细胞移植研究用大鼠心肌梗死动物模型的建立

目的探索大鼠左冠状动脉前降支(LAD)结扎处理的适宜方法,建立适合细胞移植研究的稳定、可靠的急性心肌梗死(AMI)动物模型。方法14只SD大鼠麻醉满意后,在动物呼吸机的支持下打开胸腔,于LAD中上1/3处结扎,并在结扎前后通过多外围设备转接器(MPA)生物信号分析系统连续监测心电图;4周后再次开胸取出心脏,利用Langendorff离体心脏灌流MPA系统检测左室收缩压(LVSP)左室舒张末压(LVEDP)左心室内压力上升及下降的最大变化速率(±dp/dtmax)等左室心功能指标:并测定心肌组织病理形态学、心肌梗死面积(MIS)等评价AMI模型的建立情况。另选仅开、关胸后存活的10只大鼠作为对照组。结果造模成功率为71.43%(10/14);心电图动态监测在LAD结扎后出现ST-T抬高的融合波,30min后可见Q波;4周后Langendorff离体心脏灌流MPA系统检测显示LVSP、±dp/dtmax等指标较对照组显著降低,LVEDP则明显升高(P<0.01);病理组织切片可见结扎区域心肌纤维排列紊乱、肌丝断裂溶解、细胞核固缩甚至碎裂、间质充血水肿、有炎性细胞浸润、坏死心肌被纤维组织取代:且MIS变化较恒定(44.38%±8.04%)。结论通过结扎LAD,于4周后能够形成梗死部位和MIS稳定的AMI模型,适合于移植细胞再生修复梗死心肌的研究。     

MyoD和Cx43基因转染成纤维细胞后心肌移植治疗大鼠心肌梗死的实验研究

目的将生肌调节因子(MyoD)基因和间隙连接蛋白43(Cx43)基因体外转染真皮成纤维细胞(DFs)后,自体移植到大鼠心肌梗死区内,观察其在宿主体内生长、增殖情况及对心肌结构和心功能的影响。方法选取急性心肌梗死(AuI)模型制备成功的50只SD大鼠随机分入AMI对照组、DFs移植组、Cx43移植组、MyoD移植组和MyoD／Cx43移植组(n=10)。4周后进行细胞移植实验:①AMI对照组:取100μL细胞培养液基质植入到梗死心肌瘢痕组织中;②DFs移植组:在梗死心肌瘢痕组织中植入100μL用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记未经基因转染的DFs细胞悬液;③Cx43移植组:在梗死心肌瘢痕组织中植入100μL用BrdU标记经Cx43基因转染DFs(Cx43-DFs)的细胞悬液;④MyoD移植组:在梗死心肌瘢痕组织中植入100μL用BrdU标记经MyoD基因转染DFs (MyoD-DFs)的细胞悬液;⑤MyoD／Cx43移植组:在梗死心肌瘢痕组织中植入100μL用BrdU标记经MyoD和Cx43基因联合转染DFs(MyoD／Cx43-DFs)的细胞悬液,以上各组移植细胞密度均为2．0×106／mL。另选假手术组8只仅开胸而不缝扎,不作任何注射,作为正常对照组。在细胞移植前和移植后4周内观察心电图(ECG)和血浆脑钠素(BNP)浓度的变化;于移植4周后采用Langendorff离体心脏灌流和多外围设备转接器(MPA)信号采集分析系统评价大鼠左心室功能;染色法测定心肌梗死面积(MIS);应用免疫组化技术检测BrdU标记移植细胞存在及connexin43蛋白分布的情况;并通过透射电子显微镜观察移植区细胞的超微结构和缝隙连接形成情况。结果细胞移植术后,AMI对照组死亡2只、DFs移植组死亡1只、Cx43移植组死亡1只、MyoD移植组死亡2只、MyoD／Cx43移植组死亡1只,最终进入结果分析确定为每组8只。细胞移植术后4周, MyoD／Cx43移植组MIS为(25．05±4．44)％,低于MyoD移植组的(34．65±4．55)％、Cx43移植组的(41．92±6．64)％及DFs移植组的(42．61±4．17)％。MyoD／Cx43-DFs心肌移植可改善AMI大鼠的心功能,在降低血浆BNP浓度的同时,改善心电图异常程度,MyoD／Cx43移植组大鼠ECG II导联监测可观察到ORS波变窄、R波相对升高及ST段回到基线。Langendorff离体心脏灌流及MPA信号采集分析系统检测心功能显示:MyoD／Cx43移植组左心室最高收缩压(LVPSP)、左心室内压力上升的最大变化速率( dp／dtmax)均高于MyoD移植组、Cx43移植组及DFs移植组[ LVPSP: (14．32±1．10)、(12．76±0．49)、(11．43±0．84)、(11．23±0．83)kPa]: dp／dtmax: (673．83±15．23)、(579．53±13．02)、(462．12±11．76)、(466．81±14．58)kPa],左心室内压力下降的最大变化速率(-dp／dtmax)低于MyoD移植组、Cx43移植组及DFs移植组[ (569．44±15．78)、(504．99±15．41)、(361．72±12．34)、(367．03±9．79)kPa／s],左心室舒张末期压(LVEDP)也呈现低于MyoD移植组、Cx43移植组及DFs移植组[(0．28±0．12)、(0．28±0．13)kPa比(1．29±0．18)、(1．40±0．29) kPa]的趋势。免疫组化检测结果显示心肌瘢痕区边缘有BrdU阳性细胞存在和connexin43蛋白分布;电子显微镜观察在MyoD／Cx43移植组可见心肌移植区细胞间有缝隙连接形成。结论MyoD和Cx43基因联合转染DFs后自体心肌移植能够在宿主体内生长、增殖,并可在一定程度上减轻心肌梗死大鼠左室重构的进程、改善心功能,且这种经心外膜途径移植是安全可行的,为AMI的治疗提供一条行之有效的新途径。     

