肠病毒感染及抗ADP/ATP载体抗体在病毒性心脏病发病中的意义

目的 :探讨肠病毒感染与抗二磷酸腺苷 /三磷酸腺苷 (ADP/ ATP)载体抗体在病毒性心脏病发病中的意义。方法 :应用逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR)和免疫转印法对临床诊断为病毒性心肌炎 (VMC)和扩张型心肌病 (DCM)患者进行肠病毒核糖核酸 (RNA)及抗 ADP/ ATP载体抗体的检测。结果 :RT- PCR方法检测肠病毒 RNA,VMC组 (n =74) 4 2例 (56.8% )阳性 ,DCM组 (n=2 6) 1 1例 (42 .3% )阳性。与健康组 (n =30 )比较具有显著性差异 (分别 P <0 .0 1 ,P <0 .0 5) ;肠病毒感染与 DCM患者心脏功能降低有明显相关性。免疫转印法检测 VMC(n =34)和 DCM(n =2 6)患者血清抗 ADP/ ATP载体抗体 ,VMC组 2 3例 (67.6% )阳性 ,DCM组 1 2例 (46.2 % )阳性 ,而健康组均为阴性 ;抗 ADP/ ATP载体抗体和肠病毒 RNA的检出相关 (r=0 .442 )。结论 :肠病毒RNA和抗 ADP/ ATP载体抗体在病毒性心脏病患者中检出具有相关性 ,对临床上出现前驱感染和心脏症状的患者 ,及时进行肠病毒 RNA、CVB- Ig M、抗 ADP/ ATP载体抗体的检测 ,有助于 VMC和 DCM的早期诊断。     

PCNA表达与肺癌细胞株凋亡的关系

 目的　探讨肺癌细胞株增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达与肺癌细胞株凋亡的关系。方法　用三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肺癌细胞株GLC 82凋亡。运用细胞培养、MTT、流式细胞技术 (FCM )检测及逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)检测PCNA表达在细胞凋亡过程中的变化及相互关系。结果　三氧化二砷可明显抑制GLC 82细胞增殖 ,使细胞周期阻滞于G2 /M并随后凋亡 ,PCNA表达受到抑制。结论三氧化二砷诱导GLC 82凋亡过程中 ,PCNA表达受到明显抑制。对于耐药性肿瘤 ,PCNA活性的抑制可能代表一种新的化疗策略。     

缺氧诱导丝裂原因子对胎肺形态发育及表面活性蛋白表达的影响

目的 探讨缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)对胎肺形态发育及表面活性蛋白B(surfactant protein B,SP-B)、表面活性蛋白C(snrfactant protein C,SP-C)表达的调控作用.方法 体外分离、培养小鼠第13.5天胎肺组织,分为HIMF处理组:在培养基中添加重组HIMF蛋白,终浓度为100 nmol/L;对照组培养基中不加任何处理.分别在培养0、48、72 h后,每组每时间点选取20例胎肺采用倒置显微镜和HE染色观察胎肺形态学和组织学的改变,采用Western印迹、免疫组化、实时逆转录-聚合酶链反应技术检测胎肺组织中SP-B和SP-C的蛋白、mRNA表达水平变化.结果 HIMF处理组培养48、72 h后,肺泡数目分别为(14.37±0.85)和(18.41±1.24)个/高倍视野,肺泡分支的数目分别为(2.51±0.35)和(3.28±0.51)个/高倍视野,均较对照组相应时间点[分别为(8.09±0.92)、(9.54±0.78)、(1.45±0.32)和(1.69±O.43)个/高倍视野]增加,差异有统计学意义(P<0.05).对照组胎肺体外培养72 h后,SP-B、SP-C蛋白表达较少,染色强度弱,主要定位于Ⅱ肺泡上皮细胞;HIMF处理组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞内SP-B、SP-C弥漫表达,以靠近肺组织边缘为甚.HIMF处理组培养48和72 h后,胎肺组织中SP-B、SP-C蛋白和mRNA水平均较对照组相应时间点增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIMF可能通过上调胚胎组织中SP-B和SP-C的表达,促进胎肺形态发育,为进一步研究HIMF在胚胎肺泡发育和成熟中的作用奠定了基础.     

构建一种高产量小胶质细胞体外纯化培养的方法

背景：小胶质细胞在一些神经系统疾病如帕金森病、阿尔茨海默病中有重要作用。体外原代培养是进行小胶质细胞功能研究的基础，但目前常用的一些经典培养方法存在步骤繁琐、产量过低的问题。目的 建立一种简易高产量的原代小胶质细胞体外纯化培养方法。设计：以细胞为单一样本的探索性研究。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科。材料：实验于2004-04／10在协和医院中心实验室完成，新生(出生ld)昆明小鼠10只，雄性。方法：改进的培养方法以McCarthy等的经典培养方法为基础，通过提高初次接种密度。减少细胞离心过滤过程，进行不换液的营养缺失培养等重要改进，并使用低浓度胰酶一乙二胺四乙酸消化法分离纯化小胶质细胞，经MAC-1抗体免疫化学染色标记，计算MAC-1抗原阳性细胞，观察小胶质细胞培养的产量和纯度。主要观察指标：①倒置显微镜观察小胶质细胞形态。②免疫组织化学鉴定比较两种方法下小胶质细胞纯度、激活状态。结果：经典的McCarthy培养方法小胶质细胞培养周期为20d，产量为2&;#215;10^5个／瓶，细胞纯度为95％～97％；改进的方法小胶质细胞培养周期为15d，产量为1&;#215;10^6个／瓶，得到的小胶质细胞纯度为96％～98％。与经典的McCarthy培养方法比较，改进的方法周期短，产量提高了3～10倍。两种方法培养的小胶质细胞纯度和细胞激活状态没有明显差别。结论：新方法得到的小胶质细胞纯度与激活状态均与经典方法相似，但由于其步骤简单，周期短和有效提高了培养产量，为进行小胶质细胞功能特性以及在神经修复中作用的深入研究提供了良好的方法学基础。     

