日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统形态及基质对其结构的影响

目的 研究日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统的三维结构及细胞外基质(ECM)对其的作用。方法 用高锰酸钾作固定剂，制备日本血吸虫培养细胞整装内质网膜系统标本，扫描电镜下观察。结果 日本血吸虫培养细胞的内质网膜系统由膜性小管、小泡相互连接构成小型扁囊样网络结构。基质中细胞的内质网膜系统较对照组发达、丰富；基质的种类不同，培养细胞内质网膜系统的形态各异。鼠尾胶中细胞多由膜性小管和小泡构成，其网眼数目较少，可见伪足样结构；伪足较短，也由膜性小管或小泡构成管囊状网络。肺基质中细胞几乎均为小管，小泡极少；网眼和伪足数目增多，伪足呈针状。肝基质中细胞的内质网膜系统与肺基质中的相似，但网眼和伪足数目更多，伪足细长，呈纤维状。结论 ECM可明显影响日本血吸虫培养细胞的内质网膜系统形态；ECM的种类不同，培养于其中细胞的内质网膜系统形态不同。     

日本血吸虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的研究

目的 通过研究日本血吸虫成虫与童虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs)含量及β-巯基乙醇对培养细胞AgNORs的影响,探讨AgNORs能否作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的指标以及β-巯基乙醇对培养细胞的促增殖作用。方法 联合法培养虫龄分别为18d和24d的日本血吸虫童虫与成虫,将童虫细胞随机分成对照组和实验组,对照组细胞与成虫细胞使用常规培养基培养,实验组在常规培养基中加入50μmoL/L β-巯基乙醇和1mmoL/L丙酮酸钠。培养第5d,运用胶银法染色,使用HPIAS-2000图像分析系统,计算培养细胞核内AgNORs颗粒数,测定银染颗粒面积与核面积的百分比和平均光密度。结果 日本童虫培养细胞(对照组)的AgNORs颗粒数目、颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均高于成虫培养细胞。统计学分析显示,两者之间的AgNORs颗粒数日,银染颗粒面积与核面积百分比、平均光密度两两比较均有统计学差异(P<0.01或P<0.05);实验组培养细胞与对照组比较,AgNORs颗粒数目明显增多颗粒面积与核面积百分比、平均光密度均显著升高。统计学分析可知,两组细胞三组参数之间均有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。结论 AgNORs可作为评价日本血吸虫培养细胞增殖的一个简便、敏感的指标。日本血吸虫童虫培养细胞较成虫培养细胞更具增殖潜能;β-琉基乙     

亚精胺对日本血吸虫成虫培养细胞SDH的影响

目的以琥珀酸脱氢酶(SDH)为指标,探讨亚精胺(Spermidine ,Spd)对日本血吸虫成虫培养细胞生长代谢的影响。方法将24 d龄的日本血吸虫成虫用冷消化法制成细胞悬液,联合法将细胞接种于小盖玻片上培养。培养至第4 d ,一部分细胞用含Spd终浓度分别为0(对照)、25、50、75、80、90、100、150、200μmol/L的无血清培养基处理24 h,另一部分细胞用终浓度为75μmol/L的Spd分别处理0(对照)、12、24、36、48、60、72 h。然后用PBS清洗3次,再换用常规培养基继续培养。至第8 d ,对处理过的培养细胞进行SDH细胞化学染色,Olympus-BH2显微镜下观察、拍照,并将结果输入HPIAS-2000图像分析仪进行图像分析。结果用Spd作用24 h,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随Spd浓度的升高逐渐增强,75μmol/L时达到最高,>75μmol/L,SDH活性逐渐减弱。当Spd作用浓度为75μmol/L时,日本血吸虫培养细胞的SDH活性随着Spd作用时间的延长逐渐增强,48 h时达到最高,然后逐渐减弱。统计学分析显示,Spd处理后的实验组培养细胞,其SDH活性与对照组细胞比较差异具有显著性(P<0 .05) ;用终浓度为75μmol/L的Spd处理培养细胞48 h,培养细胞的SDH活性显著强于其余各组(P<0 .01)。结论Spd可显著增强日本血吸虫培养细胞的生长代谢活性;用终浓度为75μmol/L的Spd处理48 h,培养细胞的SDH活性最强。     