DADLE预处理对体外循环心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的通过建立猪体外循环(card iopu lmonary bypass,CPB)心肌缺血再灌注模型,探讨δ-阿片受体激动剂脑腓肽([D-A la2,D-Leu5]Enkephalin,[D-A la2,D-Leu5],DADLE)的心肌保护作用。方法将12只成年猪(30~35kg)随机分为对照组(常规CPB)(n=6)和DADLE组(CPB前1 h静脉应用DADLE,1 mg/kg)(n=6)。常规建立体外循环模型,主动脉阻断同时灌注改良st.Thom as停搏液。每组于CPB前、主动脉开放时、CPB结束时、主动脉开放后1 h、主动脉开放后2 h检测冠状静脉窦血肌钙蛋白(TnT)和肌酸激酶同功酶(CK-MB)含量,相应时间点监测左室收缩压(LVSP),左室舒张末期压(LVEDP)、左室内压最大变化速率(±dp/±dtm ax),主动脉开放后2 h取左心室心肌,测定心肌ATP含量。结果(1)和预处理组相比,对照组心功能指标明显下降;(2)对照组的TnT和CK-MB较预处理组明显升高,相反,其ATP含量明显降低。结论在猪心肌缺血再灌注中,非选择性δ-阿片受体激动剂DADLE具有明显的心肌保护作用。     

国产植入型心室辅助装置的实验研究

目的研究国产植入型心室辅助装置的本身特点及其对实验动物血流动力学、炎症因子等血液学指标的影响,并观察其辅助性能及生物相容性,为以后的研究提供理论依据。方法本实验以小牛为实验对象,麻醉后,左侧第五肋间进胸,建立体外循环,心脏诱颤,植入国产心室辅助装置,心室辅助装置辅助循环12 h后终止实验。分别于植入前、植入后0.5 h、1 h、4 h、8 h、12 h抽血检测WBC、PLT、ALT、AST、LDH、Bun、Cr、FHb、TBiL及炎症因子IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α(酶联免疫吸附检测法),并记录血压、心率、中心静脉压、心排量及泵体转速、流量、功率等指标。结果通过实验我们发现,与术前比较,术后血流动力学变化无显著性差异(P>0.05)。血液学方面,除WBC显著升高及PLT明显下降外(P<0.05),其余生化指标在术后均无明显变化(P>0.05)。而炎症因子在术后都明显升高(P<0.05),并于4 0h达到峰值(P<0.01),但其在4 h后呈下降趋势,趋于降至术前水平。实验同时也证实该国产心室辅助装置流量、功率与转速成正比关系。结论通过研究表明该国产心室辅助装置尺寸小、重量轻、噪音低、效率高、成本低、便于控制和监测,有较好的辅助性和生物相容性。     

滚压泵在乳猪肺灌注模型建立中的应用

目的 通过滚压泵建立一种操作简单的猪隔离肺持续灌注和缺血再灌注模型,并比较两种灌注方法对肺的损伤.方法 12只乳猪随机分为缺血再灌注组 (对照组) 和持续灌注组 (实验组).分别在左、右心耳以及肺动脉插管.滚压泵将贮血器中的灌注液泵入肺动脉,灌注双肺后再通过左心耳将灌注液引流回贮血器,建立猪肺灌注模型.对照组双肺停止灌注90 min后灌注30 min,实验组双肺持续灌注120 min,灌注流量均为80 mL/kg*min.测定实验前后的肺静态顺应性以及灌注液中TNF-α、IL-6变化.测定肺组织湿干比并进行电镜观察.结果 实验组肺静态顺应性 (实验组6.14±1.17 mL/cm H2O,对照组7.89±0.94 mL/cm H2O, p=0.017)、湿干比 (对照组5.18±0.97, 实验组3.84±1.08, P=0.048)、TNF-α指标均优于对照组 (实验组0.80±0.26 ng/mL, 对照组0.52±0.15 ng/mL, P=0.044) (P<0.05),电镜下的肺损伤程度轻于对照组.结论 通过滚压泵建立猪肺持续灌注和缺血再灌注模型具有操作简便的特点.持续性非搏动灌注较之缺血再灌注对肺的损伤更轻.     

