胰腺癌MUC4抗原多表位嵌合基因重组腺病毒载体的构建及其在COS-7细胞的表达

目的:构建含有胰腺癌MUC4抗原多表位嵌合基因的腺病毒载体,并转染真核细胞COS-7.方法:多参数分析预测MUC4抗原HLA-A1、HLA-A2限制性CD8 T细胞表位kozac序列、引导序列以及通用Th表位PARDE和多表位基因串连后合成嵌合全基因.嵌合基因克隆到腺病毒穿梭载体pAdshuttle-CMV获得重组质粒pAdshuttle-CMV-PE.酶切鉴定后,将正确的重组质粒转化含有腺病毒骨架载体的BJ5183菌进行同源重组.Pac Ⅰ酶切和测序鉴定正确的重组子,脂质体介导转染Ad293细胞,通过观测绿色荧光蛋白(GFP)的表达和PCR扩增目的基因的方法鉴定重组腺病毒(rAd-PE).Ad293细胞反复感染冻融扩增病毒,流式细胞仪和TCID50检测病毒滴度.病毒颗粒感染COS-7细胞,荧光显微镜观测绿色荧光蛋白的表达以及SDS-Page分析多表位嵌合蛋白的表达.结果:成功构建了含有胰腺癌MUC4的多表位嵌合基因重组腺病毒,病毒滴度为1×1010 pfu/ml.SDS-Page发现在16 kD处有一符合预期大小的蛋白表达.结论:该重组腺病毒成功构建并能够在真核细胞COS-7中表达,为下一步胰腺癌的肿瘤疫苗研究奠定相应的基础.     

肿瘤来源的外泌体在肿瘤进展中的作用及其诊疗意义

外泌体是一种由细胞内多泡体与细胞膜融合产生的纳米级小囊泡。它们广泛分布在生物体血液、尿液、胸腹腔积液等几乎所有体液中。作为细胞间通讯和遗传物质的重要载体,外泌体可以通过各种生物活性分子,如细胞膜受体、蛋白质、信使RNA（messenger RNA,mRNA）和微小RNA（micro RNA,miRNA）的转移直接刺激靶细胞,从而发挥其生物学功能。从肿瘤细胞分泌的外泌体称为肿瘤来源的外泌体（tumor?derived exosome,TEX）,除了具备外泌体的一般特征外更有其特殊性。研究TEX对肿瘤发生发展的影响将开辟全新的诊断和治疗肿瘤的新方法。     

肠腔分流:优化“联合血管切除的胰十二指肠切除术”的新技术

目的:探讨术中先行肠腔分流(mesocaval shunt,MCS)辅助的联合血管切除的胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy with venous reconstruction,PDVR)(MCS-PDVR)的优势及可行性?方法:对本中心2014年5月—2016年5月期间实施MCS-PDVR的7例胰腺癌患者的临床资料作回顾性分析?结果:本组患者均成功实施MCS-PDVR,血管切除长度为4.0~7.0 cm,门静脉阻断时间为60~80 min,均无小肠淤血坏死,术后患者肝功能基本恢复正常,无肝性脑病发生,仅1例出现A级胰瘘,均无严重胰瘘?腹腔出血及血栓形成等严重并发症;2例术后7个月因肿瘤复发死亡,5例随访中,随访时间6~14个月,无复发迹象?结论:MCS-PDVR作为严重侵犯肠系膜上静脉和(或)门静脉的晚期胰腺癌的一种手术方式不仅安全可行,而且可以提高手术切除率,达到 R0切除,延长患者的生存时间?     

胰腺癌伴发急性胰腺炎的诊治

由于胰头癌阻塞主胰管．常可导致胰腺体尾部发生慢性胰腺炎和胰腺纤维化．但由此伴发急性胰腺炎者临床却少见,发病率〈3％。本文结合我院近年收治的胰腺癌伴发急性胰腺炎病例,对以急性胰腺炎为主要临床表现的胰腺癌诊治作简要介绍。     

慢病毒介导的RNA干扰对小鼠胰腺星状细胞中半乳糖凝集素-1基因沉默效应的研究

目的:评价慢病毒介导的RNA干扰技术对小鼠胰腺星状细胞(mPSC)中半乳糖凝集素-1(galectin-1)基因的沉默效应,并观察其对mPSC增殖的影响。方法:设计并合成3条galectin-1基因特异性RNAi靶序列,构建到慢病毒PLKO.1-PURO载体中。从慢病毒包装转染的293T细胞,获得病毒上清感染的mPSC;采用嘌呤霉素(2μg/μL)筛选出慢病毒感染成功的mPSC。实时荧光定量RT-PCR和Western印迹法检测mPSC中galectin-1 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测mPSC的增值能力。结果:PCR扩增和测序表明成功构建galectin-1慢病毒干扰载体,可以有效沉默mPSC中galectin-1基因的表达。构建的RNAi慢病毒载体感染mPSC后galectin-1 mRNA表达量同对照组比较,分别为(19.4±4.8)%、(6.2±4.3)%、(27.6±5.7)%,galectin-1蛋白表达量同对照组比较分别为(25.9±3.6)%、(10.8±4.1)%、(30.2±3.2)%。稳定的galectin-1沉默mPSC在第4天细胞增殖能力下降(22.9±2.7)%(P     

