Schistosoma japonicum:establishment of a mouse model that demonstrates concomitant immunity

Concomitantimmunitytoschistosomereinfectioninvivoisgenerallythoughttobetheimmuneresponseinducedbyandrelyingonlivingadultworms 1,2 　However,afewauthors3,4 　havesuggestedthatthemechanismofresistancemayberelatedtothehepaticpathologycausedbytheprimaryinfection Thevascularpathologymightenablethechallengeschistosomulatoescapefromthehepaticportalsystem ,thuspreventingnormalparasitesequestrationandmaturationintheliver Phenoloxidasehasbeenimplicatedintheprocessofeggshellformation 5 7　Wehypothesiz…     

血吸虫感染新模型小鼠血清IgG与抗原的免疫印迹分析

目的 在建立一种日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型的基础上,比较新模型小鼠与血吸虫感染常规模型小鼠血清IgG识别日本血吸虫抗原的差异。方法 每只BALB/c小鼠经腹部皮肤人工感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴20d后,按300mg/(kg·d)腹腔注射酚酶抑制剂-丙烯基硫脲,同时设立未用药感染对照组,至感染后第42天剖杀2组小鼠,从小鼠眼球取血制备血清,经western-blot观察血清IgG对日本血吸虫SWAP及SEA的识别差异。结果 western-blot显示,2种模型小鼠血清IgG对SWAP的识别存在差异,明显的区别在于常规模型组可见1条90kDa大小的清晰主带,而新模型组则表现为数条弱带。SEA与常规模型组小鼠血清。IgG呈强阳性反应,而与新模型组小鼠血清IgG反应微弱。结论 2种模型小鼠体内血吸虫诱导产生的抗体存在差异,这些差异可能是导致新模型小鼠抗再感染力增强的体液免疫因素之一。     

肝基质对日本血吸虫培养细胞生长的影响

目的研究肝基质对日本血吸虫培养细胞形态、增殖的影响.方法联合法将虫龄为21 d的日本血吸虫童虫细胞接种于预先铺敷有肝基质(实验组)和未铺敷肝基质(对照组)的小盖玻片上,培养于常规培养基中,用高碘酸雪夫(PAS)法染色培养细胞,Olympus-BH2显微镜下观察并拍照;并将接种第3天的实验组和对照组培养细胞用胶银法进行核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)染色,HPIAS 2000图像分析仪测定AgNORs平均光密度值进行图像分析.结果实验组中的培养细胞其细胞质突起和分裂细胞增多,AgNORs的平均光密度值显著高于对照组细胞(P＜0.01).实验组的细胞分裂方式除常见的一分为二方式外,还观察到一分为三的多极分裂方式;而对照组未观察到分裂细胞.结论肝基质可明显影响日本血吸虫培养细胞的形态,显著促进培养细胞的增殖.     

丙烯硫脲对日本血吸虫酚酶抑制作用的组织化学研究

目的 通过组织化学方法研究丙烯硫脲对小鼠体内、体外日本血吸虫成虫酚酶(phenol oxidase，PO)活性的抑制作用。方法 将42d日本血吸虫活成虫置于含25mmol／L邻苯二酚的磷酸盐缓冲液(pH6．8)中，28℃下孵育30min，取出虫体置载玻片上，加2滴含0．1％戊巴比妥钠的PBS溶液，置Leica荧光显微镜下，分别在普通光照和紫外光激发下观察酚酶在虫体内的组织学定位。体外抑制实验时，加底物前先将成虫置于含5mmol／L丙烯硫脲的PBS溶液中，28℃下孵育10min；体内抑制实验时，在小鼠感染日本血吸虫尾蚴20d后，按300mg／kg隔日1次腹腔注射丙烯硫脲。结果 体外抑制实验组雌虫卵黄腺及子宫内虫卵卵壳和雄虫体壁表层的桔黄色荧光或赭褐色颜色反应均基本消失；体内抑制实验组雌虫子宫内未见虫卵或虫卵样物质，仅见大量泥沙样卵黄颗粒，其荧光或颜色反应也基本消失。结论 通过一种更灵敏的显示酚酶活性的组织学定位方法，观察到不仅雌虫含有酚酶，雄虫也有酚酶活性。证明丙烯硫脲对血吸虫成虫的酚酶活性有明显的抑制作用，从而可使小鼠体内血吸虫雌虫虫卵的形成被完全抑制。     