不同厂家氯硝柳胺与烟酰苯胺复配灭螺实验研究

目的掌握不同厂家氯硝柳胺与烟酰苯胺复配的灭螺效果。方法将氯硝柳胺与烟酰苯胺按1∶1的比例进行复配形成复合物(简称氯烟复合物),在室内进行浸杀和喷洒灭螺实验并观察钉螺触药上爬及鱼类急性毒性情况。结果在室温23～25℃条件下,采用0.2mg/L氯烟复合物,室内浸泡48h,3个厂家氯烟复合物淮南组、吴江组和四川组的钉螺死亡率分别为93.3%、94.7%和95.4%。采用0.4g/m氯烟复合物,室内喷洒248h,3个厂家氯烟复合物淮南组、吴江组和四川组的钉螺死亡率分别为97%、96%和96%。钉螺接触氯烟复合物的上爬率比烟酰苯胺下降71.9%,2组钉螺上爬率差异有统计学意义(P<0.01)。对鱼的急性毒性,氯烟复合物比氯硝柳胺下降50%左右。结论不同厂家氯硝柳胺和烟酰苯胺通过复配后均可获得增效灭螺的作用。     

湖北钉螺肝脏细胞原代培养的初步研究

目的 研究湖北钉螺肝脏细胞的原代培养方法，观察肝脏细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）和乳酸脱氢酶（LDH） 的活性分布。 方法 解剖湖北钉螺取肝脏，用0.2%（体积比）苯扎溴铵（新洁尔灭）浸泡及含抗生素的生理盐水无菌洗涤、磨碎、过滤，收集肝脏细胞。采用联合法和静置悬浮法接种培养。细胞培养液配方: 50 ml M199溶液、3 mg/ml 水解乳蛋白溶液30 ml(平衡盐溶液配制)及胎牛血清20 ml, 混匀，附加常量抗生素（青霉素100 IU/ml、链霉素100 μg/ml、卡那霉素50 μg/ml），混匀，调节pH值为7.2～7.4。于26.5 ℃ 培养。联合法培养的肝脏细胞分别进行Giemsa、SDH和LDH染色，显微镜观察活细胞与染色细胞形态、SDH和LDH的分布，以及观察静置悬浮法培养的肝脏细胞形态。 结果 联合法培养的肝脏细胞贴壁后形态各异，以圆形、椭圆形为主, 也有三角形和不规则形等。细胞大小约（4～16） μm×（6～20） μm。较小细胞形成细胞簇，细胞核不明显，细胞质丰富、透亮。散在分布的单个细胞稍大，细胞核较大而明显，细胞质较少。培养5～7 d 的肝脏细胞逐渐退化。Giemsa染色将细胞分为两种，一种为细胞质呈蓝色，细胞核紫红色；另一种是细胞质呈紫红色，细胞核呈蓝色。SDH和LDH染色，细胞质出现大小不同、深浅不一的蓝色颗粒。静置悬浮法培养的肝脏细胞不易贴壁，多为圆形，细胞核不明显。细胞较小，约为（4～6） μm×（6～8） μm。培养3 d 均被细菌污染。 结论 联合法更适合湖北钉螺肝脏细胞原代培养，SDH和LDH活性位于肝脏细胞质中。     

医学吸虫抗氧化酶家族的研究进展

需氧生物体在正常生理代谢过程中会产生活性氧族（reactive oxygen species,ROS）,但过多的ROS可引起体内多种氧化损伤,因此这类生物体都具备一套完善的防御体系,抗氧化酶是其中一个重要的组成部分。对于医学吸虫,不仅需要抗氧化酶清除正常生理代谢中产生的ROS,还要抵抗宿主免疫系统来源的ROS引起的损伤。了解医学吸虫抗氧化酶家族的结构和特性,有助于对其生殖生理的研究,以及新型药物和疫苗的开发。本文综述近年来对医学吸虫谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GPx）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）及抗氧化蛋白（peroxire-doxin,PRx）等抗氧化酶家族的研究进展。     

血吸虫感染新模型兔血清对童虫的体外杀伤实验

目的　在已建立的一种血吸虫感染伴随免疫新模型的基础上 ,观察该模型兔血清对童虫的体外杀伤作用 ,探讨该血清抗体在抗日本血吸虫感染保护性免疫中的作用。　方法　用倒置显微镜观察并比较不同稀释度的日本血吸虫感染伴随免疫新模型兔血清 (A血清 )与日本血吸虫感染常规模型兔血清 (B血清 )对体外培养童虫的杀伤作用 ,并经甲基蓝染色后计算童虫死亡率。　结果　对体外童虫的杀伤作用 ,新模型兔血清随浓度的降低而逐渐减弱 ,血清浓度越低 ,童虫死亡率亦越低。但常规模型兔血清随浓度的降低则呈现先上升后下降的趋势 ,以 1/ 10左右稀释度时最高。比较A、B两种血清对童虫的杀伤作用 ,前者强于后者 ,1/ 2血清稀释度培养 48h观察到的童虫死亡率分别为 (4 1.2 3±1.0 8) %和 (2 7.2 7± 2 .86) % (P <0 .0 5 ) ;先加入后者 4h后再加入前者能部分抑制前者的杀童虫作用 ,童虫死亡率为(3 7.63± 2 .3 3 ) % ,介于两者之间。常规模型血清组部分童虫体表出现膜状或泡状物质包绕 ,但童虫却未受到明显杀伤。结论　日本血吸虫感染伴随免疫新模型兔血清在体外对童虫的杀伤作用强于常规模型兔血清 ,推测前者可能以杀伤抗体占优势 ;而后者可能以封闭抗体占优势。     