腺苷预处理对大鼠心脏移植缺血再灌注损伤心肌的保护作用

目的 探讨腺苷(adenosine, Ado)预处理在心脏移植缺血再灌注损伤的保护作用.方法 健康雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠40只,建立大鼠同系异位心脏移植模型.随机分为3组:假手术组、对照组、实验组(供体心在获取前15min给予Ado预处理后4℃改良St. Thoms液10mL.主动脉根部灌注停跳).术后5h测定血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)含量,电镜观测心肌细胞超微结构变化.结果 实验组MDA、 CK-MB明显减少(P<0.01), SOD明显增加(P<0.01),心肌超微结构改变明显减轻.实验组的移植心脏存活时间较对照组明显延长[(22.1±2.9)d vs (12.0±1.8)d, P<0.01)].结论 Ado预处理对心脏移植缺血再灌注损伤有保护作用,使受者的移植心脏存活期延长.     

人工心脏临床应用研究

Objective: To summarize practical experiences of clinical application of artificial heart and discuss itsindications and prevention of complications. Methods: Before operation, all the four patients underwent regulartreatment of internal medicine, and after its failure they were implanted with artificial hearts. Operations were per-formed under genera1 anesthesia and external circulation at low temperature. Left ventricle assistant devices(LVAD) were used for three patients, and double ventricle assistant device (DVAP) for one. Two patients wereembeded with Berlin artificial hearts (Melipot company). The other two were implanted with Medos artificial hearts(Medos company). Results: All the patients had no infection and haemorrhage, while their cardiac functions were re-     

肝素涂层管道对体外循环中血小板的保护作用

目的：探讨常规剂量肝素体外循环（CPB）下使用肝素涂层CPB管道（HCC）对血小板的影响。方法：机械瓣膜置换术患者随机分为HCC组（n=8）和对照组（n=15）。分别在CPB前、CPB60min、肝素中和后30、60min及手术后12h测定血小板计数（PLT），血浆α颗粒膜蛋白－140（GMP－140）的浓度及手术后12h出血量。利用电子显微镜观察两组转流后微栓过滤网上沉积物的附着情况。结果；对照组PLC在转流中、后显著低于HCC组，差异有显著性（P＜0．05），且血浆GMP－140浓度在转流60min、转流中和后30、60min显著高于HCC组，差异有显著性（P＜0．05），但手术后12h差异无显著性（P＞0．05）；HCC组手术后12h出血量较对照组少，差异有显著性（P＜0．05）；HCC组动脉过滤网表面光洁，网眼边缘清晰，偶见白细胞和血小板附着；对照组动脉过滤网表面可见纤维蛋白沉积，网眼边缘模糊，有大量白细胞及少数活化血小板粘附。结论：HCC在CPB中对血小板具有保护作用，较好地改善CPB装置的血液相容性。     

上海市高行社区老年人群糖尿病前期的患病率及其危险因素的调查分析

目的 调查上海老年人群糖尿病以及糖尿病前期的患病率情况,并探索导致其高发的危险因素。方法 采用整群抽样以及回顾性调查分析,采用多元回归模型探讨导致空腹血糖升高的危险因素。结果 共有3950名研究对象参与了本次研究,其中男性1745名,女性2205名。偏相关分析提示: 空腹血糖水平与BMI呈现出中等程度的相关性(偏相关系数为0.20,P<0.05);与SBP、DBP、AST、hs-CRP呈现弱相关性(P<0.05);与HDL、UA及Cr存在负相关性。Logistic回归模型提示: 老年、肥胖、较高的收缩压、较低的HDL水平及较低的Cr水平是导致糖尿病前期发生的高危因素,其对应的OR值分别是1.01、1.66、1.01、0.47和0.99。结论 上海高行社区老年人群中达到糖尿病前期状态的人群患病率为23.50%。老年、肥胖、较高的收缩压及较低的HDL水平是导致糖尿病前期发生的高危因素。     

吸入米力农对油酸诱导大鼠急性肺损伤的作用

摘要：目的 观察超声雾化吸入米力农对油酸诱导大鼠急性肺损伤（acute lung injury，ALI）的影响。方法 采用静脉注射油酸复制ALI大鼠模型。将40 只SD 大鼠随机分为4 组:对照组（I组）、ALI组（II组）、米力农雾化吸入高剂量组（III组）和米力农雾化吸入低剂量组（IV组）。实验过程中每隔60分钟记录大鼠血压（BP）、肺动脉压（PAP），测定动脉血气和混合静脉血气。注射油酸240分钟后检测肺湿干比(W/D)、髓过氧化物酶（myeloperoxidase，MPO），并且对肺组织进行光镜和电镜观察。结果 超声雾化吸入米力农组中由于注射油酸引起的PAP升高、肺内分流(Qs/Qt)增加和PaO2/FiO2下降均得到缓解，高剂量组更为明显。各治疗组肺W/D 和MPO均比对照组降低，高剂量组更为明显。光镜和电镜观察III、IV组肺损伤有不同程度改善。 结论 米力农雾化吸入能够缓解油酸引起的低氧血症，有效改善ALI多项指标。其对ALI的治疗作用具有剂量依赖性。