ELISA及免疫印迹法检测抗肌球蛋白抗体的比较

目的 比较ELISA和免疫印迹法检测抗肌球蛋白抗体的优缺点和临床应用价值。方法 采用猪心肌组织中提取的心肌肌球蛋白作抗原,以ELISA和免疫印迹法检测48例扩张型心肌病（DCM）和40例冠心病患者血清中的抗肌球蛋白抗体;同时与人工合成的肌球蛋白重链抗原对比。结果 ELISA和免疫印迹法对DCM组抗肌球蛋白抗体检测的阳性率相近（50％对43．8％）,但后者能区分针对抗原亚单位的抗体,前者则不能。猪心肌肌球蛋白与人工合成多肽的ELISA检测结果具有高度的相关性（P＜0．01）。结论 以人工合成肌球蛋白重链作抗原,采用ELISA检测抗肌球蛋白抗体既有助于DCM与冠心病的鉴别诊断,又简便易行。     

结肠特异性基因RELMβ的克隆及其真核表达载体构建

目的:观察克隆小鼠结肠特异性基因RELMβ,并构建其真核表达载体.方法:采用Western blot、Northern blot方法检测RELMβ基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠结肠组织中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增RELMβ全长cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo( )的限制性内切酶位点EcoR I:重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染小鼠胚胎纤维母细胞NIH/3T3、结肠癌细胞系CT26,Western blot及RT-PCR法检测细胞RELMβ表达水平.结果:RELMβmRNA和蛋白特异表达于小鼠结肠,而其他脏器未见表达.成功克隆了小鼠RELMβ全长cDNA(318 bp),与已报道序列的同源性高达99%,获得GenBank登录号DQ157777.真核表达载体pcDNA3.1-RELMβ转染细胞后,细胞内RELMβmRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01).结论:从小鼠结肠组织中克隆出RELMβ特异性表达基因,为深入研究RELMβ基因的生物学作用及其在结肠疾病靶向治疗中的作用奠定了基础.     

姜黄素前体药物的合成及其体外抗肿瘤活性研究

目的制备姜黄素前体药物,使其在肿瘤细胞内高选择性活化,为进一步开展肿瘤靶向性化疗奠定基础。方法以姜黄素分子结构为基础,化学合成N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素、N-马来酰-甘氨酸酯姜黄素,红外光谱法进行鉴定;MTT比色分析法比较两种姜黄素前体药物作用6~24 h后,人膀胱癌EJ细胞及肾小管上皮HKC细胞生长抑制的差异。结果20~40μmol.L-1的N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素、N-马来酰-甘氨酸酯姜黄素作用6~24 h后,EJ细胞生长抑制率分别为6.71%~65.13%(P<0.05)、10.96%~73.01%(P<0.05),呈浓度、时间依赖性。与同浓度姜黄素比较,两种前体药物对HKC细胞生长的抑制作用均降低(P<0.01)。结论本研究成功的合成了两种姜黄素的前体药物,N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素、N-马来酰-甘氨酸酯姜黄素;二者均能体外抑制人膀胱癌EJ细胞增殖,其对人肾小管上皮HKC细胞的抑制毒性作用低于姜黄素。     

γ-干扰素对姜黄素抑制HL-60细胞增殖的影响

目的：为研究在姜黄素作用下,基因重组干扰素γ（rh-ＩＦＮ－γ）对白血病细胞杀伤能 力的影响。方法：选用ＨＬ－６０细胞系,采用细胞培养、ＳＡＢＣ法测定Ｂrdu摄取率? 流式细胞仪检测及末端ＴdＴ酶标技术。结果：发现姜黄素抑制细胞增殖作用随浓度增加而逐渐增加,在２５umol/：浓度体外处理ＨＬ－６０细胞２４小时后,增殖抑制率为４３． ７５％±２．００％,ＩＦＮ－γ使这种作用明显提高,增殖抑制率增至８０％。进一步分     

Preparation of Curcumin Prodrugs and Their in Vitro Anti-tumor Activities

The curcumin prodrugs, which could be selectively activated in tumor cells, were prepared to establish a basis for the targeted chemotherapy for cancer. On the basis of the molecular structure of curcumin, the N-maleoyl-L-valine-curcumin （NVC）, N-maleoyl- glycine-curcumin （NGC） were chemically synthesized and identified by IR and NMR spectroscopy. After treatment with these two prodrugs for 6--24 h, the rates of growth inhibition on human bladder cancer EJ cells and renal tubular epithelial （HKC） cells were detected by MTT colorimetry. Our results showed that after the treatment with 20 μmol/L--40 μmol/L NVC and NGC for 6--24 h, the growth inhibitory effects on EJ cells were 6.71%-65.13 % （P〈0.05）, 10. 96 %-73.01 % （p〈0. 05）, respectively, in both dose- and time-dependent manners. When compared with the curcumin of same concentrations, the growth inhibitory effects of these two prodrugs on HKC cells were significantly decreased （P〈0.01）. It is concluded that activation of curcumin prodrugs via hydrolysis functions of cellular esterase could inhibit the growth activities of tumor cells, and reduce the side effects on normal diploid cells. This provided a novel strategy for further exploration of tumor targeted chemotherapeutic drugs.