血吸虫分子生物学检测技术研究进展

血吸虫的诊断是血吸虫病防治工作中的重要环节,早期诊断可有效控制传染源和阻止晚期血吸虫病的发生。目前常用的血吸虫病诊断方法为病原学检测和血清学检测。随着我国血吸虫病防治工作的有效进行,日本血吸虫病在人群中的感染率和感染强度均显著降低,病原学和血清学检测的敏感性和时效性受到了一定的限制。分子生物学诊断方法以其高特异性、敏感性和时效性等优点,极大地促进了血吸虫病诊断方法和相关检测技术的改进和发展,为日本血吸虫病人群感染率低的流行区中进行早期诊断和微量检测奠定了基础。本文围绕国内外血吸虫分子生物学检测和诊断方法的研究进展进行一概述。     

日本血吸虫感染新模型小鼠IFN-γ及IL-4 mRNA的动态变化

目的 构建日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型,通过观察比较新模型小鼠与常规感染小鼠脾细胞诱生Th1细胞因子（γ-IFN）和Th2细胞因子（IL-4）mRNA的动态变化,从分子水平探讨日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型的细胞免疫机制。方法 小鼠感染日本血吸虫尾蚴20d后,按300 mg/kg.d腹腔注射丙烯基硫脲,持续抑制雌虫产卵,建立日本血吸虫感染小鼠伴随免疫新模型。同时设立常规模型对照组和正常小鼠对照组。在感染后第2,3,6,9和12 w,采用RT-PCR对各组小鼠脾细胞IFN-γ和IL-4的mRNA水平进行半定量检测分析。结果 新模型组与常规模型组小鼠IFN-γ和IL-4 mRNA水平变化趋势基本一致,IFN-γmRNA水平在感染后9w最强,然后逐渐下降,至第12w;IL-4 mRNA水平在感染后3w开始逐渐增强,至12w仍维持高水平。新模型组IFN-γmRNA水平在感染3w后明显高于常规模型组（P〈0.05）;常规模型组IL-4 mRNA水平在感染6w后明显高于新模型组（P〈0.05）。正常小鼠IFN-γ和IL-4 mRNA水平较低,均无明显变化。结论 日本血吸虫感染新模型小鼠与常规模型小鼠的细胞免疫功能变化趋势基本一致,表现为Th1淋巴细胞功能先升高,然后逐渐向Th2淋巴细胞功能极化,提示可溶性虫卵抗原（soluble egg antigen,SEA）不是诱导Th2功能极化的唯一因素,对细胞免疫应答由Th1向Th2功能极化有促进作用。     

日本血吸虫保护性抗原模拟表位的筛选及其免疫保护作用的研究

目的在前期已建立日本血吸虫感染兔新模型的基础上,用该血清从噬菌体随机12肽库中筛选阳性单克隆噬菌体,并鉴定其诱导小鼠的免疫保护效果。方法通过给感染日本血吸虫家兔注射酚氧化酶抑制剂,抑制其体内日本血吸虫雌虫产卵,建立无虫卵肉芽肿的日本血吸虫感染动物新模型,用其血清筛选出阳性多克隆噬菌体,经与可溶性虫卵抗原(SEA)免疫兔血清充分吸附后,从中随机挑取14个单克隆分别纯化、扩增,用常规ELISA法检测阳性单克隆噬菌体的抗原性;挑选出与新模型兔血清呈强阳性反应,但与SEA免疫兔血清呈阴性或弱阳性反应的单克隆噬菌体,按1×1015pfu/次剂量,0-2-4周方案,皮下多点注射免疫小鼠。末次免疫4周后,每鼠经腹部皮肤攻击感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴,感染42d后观察减虫率及减卵率。结果所选14个单克隆噬菌体均能与新模型兔血清和常规感染模型兔血清反应,尤其是第8号和第13号2个克隆与新模型兔血清呈强阳性反应,但与SEA免疫兔血清呈阴性反应;8号、13号单克隆噬菌体及原始噬菌体肽库免疫小鼠后诱导抗攻击感染的减虫率及每克肝脏减卵率分别为35.81%和63.32%、32.09%和52.02%、14.90%和30.64%。结论阳性多克隆噬菌体与SEA免疫兔血清免疫吸附后能去除大部分表达SEA抗原模拟表位的克隆,所选14个单克隆噬菌体均表达