肌功能变化。结果:与对照组比较,转基因糖尿病组小鼠的血糖值变化不明显,心肌细胞肥大显著减轻,胶原纤维生成显著减少,血流动力学指标±dp/dtmax、左室舒张末压、左室峰压和心率均有不同程度的改善,且差异具有统计学意义。结论:核仁素可能通过减轻糖尿病性心肌病小鼠心肌细胞肥大及纤维化的发生,从而改善糖尿病性心肌病小鼠的心功能。     

HSP70抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡

目的：阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：采用基因瞬间转染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达，采用Hoechst 33258染色观察H2O2 (0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率。DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带。采用caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase-9和caspase-3的活化。利用免疫荧光分析HSP70对H2O2所致Smac从线粒体释放的影响。结果：HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋亡核百分率明显降低, DNA电泳未出现明显“梯状”条带;caspase-9和caspase-3的活化明显受到抑制;并进一步发现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放。结论：HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来抑制H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡。     

过氧化氢对K562细胞凋亡的影响

目的：探讨活性氧对K562细胞凋亡的影响。方法：用过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)作用于对数生长期的K562细胞。结果：Hoechst 33258染色法观察到K562细胞明显凋亡；caspase活性定量测定及Western Blotting检测显示caspase-3，-8，-9同时被激活。结论：H2O2可诱导K562细胞凋亡，且通过同时激活线粒体途径和死亡受体途径起作用。     

基于案例和问题的交互式病理生理学教学模式的效果评价

目的　评价病理生理学课堂教学应用“基于案例和问题的交互式教学”的效果,为促进学生从被动学习到主动学习,以及培养临床思维提供新思路。方法　在中南大学湘雅医学院2015级临床医学五年制和其他非临床专业的病理生理学教学中采用“基于案例和问题的交互式教学”,以460名医学生为调查对象,采取无记名问卷调查对基于案例和问题的交互式教学的效果进行评价,主要了解学生对该教学的认可程度。运用Excel收集、处理数据,描述性分析计算各指标百分率。结果　共发放问卷460份,回收有效问卷453份,获得如下评价结果：①针对该教学实施的课前导学,402人（88.7%）认为课前导学促使相关教学内容的预习;375人（82.8%）认为课前导学可以提高课堂讨论质量;347人（76.6%）认为课前导学扩大思考探索空间,而课前导学并不会增加学生的学习负担（306人,67.6%）。②学生认为“基于案例和问题的交互式教学”与传统教学相比具有以下优势：有利于培养学生的临床思维能力（414人,91.4%）;增强知识的理解记忆（400人,88.3%）;吸引学生课堂注意力（380人,83.9%）;激发学生参与讨论的兴趣（327人,72.2%）。③379名学生（83.4%）更喜欢这种教学方式,认为可以提高分析解决问题的能力（325人,71.7%）,培养临床思维能力（321人,70.9%）,提高自学能力（247人,54.5%）和综合归纳能力（197人,43.5%）。结论　在病理生理学课堂教学中采用“基于案例和问题的交互式教学”,可提高学生自主学习能力,活跃课堂气氛,提高教学质量,能有效培养学生的临床思维能力,在基础医学的课堂教学中值得推广和应用。     

肿瘤坏死因子-α诱导HaCaT角质细胞凋亡的研究

烧伤后由于坏死组织刺激,引起创面局部中性粒细胞和单巨噬细胞聚集、黏附和释放炎症介质,导致机体血中和痂下水肿液中肿瘤坏死因子(TNF)-α水平明显升高,而烧伤创面愈合的关键在     

过氧化氢通过线粒体通路和死亡受体通路诱导心肌细胞凋亡

为探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡的分子机制，采用0．5mmol／L过氧化氢作用于原代培养的新生大鼠心肌细胞。末端标记发现过氧化氢明显诱导心肌细胞凋亡；Caspase活性定量检测及Western-blot发现Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9同时被激活；而Western-blot及间接免疫荧光发现细胞色素C从线粒体释放入胞浆。以上结果提示，氧化应激通过同时激活线粒体通路与死亡受体通路导致心肌细胞凋亡，从而为临床防治与细胞凋亡相关的心血管疾病提供了新的信息。     

从凋亡信号通路探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的机制

为探讨热休克蛋白保护过氧化氢所致心肌细胞凋亡的分子机制，采用热休克对原代培养的新生大鼠心肌细胞进行预处理，以诱导热休克蛋白的表达，观察热休克蛋白对过氧化氢所致心肌细胞凋亡的保护作用。结果发现，热休克预处理导致心肌细胞热休克蛋白70及αB-晶状体蛋白表达明显增加，同时显著抑制过氧化氢所致细胞色素C从线粒体释放，抑制Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活化及随后的心肌细胞凋亡。以上结果提示，热休克蛋白通过抑制线粒体信号通路与死亡受体通路的活化保护过氧化氢导致的心肌细胞凋亡，为临床防治心血管疾病提供了新的信息。     

病理生理学实验教学改革思路与实践

中南大学病理生理学实验教学已经发展为一个分阶段、多层次、综合性、开放性的教学体系,本文对我校病理生理学系近年来在实验教学方面的改革思路、实践过程及教学效果进行了总结.     

Mipu1在人脑星形细胞瘤中的表达及临床意义初步探讨

目的研究心肌缺血预适应上调蛋白1(Mipu1)在人脑星形细胞瘤中mRNA及蛋白水平的表达情况,并探讨其临床意义。方法收集24例临床上病理级别分别为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级的脑星形细胞瘤组织标本,应用逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术(Western blot)分别检测Mipu1的mRNA和蛋白质表达水平。结果 RT-PCR结果显示Mipu1的mRNA的表达水平随着星形细胞瘤病理级别的升高而上调;相似,Western blot分析结果显示Mipu1蛋白表达水平也随着星形细胞瘤病理级别的升高而上调,差异有显著性(P<0.05)。结论 Mipu1在脑星形细胞瘤中表达上调,其表达水平与星形细胞瘤病理级别成正相关,可作为判别星形细胞瘤分化程度的指标之一。