胰腺神经内分泌肿瘤的手术治疗

胰腺神经内分泌肿瘤(pNENs)分为功能性与无功能性两大类,常见类型包括胰岛素瘤、胃泌素瘤、胰高血糖素瘤、血管活性肠肽瘤等,根治性手术切除是pNENs患者治愈和长期生存的唯一方法.基本手术方式包括局部切除和规则切除两类,前者为肿瘤局部切除(剜除)术,后者包括胰十二指肠切除术(标准或保留幽门)、胰体尾切除术(联合脾脏切除或保留脾脏)及中段胰腺切除术等.肝脏是最常见远处转移部位,手术切除是肝转移瘤首选治疗方法,RFA、TACE以及肝移植可以作为辅助治疗手段.     

动脉优先入路在胰十二指肠切除术中的技术要点

目的 探讨在胰十二指肠切除术中利用动脉优先入路（artery first approach）早期探查肠系膜上动脉（SMA）和腹腔干以判断肿瘤可切除性,并完成以SMA及腹腔干为轴的右侧神经及淋巴组织的完全切除的技术要点。方法 回顾性分析笔者所在医院胰腺外科中心2010年9月至2013年12月期间27例实施动脉优先入路胰十二指肠切除术患者的临床资料。结果 27例患者术前均疑诊为“胰头癌”,且术前CT判断均为交界性可切除者。8例行内引流手术,2例行全胰切除术,17例行胰十二指肠切除术;其中5例行联合门静脉（PV）/肠系膜上静脉（SMV）切除,1例行肝总动脉切除,2例行扩大右侧胰腺切除术。手术时间（281.28±78.53） min （133～354 min）,术中出血（352±537） mL （189～1 352 mL）。无术后死亡,无因并发症再次手术者。结论 动脉优先入路适合于术前判断为交界可切除病例,具体的入路方式需根据肿瘤位置以及侵犯情况灵活采用。     

炎症指标在胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤恶变的诊断价值

目的：探讨炎症指标,包括中性粒细胞/淋巴细胞（neutrophil to lymphocyte,NLR）和血小板/淋巴细胞（platelet to lymphocyte,PLR）在胰腺导管内乳头状黏液性肿瘤（intraductal papillary mucinous neoplasm,IPMN）恶变中的诊断价值。方法：回顾性分析南京医科大学第一附属医院2015年1月—2020年12月的IPMN手术患者,均由组织病理学明确诊断。收集患者一般信息、临床指标、影像指标、炎症指标,采用列线图构建恶性IPMN的预测模型。结果：NLR、PLR、CA19?9、癌胚抗原（carcino embryonic antigen,CEA）、囊肿大小、增强壁结节、胰管口径突然改变均与IPMN的恶性进展相关。NLR、CA19?9及囊肿大小为预测恶性IPMN的独立危险因素。PLR及囊肿大小为预测IPMN伴高级别不典型增生（high grade dysplasia,HGD）的独立危险因素。CA19?9为IPMN伴浸润性癌（intraductal papillary mucinous carcinoma,IPMC）的独立危险因素。基于NLR、CA19?9和囊肿大小的预测恶性IPMN的曲线下面积为0.806。该预测模型有较好的预测效能。结论：NLR、CA19?9和囊肿大小为预测恶性IPMN的独立危险因素,PLR和囊肿大小为预测HGD的独立危险因素。炎症指标在IPMN的恶性进展中发挥重要作用,可作为福冈指南的有益补充。     

左侧钩突优先入路在胰十二指肠切除术中的应用

目的:探讨左侧钩突优先入路在胰十二指肠切除术中的应用效果。方法:回顾性分析2020年1―12月在南京医科大学第一附属医院胰腺中心施行的152例胰十二指肠切除术中采用左侧钩突优先入路的病例资料,其中男性88例,女性64例,中位年龄［ M（ Q R）］62.0（14.7）岁（范围：16...     

保留脾脏的远端胰腺切除术体会

目的:本研究探讨胰体尾肿瘤进行保留脾脏和脾动静脉的胰体尾切除术的可行性与安全性.方法:分析本院1996年1月～2007年3月行保留脾脏和脾动静脉的胰体尾切除10例临床资料.其中,无功能性胰岛细胞瘤4例,胰腺囊腺瘤3例,慢性胰腺炎、胰腺癌和胰腺外伤各1例.结果:10例患者均成功完成保留脾脏和脾动静脉的胰体尾切除手术.手术时间平均为4.2 h.术中出血量平均为350 ml.术后复查血小板在79×109/L～270×109/L.术后住院时间平均为13天.术后胰漏3例,引流量10～50 ml/d.结论:保留脾脏和脾动静脉的胰体尾切除术难度大,但是是可行的、安全的,对于胰腺体尾部良性和交界性肿瘤的切除应是最佳的选择.