日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究

本文报道日本血吸虫成虫细胞培养条件的初步研究.结果表明:日本血吸虫的成虫细胞,在合成培养基RPMI-1640和5%的小牛血清、台成培养基TC-199和10%或20%的小牛血清培养液中,在附加常量抗菌素、pH值为7.2—7.4、培养温度为36℃一37℃条件下,其存活时间均可超过150d.另外,成虫细胞在未加抗菌素或附加一定量(常量或两倍于常量)抗菌素的培养液中的存活天数,没有明显差别.     

吡喹酮对感染血吸虫小鼠血清羟脯氨酸及肝脏虫卵肉芽肿作用的探讨

本研究主要观察吡喹酮(PZQ)对血清游离羟脯氨酸(F-Hyp)水平和肝脏虫卵肉芽肿(HEG)的作用.结果显示PZQ在减轻HEG及纤维化反应的同时,还可降低F-Myp的水平,表明F-Hyp水平能够反映肝脏胶原代谢的情况,可作为血吸虫性肝纤维化(SHF)诊断和疗效判断的一个指标.     

日本血吸虫肝门型童虫蛋白质SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的分析

本文采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）对日本血吸虫肝门型童虫蛋白组分进行了分析，结果显示：１４ｄ肝门型雌雄童虫出现３３条蛋白区带，主带８条；２１ｄ肝门型雌雄童虫出现３４条蛋白区带，主带８条；２１ｄ雄性童虫出现３１条蛋白区带，主带７条。各组童虫与成虫比较，有２７～２８茶共同蛋白区带，提示日本血吸虫不同时期的肝门型童虫与成虫的蛋白组分在质与量方面虽然存在着某些差异，但总体上两者的蛋白组分有很大的相似性。     

弓形虫P24基因细胞内定位载体重组质粒的构建

目的 构建编码弓形虫RH株P24基因的细胞内定位载体并进行其序列测定。方法 弓形虫RH株腹腔接种小鼠，收集腹水，Trizol试剂盒抽提基因组RNA；根据基因库P24基因序列设计合成引物，采用RT—PCR法扩增编码P24的基因片段，经低熔点琼脂糖法回收并纯化；将P24基因定向克隆到细胞内定位载体pCMV／myc系列：pCMV／myc／cyto(胞质定位)、pCMV／myc／nuc(核定位)、pCMV／myc／mito(线粒体定位)及pCMV／myc／ER(内质网定位)。转化大肠杆菌TOPl0感受态细胞，在氨苄青霉素阳性LB培养基平板上筛选出阳性克隆。重组子经双酶切，PCR鉴定，最后对重组子进行序列测定。结果 RT—PCR方法从弓形虫RH株扩增572bp的P24基因片段，分别构建重组质粒pCMV／myc／cyto—P24、pCMV／myc／nuc—P24、pCMV／myc／mito—P24和pCMV／myc／ER-P24，酶切和PCR鉴定产物大小与预期值相符合，序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码P24抗原的基因片段。结论 成功构建编码弓形虫表面抗原P24基因真核细胞内定位载体重组质粒pCMV／myc／cyto—P24、pCMV／myc／nuc—P24、pCMV／myc／mito-P24和pCMV／myc／ER—P24。     

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的分析

采用免疫沉淀技术和ＥＩＴＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）。结果：能被ＳＩＥＡ免疫血清识别的ＳＩＥＡ带主要集中于３０８ＫＵ到４９６ＫＵ之间，其主要反应带为４９６ＫＵ、３９７ＫＵ和３３７ＫＵ。推测４９６ＫＵ和３３７ＫＵ这两抗原分子在诱导宿主产生抗卵成熟过程中可能起着重要作用。